利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系

利用CRIS-PITCh系统构建原位表达CEP290-EGFP的细胞系

论文摘要

初级纤毛是一种存在于脊椎动物大多数细胞表面的细胞器,主要参与胚胎发育和传导胞外信号。在纤毛生长的过程中,过渡区关键蛋白CEP290主要定位在中心体上,而CEP290表达或定位异常影响初级纤毛的结构和功能。实验基于一种新型基因敲入技术——CRIS-PITCh系统,通过微同源介导末端连接方法,以实现将绿色荧光蛋白EGFP编码序列插入CEP290基因中,最终构建融合表达CEP290-EGFP蛋白的人视网膜色素上皮细胞系。因此,可以通过荧光成像直接观察内源CEP290的动态定位,为今后进一步研究CEP290的功能提供更好的工具和方法。

论文目录

  • 1 实验材料及来源
  •   1.1 主要试剂
  •   1.2 主要仪器
  • 2 实验方法
  •   2.1 CRISPR-Cas9载体的构建
  •   2.2 CRIS-PITCh (v2) donor载体的构建
  •   2.3 细胞转染
  •   2.5 免疫荧光
  • 3 实验结果
  •   3.1 CRISPR-Cas9载体的构建
  •   3.2 CRIS-PITCh (v2) donor载体的构建
  •   3.3 CEP290-EGFP融合蛋白表达检测
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 周士博,胡怀斌,涂海情,李慧艳

    关键词: 初级纤毛,系统,视网膜色素上皮细胞

    来源: 科学技术与工程 2019年11期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 军事医学研究院生物医学分析中心

    基金: 国家自然科学基金(81790252)资助

    分类号: Q78

    页码: 35-39

    总页数: 5

    文件大小: 313K

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