导读:本文包含了融合基因疫苗论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:疫苗,基因,蛋白,激素,布鲁氏菌,血凝素,免疫。
融合基因疫苗论文文献综述
成璐[1]（2018）在《布鲁氏菌L7/L12-Omp16融合基因不同亚单位疫苗的构建及其免疫原性分析》一文中研究指出布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella.app)引起的人畜共患病,流行较广,危害巨大,主要造成波状热和慢性感染,引起流产和不孕不育,严重危害了人类健康和畜牧业发展。目前研究较多的布鲁氏菌疫苗主要有灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗,但灭活疫苗引起免疫效果差,减毒活疫苗又存在接种后出现强烈副反应、免疫与感染的难以鉴别,以及个别情况下出现菌毒回升等缺点,因此寻找有效的布鲁氏菌亚单位疫苗已成为研究重点。本研究通过PCR扩增得到L7/L12和Omp16基因片段,构建了原核表达质粒pET-28a-L7/L12和pET-28a-Omp16,经IPTG诱导表达后得到rL7/L12蛋白和rOmp16蛋白。Overlap PCR扩增L7/L12-Omp16融合基因片段,构建真核表达质粒pVAX1-L7/L12-Omp16,转染293T细胞后进行间接免疫荧光检测,结果显示,该DNA疫苗可在真核细胞中高效表达。同时,构建pMV306-L7/L12-Omp16重组质粒,电转化至BCG感受态细胞制备重组BCG载体疫苗,Western Blot验证结果表明,L7/L12-Omp16融合蛋白能在BCG中正确表达。将基于L7/L12和Omp16蛋白的重组蛋白疫苗、DNA疫苗和载体疫苗采用不同免疫方案对BALB/c小鼠进行免疫,进行免疫原性分析。通过ELISA检测血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平,结果表明DNA-Protein组的抗体效价最高,rBCG组和rBCG-DNA组的抗体效价较低,说明DNA-Protein的免疫策略能增强机体的体液免疫应答水平,而载体疫苗诱导机体产生的体液免疫水平较弱。对小鼠脾淋巴细胞进行CCK-8和Proliferation Dye eFlour~TMM 450染色检测各免疫组脾淋巴细胞的增殖活性,结果显示,DNA-Protein组和rBCG-DNA组的的免疫策略能增强淋巴细胞的增殖活性。FCM检测CD4~+T和CD8~+T细胞中IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-17的分泌量,结果表明DNA疫苗和载体疫苗免疫组中IFN-γ、TNF-α、IL-2和IL-17的含量显着高于PBS组,证明DNA疫苗和载体疫苗均能诱导机体产生较强的细胞免疫应答,且DNA-Protein组和rBCG-DNA组的免疫策略能增强机体的细胞免疫应答水平。对各免疫组分泌IFN-γ的细胞进行ELISPOT检测,结果与FCM检测IFN-γ的结果一致,即DNA-Protein组和rBCG-DNA组的免疫策略能增强机体的细胞免疫应答水平。综上所述,本试验构建了布鲁氏菌L7/L12和Omp16蛋白的重组蛋白疫苗、DNA疫苗和载体疫苗,通过不同的免疫方案对BALB/c小鼠进行免疫,DNA疫苗和载体疫苗均能诱导机体产生较强的细胞免疫,但体液免疫较弱。相比于使用单一疫苗,DNA-Protein和rBCG-DNA的免疫策略能增强机体的体液免疫和细胞免疫应答水平。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-05-01）
