猪流行性腹泻病毒的分离鉴定及灭活疫苗的研制

论文摘要

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种急性高接触性肠道传染病。不同品种和年龄的猪都有明显易感性,但危害最为严重的是哺乳仔猪,其发病率高达100%,死亡率30%80%不等,临床表现以病猪急性水样腹泻、呕吐和脱水为特征。目前,该病防制主要以疫苗免疫防控为主,但由于该病病原在我国经多年流行变异,国内现有疫苗在不同地区使用时的免疫保护效果存在很大差异。另外,猪场养殖管理水平的差异,仅依靠单次免疫不能完全保证疫苗免疫后产生整齐度高的抗体。因此,猪场迫切需要更高安全性及保护率的猪流行性腹泻疫苗,以保护仔猪免受流行PEDV的侵害,进而控制该病的爆发与传播。本研究采集甘肃省发病猪的小肠组织及内容物进行PEDV的分离鉴定并进行其灭活疫苗的研制,为PED的防控做出了新的探索。研究结果如下:1.PEDV的分离鉴定。从甘肃省某暴发仔猪腹泻的猪场中,采集因腹泻病死的7日龄内的仔猪小肠组织及内容物,经处理后在添加10μg/mL胰酶的Vero细胞中进行病毒分离培养。在Vero细胞上盲传到第5代,出现了明显的细胞病变,继续传至第10代收获病毒液。经过RT-PCR检测、病毒特异性中和试验等鉴定,确定分离出一株猪流行性腹泻病毒,命名为PEDV-GS10株。2.灭活疫苗的研制。在病毒培养过程中,用含8%新生胎牛血清的DMEM培养基进行Vero细胞的传代培养。以0.5%体积比接种PEDV-GS10株至Vero细胞中,37℃温室培养48-72 h,收获病毒。在PEDV-GS10株病毒液中加入终浓度为0.07%甲醛,2-8℃灭活48 h,经无菌和灭活检验合格后,用ISA 61 VG佐剂配制疫苗。仔猪免疫实验发现对仔猪安全有效。3.灭活疫苗的临床试验。将制备的PEDV-GS10株灭活疫苗免疫妊娠母猪,进行安全性试验和有效性试验。结果表明猪流行性腹泻灭活疫苗（GS10株）对妊娠母猪是安全有效的,对妊娠母猪产仔数量及仔猪质量没有影响。哺乳仔猪被动免疫抗体至少可持续至28日龄。

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摘要

ABSTRACT

第一章猪流行性腹泻病毒文献综述

1.1 病原学特性

1.2 流行病学

1.3 临床症状及病理变化

1.3.1 临床症状

1.3.2 病理变化

1.4 诊断方法

1.4.1 初步诊断

1.4.2 病毒分离鉴定

1.4.3 RT-PCR方法

1.4.4 ELISA方法

1.4.5 免疫荧光法

1.5 防制措施

1.6 PEDV疫苗的研究进展

1.7 本研究的目的与意义

第二章猪流行性腹泻病毒的分离鉴定

2.1 材料

2.1.1 组织病料

2.1.2 细胞与血清

2.1.3 主要试剂

2.1.4 主要仪器

2.2 方法

2.2.1 猪流行性腹泻病毒分离

2.2.2 猪流行性腹泻病毒鉴定

2.3 结果

2.3.1 CPE观察及病毒分离

2.3.2 猪流行性腹泻病毒GS10 株的鉴定

2.4 讨论

2.5 小结

第三章猪流行性腹泻灭活疫苗的研制

3.1 材料

3.1.1 病毒与细胞

3.1.2 主要试剂

3.1.3 主要仪器

3.2 方法

3.2.1 病毒培养条件的确定

3.2.2 灭活条件的确定

3.2.3 佐剂的选择

3.2.4 疫苗检验

3.3 结果

3.3.1 病毒的接种及扩增

3.3.2 最佳灭活条件的确定

3.3.3 疫苗检验

3.4 讨论

3.5 小结

第四章猪流行性腹泻灭活疫苗的临床试验

4.1 材料

4.1.1 疫苗与试验动物

4.2 方法

4.2.1 安全性试验

4.2.2 有效性试验

4.3 结果

4.3.1 安全性试验

4.3.2 有效性试验

4.4 讨论

4.5 小结

第五章结论

附录

参考文献

致谢

个人简历

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 郭振刚

导师: 王晶钰

关键词: 猪流行性腹泻病毒,分离鉴定,灭活疫苗,临床试验

来源: 西北农林科技大学

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 西北农林科技大学

分类号: S852.651

总页数: 38

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