导读:本文包含了小分子核糖体失活蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:小分子核糖体失活蛋白,N-糖苷酶,cDNA,克隆,基因表达,融合蛋白GST-Luffin,S2
小分子核糖体失活蛋白论文文献综述
李丰[1]（2003）在《丝瓜籽和栝楼籽中的小分子核糖体失活蛋白（肽）的研究》一文中研究指出小分子核糖体失活蛋白是一类分子量为8~14 kD 的新型核糖体失活蛋白。它们具有N-糖苷酶活性，并对蛋白质生物合成有较强的抑制活性。它们不仅是研究蛋白质结构与功能的理想材料，而且由于它们分子小，免疫原性相对较低，有望成为免疫毒素的一类新的“弹头”，具有良好的应用前景。本文主要对葫芦科植物种子中的叁种小分子核糖体失活蛋白的分离、纯化、性质及cDNA 克隆和表达进行了研究。通过硫酸铵分级沉淀、CM-52 阳离子交换层析、FPLC Mono S 阳离子交换层析，从丝瓜籽抽提液中分离到一种单体分子量为5226.5 Da 的多肽Luffin P1。其N 端11 个氨基酸序列与丝瓜籽中一种名为6.5 K AGRP 的多肽的部分序列相同，并与南瓜籽中一种胰蛋白酶抑制剂C2 肽具有很高的同源性。体外实验证实，Luffin P1 同时具有两种生物活性：它对兔网织红细胞裂解液蛋白质生物合成有较强的抑制作用，IC50 为0.88 nmol/L；此外它还具有明显的胰蛋白酶抑制活性，IC50 为22 μmol/L。Luffin P1 是迄今已报道的分子量最小的具有失活核糖体活性的多肽。为了探索Luffin P1 可能的作用机制，在不同的溶液条件下对纯化的Luffin P1 进行凝胶过滤分析和N-糖苷酶活力测定，结果显示样品中有聚合体形式存在，单体间主要通过静电相互作用结合在一起，聚合体形式很可能是LuffinP1 的N-糖苷酶的活性形式。此外，我们还利用RT-PCR 方法，克隆了5’端少两个密码子的Luffin P1 的cDNA，序列测定和同源性比较结果提示，Luffin P1 可能是由丝瓜籽中的一种类似vicilin 蛋白的储存蛋白前体加工而来。Luffin S2 是另一种来源于丝瓜籽的小分子核糖体失活蛋白。本文利用3’RACE 法克隆了它的cDNA，并构建了它的融合表达质粒pGEX-4T-S2，该质粒在大肠杆菌中获得了成功表达。表达产物大部分为可溶性蛋白，每升培养液可获得40 mg 左右纯度约为95％的融合蛋白GST－Luffin S2。该融合蛋白具有<WP=3>较强的N-糖苷酶活力。这是首个用基因工程方法成功表达的小分子核糖体失活蛋白。它的表达为深入开展小分子核糖体失活蛋白的理论和应用研究奠定了很好的基础。采用改进的分离纯化方案，首先抽提种子的蛋白体，然后再经硫酸铵分级沉淀、FPLC Mono S 阳离子交换层析和Superose12 凝胶过滤层析等步骤，从栝楼种子中分离到一种新的分子量为11.4 kD 的核糖体失活蛋白－trichokirin-S1。先抽提蛋白体的方法有效地排除了栝楼种子中其它核糖体失活蛋白的干扰，提高了分离效果。trichokirin-S1 对兔网织红细胞裂解液系统的蛋白质生物合成有较强的抑制作用，IC50 为0.71 nmol/L。它对核糖体失活的机制与天花粉蛋白（TCS）一致，是rRNA N-糖苷酶催化型的。用纯化的trichokirin-S1 免疫小鼠，通过细胞融合技术，初步筛到了能分泌抗trichokirin-S1 单抗的杂交瘤细胞，其分泌的单抗专一性强，可用于trichokirin-S1 的Western Blotting 检测。(本文来源于《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》期刊2003-07-01）
邰宁文,李丰,李臻,庄大桓,张祖传[2]（2000）在《栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——Strichokirin的纯化和部分性质》一文中研究指出通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、SephacrylS 10 0凝胶过滤和FPLCMono S离子交换层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白———S trichokirin ,经 15 %SDS PAGE测定分子量为 8kD左右 ,13.5 %聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在 pH 9.5左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究 ,表明S tri chokirin属于RNAN 糖苷酶催化型的核糖体失活蛋白 ,对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 1.15× 10 -10 mol/L。(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊2000年05期）
邰宁文[3]（2000）在《葫芦科植物种子中两种新型小分子核糖体失活蛋白的分离、纯化和性质研究》一文中研究指出本论文主要是对葫芦科植物种子中两种新型的小分子量核糖体失活蛋白的分离、纯化和性质进行了研究。（一）栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白—S-trichokirin的分离、纯化和性质 S-trichokirin是我们首先从栝楼（Trichosanthes kirilowii）种子中通过硫酸铵分级沉淀、Cellulose CM-52阳离子交换层析、SephacrylS-100凝胶过滤和FPLC Mono-S阳离子交换层析纯化到的一种新型核糖体失活蛋白，反相HPLC及质谱分析验证了它为单一蛋白，其得率约为0.4mg/100g脱脂种子干粉。经15％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和15％Tris-Tricine聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，其分子量为8kD左右。