邵丽军,李猛,伊正君[2]（2018）在《结核分枝杆菌Ag85B+Rv3407融合基因自杀性DNA疫苗的构建及鉴定》一文中研究指出目的构建表达结核分枝杆菌生长期抗原Ag85B和休眠期蛋白Rv3407的自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85B基因和Rv3407蛋白基因,再以二者的混合物为模板扩增Ag85B+Rv3407融合基因,构建真核表达载体pSCA1/Ag85B+Rv3407,以ELISA法检测其在BHK-21细胞中的瞬时表达。结果从结核分枝杆菌基因组中扩增得到Ag85B+Rv3407融合基因,片段大小为1 323bp,与预期相符。成功构建重组质粒pSCA1/Ag85B+Rv3407,该重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的蛋白(实验组P/N≥2.1)。结论成功构建结核分枝杆菌自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,该重新载体能在真核细胞中表达目的蛋白。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2018年04期）
王天翔,李范文,刘继刚,王喜军,王丽娟[3]（2016）在《促性腺激素抑制激素—抑制素—卵泡抑制素融合基因疫苗的构建》一文中研究指出促性腺激素抑制激素(GnIH)是唯一被阐明对GnRH、LH起着负调控作用的神经肽,在非繁殖期抑制动物的繁殖功能,为运用生殖免疫原理中和GnIH,调节GnRH、LH激素水平,诱导藏羊非繁殖季节发情提供契机。本研究以GnIN-INH-Follistatin-(C3d)融合的PET28a-GnIN-INHFollistatin-(C3d3)原核表达载体为基础,将GnIN-INH-Follistatin-C(3d3)转入真核疫苗表达载体pSEC-tag2a中构建pSEC-tag2a-GnIN-INH-Follistatin-C(3d3)基因疫苗。将质粒转染HEK293细胞,转染24h后收集细胞,做采用takara的荧光定量PCR用2Xpremix对基因进行RT-PCR试验来验证,表明pSEC-tag2a-GnIN-INH-Follistatin-C3d3质粒转染HEK293细胞后能够在HEK293细胞内稳定表达。结果表明,成功构建INH-GnIH融合基因疫苗,为开展研究免疫后非繁殖季节藏羊生殖激素表达规律工作提供理论和技术支撑。(本文来源于《畜牧兽医杂志》期刊2016年05期）
李青青[4]（2016）在《鸭乙型肝炎病毒preS/S-C融合基因DNA疫苗的构建及其体液免疫应答的初步研究》一文中研究指出鸭乙型肝炎病毒(Duck hepatisis B virus,DHBV)的基因组长约3 kb,是由一条完整的负链和一条不完整的正链组成的不完全双链环状结构的DNA病毒,并且其正链与负链通过一段互补的重复序列连接。本试验首先通过PCR扩增和测哮获得DHBV全长基因序列,然后使用真核表达质粒pVAX1构建DHBV preS/S-C融合基因DNA疫苗,并对其诱导鸭体液免疫效果进行初步研究。1.鸭乙型肝炎病毒的全基因克隆与序列分析本试验从四川省疑似感染DHBV的樱桃谷鸭体内分离到一株DHBV,命名为DHBV SCP01:然后通过PCR扩增、T克隆(pGM-T)与测序获得该病毒的全长基因序列,提交至NCB1,登录号为KM676220。基因结构分析发现,DHBV SCPO1分离株的全长基因为3021 bp,包含3个开放阅读框(ORF),即ORF-C、ORF-S与ORF-P,分别编码病毒的核心蛋白、表面蛋白与聚合酶蛋白,且均位于负链上。序列相似性分析发现,DHBV SCP01分离株与其它13株DHBV分离株的相似性介于89.47%-99.64%之间。其中,DHBV SCP01分离株与M32991分离株的相似性最低,仅为89.47%；与HQ214130 (DHBV-XY)河南分离株的相似性最高,为99.64%。遗传进化分析和P蛋白标志氨基酸分析表明,DHBV SCP01分离株属于西方基因型。2. DHBV preS基因的原核表达及其多克隆抗体的制备运用生物信息学软件和在线预测工具对DHBV SCPO1分离株的表面蛋白(preS/S蛋白)进行分析。结果表明,preS/S蛋白由328个氨基酸组成,分子量约为36.23 kDa,该蛋白有2个跨膜区,分别位于162-184 aa和235-257 aa,不存在信号肽序列;preS/S蛋白的抗原表位主要集中在前160个氨基酸区域。所以,本试验选择preS基因进行PCR扩增,构建原核表达质粒：然后将重组质粒转入Rosetta表达菌株中进行大量诱导表达与纯化,SDS-PAGE与Western blot分析;接着将重组preS蛋白免疫昆明雌鼠以制备多克隆抗体,间接ELISA检测鼠抗高免血清的抗体效价。