窦永青[1]2017年在《SIRT1延缓小鼠下肢缺血后血流恢复的机制研究》文中指出正常组织功能的维持依赖于血管供氧和营养物质。组织缺血后血流恢复速度取决于血管新生和动脉生成过程。沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一类依赖于NAD的去乙酰化酶,广泛参与调节细胞生理活动和病理过程。有报道发现SIRT1通过抑制肿瘤血管新生而降低肿瘤生长,然而其对动脉生成的作用还不十分清楚,本研究旨在探寻SIRT1对动脉生成的调节及机制。目的:本研究以Sirt1转基因(Sirt1-transgenic,Sirt1-Tg)小鼠和血管平滑肌细胞作为研究对象,通过建立下肢缺血模型和低氧诱导模型,试图从体内外证实SIRT1在动脉生成中的作用,并探讨其作用机制,以期为揭示缺血及缺血相关心血管疾病的发生机制提供研究证据。方法:利用Sirt1-Tg小鼠建立股动脉结扎下肢缺血模型,评价SIRT1与组织缺血后血流恢复的关系;应用SIRT1激动剂和抑制剂进一步验证血流恢复与SIRT1活性的关系;利用免疫荧光染色分析缺血下肢腓肠肌毛细血管和小动脉密度;利用内皮细胞增殖、迁移、成管等体外实验和基质胶塞、伤口愈合、视网膜铺片等体内实验,确定SIRT1活性和血管新生的关系;利用蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀和免疫沉淀等技术,从蛋白质相互作用、蛋白质修饰的角度探讨SIRT1对动脉生成的关键因子血小板衍生生长因子B(platelet-derived growth factor B,PDGFB)表达的调节及其分子机制。结果:1 SIRT1激活抑制小鼠下肢缺血后血流恢复1.1 Sirt1-Tg小鼠下肢缺血后血流恢复延迟为了探究SIRT1对组织缺血后血液灌注恢复的影响,小鼠进行股动脉结扎建立下肢缺血模型,采用激光散斑对比分析技术监测下肢血流恢复情况。与WT(wild-type,WT)小鼠比较,Sirt1-Tg小鼠血流恢复明显延迟,SIRT1抑制剂EX527腹腔注射使转基因小鼠血流恢复明显改善。1.2 SIRT1激活抑制小鼠下肢缺血后血流恢复复制小鼠下肢缺血模型,于不同时间点腹腔注射SIRT1激动剂白藜芦醇(resveratrol,RSV)。结果显示,延长用药时间可加重血流恢复的延迟;反之,SIRT1抑制剂EX527可加快小鼠缺血下肢的血流恢复速度。结果表明,SIRT1激活抑制小鼠下肢缺血后血流恢复。1.3 Sirt1-Tg小鼠下肢缺血后腓肠肌动脉生成能力降低为了识别毛细血管和小动脉,在小鼠股动脉结扎后14天,使用CD31(内皮细胞标志物)和平滑肌(smooth muscle,SM)α-actin(平滑肌细胞标志物)抗体对腓肠肌组织切片进行免疫荧光染色。结果显示,Sirt1-Tg小鼠下肢缺血侧腓肠肌组织毛细血管密度(CD31阳性区)和SMα-actin阳性的小动脉密度明显低于WT小鼠,壁细胞(NG2阳性)的比例也显着下降。结果表明,SIRT1激活抑制小鼠下肢缺血后动脉生成。2 SIRT1抑制血管新生2.1 SIRT1激活抑制内皮细胞增殖和成管功能为了探究SIRT1激活对内皮细胞功能的影响,低氧处理RSV或EX527预孵育的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)以及小鼠内皮细胞,结果显示,SIRT1激活抑制两种内皮细胞的增殖活性;SIRT1过表达抑制小鼠内皮细胞的迁移。为了进一步验证SIRT1在血管新生中的作用,采用基质胶进行内皮细胞体外成管实验,RSV预孵育的HUVEC成管能力降低。结果表明,SIRT1激活可抑制内皮细胞增殖、迁移和成管能力。2.2体内SIRT1过表达抑制血管新生为了探究体内SIRT1活性对血管新生的影响,将含有血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的基质胶植入WT和Sirt1-Tg小鼠皮下,发现Sirt1-Tg小鼠的基质胶塞中的血管扩张和壁细胞(NG2阳性)覆盖降低。