通过13.5％酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，S-trichokirin的等电点在pH9.5左右，是一种强碱性蛋白质。S-trichokirin对鼠肝核糖体作用的研究结果表明，其失活核糖体的机制与trichosanthin一致，属于RNA N-糖苷酶催化型。S-trichokirin具有较强的抑制兔网织红细胞裂解液蛋白质生物合成的能力，蛋白质生物合成抑制50％时的浓度（IC_(50)）为1.15×10~(-10)mol/L。 （二）丝瓜籽中小分子核糖体失活蛋白—Luffin S_2的分离、纯化和性质 Luffin S_2是从丝瓜（Luffa cylindrica）籽中经硫酸铵分级沉淀、Cellulose CM-52阳离子交换层析、Sephadex G-25脱盐、FPLC Mono-S离子交换层析得到的另一种新型小分子量核糖体失活蛋白，得率约为1.5mg/100g脱脂种子干粉，经15％SDS-PAGE测定，其分子量为 摘 要 8 kD左右。Luffin S。对兔网织红细胞裂解液的蛋白质生物合成有较强 的扣制左右，其 IC习＊为 1．50X 10’＊mol／L，毒性与 S一trichokirin相当口 利用纯化的 Luffin S。免疫小鼠，制得了 Luffin S。的多克隆抗血 清，它有较高的效价，但专一性不够强。进而利用细胞融合技术，初 步筛选到一株分泌抗Luffin S。单抗的杂交瘤细胞株，其培液上清有较 强的专一性，已用于LllffiflS。的WCStCfttBIOttiflg检狈肌 利用蛋白质测序仪测定了 Luffin S。N－端 9个氨基酸的序列，并据 此设计5，端简井引物，用此引物和 3’－端通用引物，通过RTFCR技 术克隆了 Luffin S。的部分cDNA序列。测序表明，克隆到的Luffin S。 。DNA由 198个碱基的编码序列和 3’－端 87个非编码序列组成，根据 Luffin S。cDNA的编码序列推断，Luffin S。山 66个氦基酸组成，分子 量为 7，852道尔顿，这与天然 Luffin S。的测定结果一致。另外，我们 还构建了 Luffin S。的表达质粒 pET28a叱什侣。，摸索了此质粒在大肠。杆菌中的表达条件，结果表明，rurnn s。的表达量甚微，但通过 ELISA检测和纯化产物切割rRNA的活力检测，验证了表达产物。－h有 重组 Luffin S。的存在。 S－trichokirin和 Luffin S。是我们首先发现的有别于普通的单链和 双链核糖体失活蛋白的一类新型小分于量核糖体失活蛋臼，由于其分 于量仅为常规单链核糖体失活蛋白的可 1／3～l／4左右，因此它们是研 究核糖体的结构与功能、蛋白质与核酸相互作用关系的理想材料。同 时作为免疫毒素的“弹头”，它们也将会有很好的应用前景，并为今 后转基因植物的研究提供更多的选择。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2000-06-15）
熊长云,张祖传[4]（1998）在《一组丝瓜籽小分子核糖体失活蛋白LuffinS的分离、纯化和性质》一文中研究指出通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、ＨＲＬＣ分子排阻层析及ＦＰＬＣＭｏｎｏＳ离子交换层析等步骤，从丝瓜籽中分离到一组分子量为８ｋＤ左右的小分子核糖体失活蛋白——ＬｕｆｉｎＳ１、ＬｕｆｉｎＳ２、ＬｕｆｉｎＳ３。末端分析结果表明，它们的Ｎ端氨基酸分别为Ａｌａ、Ｐｒｏ和Ｔｈｒ。氨基酸序列分析确定了ＬｕｆｉｎＳ２的Ｎ端９个氨基酸的序列是Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ｇｌｕ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａｓｐ。ＬｕｆｉｎＳｓ对核糖体的失活机制与天花粉蛋白（ＴＣＳ）一致，是ＲＮＡＮ－糖苷酶催化型的。它们对无细胞蛋白质生物合成的抑制活性较ＴＣＳ略强，ＩＣ５０分别为１．３×１０－１１、１．０×１０－１０和６．３×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ左右。因此ＬｕｆｉｎＳｓ有可能开发成免疫毒素的高效“弹头”。(本文来源于《生物化学与生物物理学报》期刊1998年02期）
小分子核糖体失活蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
通过硫酸铵分级沉淀、CM 5 2阳离子交换层析、SephacrylS 10 0凝胶过滤和FPLCMono S离子交换层析等步骤 ,从栝楼种子中分离到一种核糖体失活蛋白———S trichokirin ,经 15 %SDS PAGE测定分子量为 8kD左右 ,13.5 %聚丙烯酰胺凝胶酸性电泳结果显示其等电点在 pH 9.5左右。通过对大鼠肝核糖体作用的研究 ,表明S tri chokirin属于RNAN 糖苷酶催化型的核糖体失活蛋白 ,对兔网织红细胞裂解液系统蛋白质生物合成有较强的抑制作用 ,IC50 为 1.15× 10 -10 mol/L。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
小分子核糖体失活蛋白论文参考文献
[1].李丰.丝瓜籽和栝楼籽中的小分子核糖体失活蛋白（肽）的研究[D].中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）.2003
[2].邰宁文,李丰,李臻,庄大桓,张祖传.栝楼种子中一种新型小分子核糖体失活蛋白——Strichokirin的纯化和部分性质[J].生物化学与生物物理学报.2000
[3].邰宁文.葫芦科植物种子中两种新型小分子核糖体失活蛋白的分离、纯化和性质研究[D].中国农业科学院.2000
[4].熊长云,张祖传.一组丝瓜籽小分子核糖体失活蛋白LuffinS的分离、纯化和性质[J].生物化学与生物物理学报.1998
标签：小分子核糖体失活蛋白; N-糖苷酶; cDNA; 克隆; 基因表达; 融合蛋白GST-Luffin; S2;