结果表明,preS基因长度为483 bp,并成功构建原核表达质粒pET32a(+)-preS;在37℃、0.6mg/mL IPTG诱导4h时,重组preS蛋白的表达量最大,且该蛋白大小与预期相符合(重组preS蛋白理论值为38.6 kDa),为可溶性蛋白；多克隆抗体的效价为1：25600。3. DHBV preS/S-C融合基因DNA疫苗的构建及其表达采用PCR扩增DHBV SCP01分离株的preS/S基因和C基因,融合PCR扩增preS/S-C基因,T克隆(pGEM-T);然后以pVAX1为载体,分别进行酶切连接,构建真核表达质粒pVAX1-preS/S、pVAX1-C和pVAX1-preS/S-C;接着转染COS 7细胞,48 h后收集细胞样品。酶切鉴定以及测序分析表明,克隆的preS/S基因、C基因和preS/S-C基因长度分别为987bp、789bp和1818 bp,与NCBI上公布的DHBV SCP01分离株的preS/S基因和C基因序列相似性均为100%,表明成功构建了以上叁种真核表达质粒。免疫印迹(Western blot)分析发现,细胞样品均在预期位置出现相应大小的条带(preS/S蛋白,36.2 kDa; C蛋白,30.3 kDa; preS/S-C蛋白,67.5 kDa)。4. DHBV preS/S-C融合基因DNA疫苗的免疫原性研究将20只1日龄的樱桃谷鸭随机平均分为5组,以3001μg/只的免疫剂量将制备的DNA疫苗pVAX1(A组)、pVAX1-C (B组)、pVAX1-preS/S(C组)、pVAX1-preS/S +pVAX1-C(D组)和pVAX1-preS/S-C(E组)分别经肌肉注射免疫4日龄雏鸭；在雏鸭14日龄时以300 μg/只的免疫剂量对其进行第二次肌肉注射免疫。然后在首次免疫后2d、4d、6d、8d、10d、12d、14d、21d、28d、35d、42d、49d、56d分别对雏鸭进行静脉采血,间接ELISA检测免疫鸭血清中抗-preS和抗-C的抗体水平。结果表明,在首次免疫接种后21 d,B组(1.5395±0.0599)、C组(1.5096±0.0452)、D组(1.4784±0.0462,1.4788±0.0571)和E组(1.6394±0.0462,1.6555±0.0421)的抗体水平均达到最高,均极显着(P<0.001)高于A组(0.2569±0.0673,0.2750±0.0687);并且E组产生的抗体水平最高,显着高于B组、C组和D组(P<0.05),为后期DNA疫苗保护效果的研究提供一定的基础。(本文来源于《四川农业大学》期刊2016-06-01）
李香春[5]（2014）在《气肿疽nanA与fliA融合基因亚单位疫苗的制备及免疫效果评价》一文中研究指出为了制备安全且有效的气肿疽新型疫苗,控制气肿疽的暴发,本研究建立了气肿疽的原核表达载体,制备了气肿疽融合基因亚单位疫苗和单基因亚单位疫苗,并对两种疫苗的免疫水平进行了评价。本研究根据已报道的气肿疽梭菌的fliA和nanA基因设计两对特异性引物,以气肿疽梭菌基因组DNA为模板,扩增出两段大小分别为429bp的fliA基因片段和1113bp的nanA片段。利用SOE-PCR串联两个片段,在引物中加入了柔性Linker,得到大小约为1587bp的融合基因,并将该融合基因和鞭毛基因分别与pMD18-T Simple载体连接,转化至大肠杆菌感受态DH5α中,获得克隆载体fliA和pMD18-fliA-nanA。继而对克隆载体进行双酶切,获得带有黏性末端的fliA片段和fliA-nanA片段,与具有相同黏性末端的PEGX-4T-1原核表达载体进行连接,将连接后的质粒转化至大肠杆菌感受态BL21中,从而构建出了重组质粒pEGX-4T-fliA-nanA和pEGX-4T-fliA原核表达载体。对重组质粒PEGX-4T-fliA-nanA和pEGX-4T-fliA进行双酶切鉴定、PCR鉴定、及序列测定后,将叁项鉴定均为阳性的克隆使用IPTG进行诱导表达。经SDS-PAGE电泳可见大小约83kDa大小的片段,和42kDa大小的片段,进行western-blotting可见目的条带有反应原性。