论文摘要
旨在制备猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白的多克隆抗体。以PCV2毒株（CAU0673）DNA为模板进行PCR,扩增目的片段大小约为702 bp,构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒,转入大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达;对目的蛋白进行NiNTA树脂亲和层析纯化、复性,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,经背部皮下多点注射4次,免疫新西兰大耳白兔,制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验（IFA）验证兔抗血清特异性,并用间接ELISA测定抗血清抗体效价。PCR、双酶切和测序鉴定结果表明,重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确;重组Cap蛋白以包涵体的形式表达,大小约为34 kD,复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应,ELISA抗体效价> 1∶12 800,显著高于商品化疫苗组。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 欧云文,代军飞,马炳,张杰,邓辉祥,李潇,张欣明
关键词: 猪圆环病毒型,蛋白,多克隆抗体,鉴定
来源: 生物技术通报 2019年08期
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,开江县动物疫病预防控制中心
基金: “十三五”国家重点研发计划子课题(2017YFD0501801),四川省科技计划项目(2019GDRC0110)
分类号: S852.651
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0205
页码: 226-231
总页数: 6
文件大小: 1460K
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