并且Sirt1-Tg小鼠的伤口愈合延迟。为进一步验证SIRT1对血管新生的抑制作用,分析出生5天小鼠视网膜毛细血管,发现Sirt1-Tg小鼠视网膜毛细血管分支点的数目及血管长度明显低于WT小鼠;用SIRT1激活剂RSV腹腔注射的新生WT小鼠,其视网膜血管新生受到明显抑制,而应用SIRT1抑制剂EX527处理的小鼠其视网膜血管新生与未处理的对照组比较增强。结果显示,激活SIRT1可抑制血管新生过程。2.3 SIRT1抑制内皮细胞Wnt/β-catenin信号通路和VEGFA表达VEGFA是Wnt/β-catenin信号通路的靶基因之一,在血管新生中发挥重要作用。小鼠股动脉结扎,Western blot检测双下肢腓肠肌,结果显示,Sirt1-Tg小鼠VEGFA表达缺血侧与对照侧的比值明显低于WT小鼠,β-catenin及其上游的DVL3表达水平降低,与VEGFA一致。RSV预孵育的HUVEC,低氧诱导后,VEGFA、β-catenin和DVL3的表达(低氧与常氧的比值)显着低于对照组;反之,EX527预孵育以抑制SIRT1活性,叁种蛋白的表达增加。结果表明,SIRT1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路继而下调VEGFA的表达。3 SIRT1通过抑制低氧诱导的血管平滑肌细胞PDGFB表达阻碍动脉生成3.1 SIRT1抑制缺血诱导的PDGFB表达为了探究Sirt1-Tg小鼠下肢缺血后动脉生成障碍的分子机制,检测PDGFB表达和ERK活化。Western blot分析显示,Sirt1-Tg小鼠腓肠肌PDGFB表达缺血侧/对照侧比值明显低于WT小鼠,同时p-ERK的比值也显着降低;定量RT-PCR显示,Sirt1-Tg小鼠腓肠肌PDGFB m RNA表达的比值(缺血侧/对照侧)较WT小鼠显着下降。然而,Sirt1-Tg小鼠腹腔注射EX527则可逆转这一现象。说明抑制SIRT1活性可促进缺血诱导的PDGFB表达和信号转导活性。3.2 SIRT1抑制低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)介导的PDGFB基因转录HIF-1α参与动脉生成。为探究SIRT1抑制PDGFB表达的机制,低氧处理WT小鼠VSMC。结果显示,HIF-1α表达与PDGFB蛋白和m RNA水平成正相关。为了进一步确定HIF-1α参与缺血诱导的PDGFB表达调节,基于PDGFB基因中含有HIF-1α结合位点进行Ch IP分析。结果显示,HIF-1α与PDGFB增强子序列(HBS1)结合活性在低氧诱导后明显增加;构建包含HIF-1α结合位点的的荧光素酶报告基因质粒,转染293T细胞,结果显示,低氧诱导的荧光素酶表达活性升高。过表达SIRT1,则抑制HIF-1α与PDGFB基因HBS1增强子的结合;激活SIRT1(RSV预孵育),同样抑制低氧诱导的荧光素酶报告基因活性;反之,抑制SIRT1活性(EX527预孵育)则促进低氧诱导的荧光素酶表达。结果表明,SIRT1抑制低氧诱导的HIF1α激活及其介导的PDGFB基因转录。3.3 SIRT1介导HIF1α的去乙酰化失活为了探究SIRT1抑制HIF-1α介导的PDGFB表达的分子机制,免疫沉淀分析HIF-1α乙酰化水平。结果显示,低氧可诱导VSMC中HIF-1α乙酰化;过表达或激活SIRT1可降低低氧诱导的HIF-1α乙酰化,同时PDGFB蛋白表达降低;反之用EX527抑制SIRT1活性则可逆转HIF-1α的去乙酰化和PDGFB表达的降低。为了进一步验证SIRT1介导HIF-1α的去乙酰化失活,进行免疫共沉淀检测SIRT1与HIF-1α的相互作用。结果显示,低氧时SIRT1与HIF-1α的相互作用减弱;过表达或激活SIRT1,二者的相互作用增强,而抑制SIRT1活性二者的相互作用减弱。结果表明,SIRT1介导的HIF-1α去乙酰化失活可抑制缺氧诱导的PDGFB基因表达。结论:1 SIRT1激活抑制小鼠下肢缺血后动脉生成,导致下肢血流恢复延迟。2 SIRT1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路而下调VEGFA表达,进而抑制内皮细胞增殖和血管新生。3 SIRT1介导的HIF-1α去乙酰化失活可抑制缺氧诱导的PDGFB表达和动脉生成。