将蛋白进行纯化后对小鼠进行免疫。使用间接ELISA对小鼠的体液免疫进行测定。使用细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的ELISA检测试剂盒对小鼠的细胞免疫水平进行测定。研究结果表明,FliA(C)蛋白与FliA(C)-NanA融合蛋白均能使小鼠产生体液免疫应答,在相同免疫剂量下,融合蛋白组的体液免疫水平明显高于鞭毛蛋白组,该结果表明,神经氨酸酶对鞭毛蛋白的免疫原性有增强的作用。融合蛋白比鞭毛蛋白可以更快诱导机体产生IL-2、IFN-γ。IL-4检测结果表明,融合蛋白与鞭毛蛋白在该反应中相差不大,只是融合蛋白加快了IL-4的产生速度。本研究成功制备了气肿疽NanA-FliA(C)亚单位疫苗。(本文来源于《延边大学》期刊2014-06-01）
赵娜[6]（2013）在《VP1与C3d3融合基因疫苗诱生CVB3特异性免疫应答及其预防病毒性心肌炎的研究》一文中研究指出目的观察柯萨奇病毒B组3型(CVB3)衣壳蛋白1(VP1)与叁拷贝补体3片段(C3d3)融合基因疫苗诱生特异性免疫应答及其对小鼠病毒性心肌炎的预防效果。方法 BALB/c小鼠随机分为3组,即空质粒组、VP1基因免疫组和VP1-C3d3融合基因免疫组,每4周免疫1次,共3次,检测小鼠血清中和抗体滴度、细胞免疫应答水平以及病毒攻击后的心肌病理切片。结果融合基因免疫组的体液免疫应答和细胞免疫应答水平均明显高于VP1基因免疫组(P<0.05);CVB3攻击小鼠后,经融合基因免疫的小鼠心肌病理学变化明显减轻。结论 VP1-C3d3融合基因疫苗可以诱导小鼠对CVB3产生较强的特异性免疫应答,有效的预防了病毒性心肌炎的发生。(本文来源于《环球中医药》期刊2013年S2期）
张丽,李文桂[7]（2013）在《日本血吸虫融合基因疫苗的研究进展》一文中研究指出日本血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,研制疫苗防治该病是当前研究的热点领域。国内外学者对日本血吸虫融合基因疫苗进行了研究,本文综述了该疫苗的构建及其免疫机制等方面的研究新进展。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2013年11期）
卢家美,孙秀珍,李满祥[8]（2013）在《葎草花粉变应原融合基因疫苗Hum-CTLA-4-pcDNA3.1通过加强抗原提呈功能诱导Th1倾向的免疫反应》一文中研究指出目的构建葎草花粉变应原核酸疫苗Hum-CTLA-4-pcDNA3.1,并证实其表达的Hum-CTLA-4融合蛋白通过与B7分子结合介导Treg T细胞分化,进而诱导Th1型免疫反应。方法PCR技术扩增目的基因并定向插入pcDNA3.1(+)载体以构建Hum-CTLA-4-pcDNA3.1核酸疫苗,测序鉴定该构建是否成功。将其转染至COS-7细胞,western-blot方法证实其能否在真核细胞内表达。免疫共(本文来源于《中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编》期刊2013-09-18）
贺彪,常海艳,李小曼,陈则,方芳[9]（2013）在《基于流感病毒HA柄部和M2e融合基因的DNA疫苗》一文中研究指出由于流感病毒容易突变,流感通用疫苗的研究势在必行.流感病毒血凝素(HA)柄部和基质蛋白2的胞外域(M2e)都是流感病毒通用疫苗的重要候选靶点.通过重迭PCR的方法用A/PR/8/34(H1N1)(简称PR8)流感病毒的M2e或者4个甘氨酸取代HA的头部,分别获得HAM2e和HA4G,然后将两种重组基因插入真核表达载体pCAGGS-P7中,制得pHAM2e和pHA4G两种DNA疫苗.通过电击免疫的方法对小鼠分别免疫pHAM2e和pHA4G,免疫3次,每次免疫间隔2周.第3次免疫2周后用5LD50的同源流感病毒感染小鼠.结果表明HAM2e组和HA4G组的小鼠均产生了特异性抗体,HAM2e组比HA4G组具有更好的抗PR8流感病毒的能力,这提示可以用M2e替换HA头部用于疫苗研发.(本文来源于《生命科学研究》期刊2013年04期）
