猪圆环病毒2型Cap蛋白原核表达载体的构建、表达及蛋白纯化

论文摘要

为了表达并纯化猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2,PCV-2）Cap蛋白,试验将ORF2基因的密码子改造为大肠杆菌嗜好的密码子,但编码的氨基酸序列不变。合成优化后将ORF2基因全部基因序列,克隆于pET-30a原核表达载体并转化至大肠杆菌BL21中,经PCR和测序鉴定阳性克隆后,采用IPTG诱导表达目的蛋白。优化蛋白表达条件,采用Ni-NTA亲和层析胶纯化目的蛋白。结果表明:基因序列合成正确,无点突变。重组质粒成功转化入大肠杆菌BL21中,经诱导表达出现约37 ku的蛋白条带,与预期分子量大小一致。优化表达条件后,加入终浓度为1.2 mmol/L IPTG诱导6 h,表达产物含量最高。经Western-blot检测,能被PCV-2抗体阳性血清结合。说明成功构建了PCV-2 Cap蛋白的原核表达质粒pET-30a-ORF2,优化了表达条件并纯化出目的蛋白。

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类型: 期刊论文

作者: 刘玉伟,辛长勋,孙盼盼,王硕,高梅,时建立,彭喆,吴晓燕,王永明,李俊

关键词: 猪圆环病毒型,蛋白,原核表达,优化条件,纯化

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年24期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 山东师范大学生命科学学院,山东省农业科学院畜牧兽医研究所,青岛农业大学动物科技学院,山东华宏生物工程有限公司

基金: “十三五”重点研发计划子课题项目(2016YFD0500708),山东省现代农业产业技术体系疫病控制岗位项目(SDAIT-08-07),山东省农业科学院农业科技创新工程项目(CXGC2016B14)

分类号: S852.651

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2019.01.0337

页码: 68-71

总页数: 4

文件大小: 219K

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标签：猪圆环病毒型论文;  蛋白论文;  原核表达论文;  优化条件论文;  纯化论文;