佚名[2]2003年在《中华病理学杂志2003年第32卷主题词索引》文中指出说明 :(1)本索引按汉语拼音字母顺序排列 ,同主题词的文章按页码顺序排列。 (2 )在汉字相同的情况下 ,按数字、英文字母、希文字母顺序先后排列。 (3)缩略语及未译出的原文按英文字母顺序排列在各 (字母 )部之首。 (4)文题、作者后括号内数字为期号
王德权, 吕佳, 王源, 刘可智, 李素霞[3]2019年在《物质成瘾与昼夜节律相互关系的研究进展》文中研究指明药物成瘾是一个突出的社会问题,给家庭和社会带来了巨大损失。然而其发生机制尚不完全清楚,近年来,在众多机制假说中生物节律机制的研究越来越受到关注。本文将以可卡因为例,从其体内代谢过程、对人体危害、作用机制,到昼夜节律系统、以及物质成瘾和昼夜节律两者相互关系的研究进展,做一详细综述。
白晓丽, 武鸿儒, 刘晶, 韩雪鸿, 高晓芳[4]2019年在《脂联素通过TGF-β_1/Smads信号通路对2型糖尿病大鼠心肌病变的保护作用》文中指出目的 观察脂联素(APN)对2型糖尿病(T2DM)模型大鼠心肌细胞转化生长因子β_1/信号传导蛋白(TGF-β_1/Smads)通路的干扰,揭示2型糖尿病心肌病心肌纤维化的发病机制。方法 分为普通对照组(NC,20只)、模型组(70只)。模型组采用高脂高糖饮食加腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)建立T2DM模型。将造模成功的大鼠继续喂养12周后分为脂联素注射组(DA组,30只)、2型糖尿病心肌病组(DCM组,31只)。脂联素注射组大鼠腹腔注射APN 10μg/kg,2型糖尿病心肌病组和正常对照组大鼠注射同等剂量生理盐水。3组分别于注射4周末、8周末、12周末取大鼠开始测验。心脏彩超测量心脏功能,RT-PCR测定相关因子mRNA含量,Western blot法检测相关因子蛋白表达。结果 在各时间段中,与NC组相比,DCM组大鼠心重指数增加,心功能明显下降,脂联素干预后心功能好转;Western blot结果显示,各时间段中,与NC组相比,DCM组心肌组织TGF-β_1、Smad3表达增加,脂联素干预后DA组二者表达较DCM组减少,且呈时间依赖性;2型糖尿病心肌病组Smad7表达明显比普通对照组降低,球形脂联素注射后表达明显比2型糖尿病心肌病组升高,且呈时间依赖性增加。结论 APN可能通过抑制TGF-β_1/Smads信号通路,改善心功能,对2型糖尿病大鼠心肌病变有保护作用。
李晓丹, 丛金鹏, 于洁, 于文成[5]2019年在《益气化痰通络法对大鼠肺纤维化的作用及其机制》文中进行了进一步梳理目的 通过检测博来霉素诱导的肺纤维化大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及窖蛋白1(Cav-1)的表达,探讨益气化痰通络法的抗纤维化作用及其机制。方法 将大鼠随机分为正常组(n=15)和造模组(n=90),造模组造模成功后随机分为NaCl组、中药煎剂组、泼尼松组、乙酰半胱氨酸组、罗红霉素组、吡啡尼酮组,各15例。各组分别于造模成功后第15、30、45天处死大鼠,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织纤维化程度,ELISA法检测肺组织中的羟脯氨酸、血清TGF-β1和MMP-2含量,RT-PCR方法检测肺组织Cav-1mRNA表达,Western Blot方法检测肺组织Cav-1蛋白表达。