朱翠明,余敏君,高顺利,曾焱华,游晓星[10]（2013）在《肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测》一文中研究指出目的研究肺炎支原体(Mp)P1C-IL-2融合基因疫苗经鼻饲免疫小鼠后的免疫应答水平和免疫保护作用,了解IL-2对P1C核酸疫苗的免疫佐剂效应。方法将构建的P1C-IL-2核酸疫苗鼻饲免疫BALB/c鼠,ELISA检测免疫小鼠血清IgG滴度、IgG亚类和支气管肺泡灌洗液中IgA及IFN-γ、IL-4的水平;建立小鼠Mp感染模型,观察Mp攻击后小鼠肺组织炎症情况和支气管肺泡灌洗液中Mp菌落数的变化。结果 P1C-IL-2双基因疫苗组小鼠血清中的总IgG、IgG1、IgG2a亚类和支气管肺泡灌洗液中IFN-γ和IL-4水平均较P1C疫苗组小鼠显着增高(P<0.05),但两组支气管肺泡灌洗液IgA差异无显着性(P>0.05)。用Mp滴鼻感染免疫小鼠,第1、3、6天P1C-IL-2双基因融合疫苗组小鼠肺组织炎症病理评分显着高于P1C单基因疫苗免疫组小鼠,两组小鼠支气管肺泡灌洗液中的Mp菌落数差异无显着性(P>0.05)。结论 IL-2能显着增强P1C疫苗的免疫应答水平,但在感染早期也激发了较强的肺组织炎症。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2013年06期）
融合基因疫苗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的构建表达结核分枝杆菌生长期抗原Ag85B和休眠期蛋白Rv3407的自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,并检测其在BHK-21细胞中的表达。方法采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中扩增Ag85B基因和Rv3407蛋白基因,再以二者的混合物为模板扩增Ag85B+Rv3407融合基因,构建真核表达载体pSCA1/Ag85B+Rv3407,以ELISA法检测其在BHK-21细胞中的瞬时表达。结果从结核分枝杆菌基因组中扩增得到Ag85B+Rv3407融合基因,片段大小为1 323bp,与预期相符。成功构建重组质粒pSCA1/Ag85B+Rv3407,该重组质粒能在BHK-21细胞中表达目的蛋白(实验组P/N≥2.1)。结论成功构建结核分枝杆菌自杀性DNA疫苗融合基因表达载体,该重新载体能在真核细胞中表达目的蛋白。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
融合基因疫苗论文参考文献
[1].成璐.布鲁氏菌L7/L12-Omp16融合基因不同亚单位疫苗的构建及其免疫原性分析[D].吉林农业大学.2018
[2].邵丽军,李猛,伊正君.结核分枝杆菌Ag85B+Rv3407融合基因自杀性DNA疫苗的构建及鉴定[J].中国病原生物学杂志.2018
[3].王天翔,李范文,刘继刚,王喜军,王丽娟.促性腺激素抑制激素—抑制素—卵泡抑制素融合基因疫苗的构建[J].畜牧兽医杂志.2016
[4].李青青.鸭乙型肝炎病毒preS/S-C融合基因DNA疫苗的构建及其体液免疫应答的初步研究[D].四川农业大学.2016
[5].李香春.气肿疽nanA与fliA融合基因亚单位疫苗的制备及免疫效果评价[D].延边大学.2014
[6].赵娜.VP1与C3d3融合基因疫苗诱生CVB3特异性免疫应答及其预防病毒性心肌炎的研究[J].环球中医药.2013
[7].张丽,李文桂.日本血吸虫融合基因疫苗的研究进展[J].中国病原生物学杂志.2013
[8].卢家美,孙秀珍,李满祥.葎草花粉变应原融合基因疫苗Hum-CTLA-4-pcDNA3.1通过加强抗原提呈功能诱导Th1倾向的免疫反应[C].中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编.2013
[9].贺彪,常海艳,李小曼,陈则,方芳.基于流感病毒HA柄部和M2e融合基因的DNA疫苗[J].生命科学研究.2013
[10].朱翠明,余敏君,高顺利,曾焱华,游晓星.肺炎支原体P1C-IL-2融合基因疫苗鼻饲对小鼠免疫效果的检测[J].细胞与分子免疫学杂志.2013
论文知识图