结果 同一时间点各造模组与正常组相比,大鼠肺纤维化程度加重,肺组织羟脯氨酸含量、血清TGF-β1和MMP-2含量均升高(F=978.25～224 007.50,P<0.05);并且随着时间进展逐渐升高,差异有统计学意义(F=21.55～9 624.52,P<0.05);中药煎剂组与乙酰半胱氨酸组、罗红霉素组比较,肺纤维化程度明显减轻,肺组织中的羟脯氨酸及血清TGF-β1和MMP-2含量均减少(F=324.55～5 576.36,P<0.05);中药煎剂组与泼尼松组、吡啡尼酮组各时间点肺组织的羟脯氨酸及血清TGF-β1和MMP-2含量比较,差异无显着性(P>0.05)。与正常组相比,各造模组大鼠Cav-1 mRNA及蛋白含量均显着降低(F=13.50～270.11,P<0.05);并且随着时间进展逐渐降低,差异有统计学意义(F=11.25～23.43,P<0.05);中药煎剂组与乙酰半胱氨酸组、罗红霉素组比较,Cav-1mRNA及蛋白含量升高(F=5.26～154.13,P<0.05);中药煎剂组与泼尼松组、吡啡尼酮组相比Cav-1mRNA及蛋白含量差异无显着性(P>0.05)。结论 益气化痰通络法可能通过下调TGF-β1和MMP-2、上调肺组织Cav-1的表达抑制博莱霉素诱导的肺纤维化。
焉晓乘, 刘元涛[6]2019年在《CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病胰岛素抵抗研究进展》文中进行了进一步梳理糖尿病(DM)是威胁人类健康的非传染性疾病之一,我国糖尿病患病率显着增加,且发病有年轻化趋势。胰岛素抵抗(IR)与胰岛功能减退是2型糖尿病等代谢性疾病的病理基础。导致IR的病因众多,包括遗传学因素以及肥胖、药物等环境因素。细胞色素P450s表氧化酶(CYP450)与其代谢产物环氧-二十碳叁烯酸(EETs)在肥胖、IR等方面发挥重要作用。本文就CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病IR的研究进展作一综述。
李想, 李冀[7]2019年在《甘草提取物活性成分药理作用研究进展》文中提出甘草性平味甘,归脾、胃、心、肺经,为临床常用药,具有补中益气、润肺止咳、清热解毒、缓急止痛、调和诸药之功。甘草提取物主要活性成分包括甘草皂苷类的甘草皂苷、甘草酸、甘草次酸,甘草黄酮类的甘草总黄酮、甘草苷、异甘草素、光甘草定,以及甘草多糖。近期的研究集中在甘草活性成分的抗肿瘤、抗炎杀菌、抗病毒、保肝、抗心肌缺血、抗纤维化等药理作用方面,而对于抗氧化、抗动脉粥样硬化和神经保护作用等的药效物质基础及作用机制还有待进一步研究,甘草其他有效成分及其综合作用的研究也还需要加强。
参考文献：
[1]. SIRT1延缓小鼠下肢缺血后血流恢复的机制研究[D]. 窦永青. 河北医科大学. 2017
[2]. 中华病理学杂志2003年第32卷主题词索引[J]. 佚名. 中华病理学杂志. 2003
[3]. 物质成瘾与昼夜节律相互关系的研究进展[J]. 王德权, 吕佳, 王源, 刘可智, 李素霞. 中国药物依赖性杂志. 2019
[4]. 脂联素通过TGF-β_1/Smads信号通路对2型糖尿病大鼠心肌病变的保护作用[J]. 白晓丽, 武鸿儒, 刘晶, 韩雪鸿, 高晓芳. 中西医结合心脑血管病杂志. 2019
[5]. 益气化痰通络法对大鼠肺纤维化的作用及其机制[J]. 李晓丹, 丛金鹏, 于洁, 于文成. 青岛大学学报(医学版). 2019
[6]. CYP450-EETs代谢途径与肥胖诱导2型糖尿病胰岛素抵抗研究进展[J]. 焉晓乘, 刘元涛. 青岛大学学报(医学版). 2019
[7]. 甘草提取物活性成分药理作用研究进展[J]. 李想, 李冀. 江苏中医药. 2019