叶片衰老诱导FLP重组酶删除转基因烟草外源基因的研究

叶片衰老诱导FLP重组酶删除转基因烟草外源基因的研究

论文摘要

【目的】"Gene-deletor"系统可实现转基因植物中外源基因的清除。为了研究该系统在转基因烟草中对清除外源基因的作用并最终创制不含外源基因的烟草新种质。【方法】以含有"Gene-deletor"系统的转基因烟株为材料,分析外源筛合报告选融基因Bar::GUS、重组酶基因FLP在不同叶龄叶片中的表达水平,同时通过观察转基因烟草花粉中GUS蛋白的表达活性,分析外源基因GUS在花粉中的删除情况。【结果】(1)相同叶龄不同转基因烟株叶片均表现出GUS活性和对除草剂草铵膦抗性,且3个转基因烟草株系中GUS活性和对除草剂抗性都表现出随着叶龄增大而降低的特点。(2)Real-time PCR和RT-PCR结果进一步证明外源Bar::GUS基因表达水平随叶片发育成熟持续下降,而外源FLP基因的表达水平则出现先增后降的变化趋势,在测定后期两者的表达量均达到最低,(3)花粉GUS组织染色结果表明,"明,色结果降的变化趋势,特系统诱导各转基因植株中花粉外源基因清除效率不同,平均清除率分别78.3%,54.7%和75.2%。【结论】在转基因烟草中,叶片衰老特异表达基因SAG12基因启动子驱动"动启动子驱动达基因,平均清系统(LoxP/FRT)的表达不仅可引起转基因植株叶片中外源基因的特异性清除,还能诱导花粉中外源基因的删除,该技术可为进一步创制培育不含外源基因的烟草新种质提供参考。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料、试剂与仪器
  •     1.1.1 试验材料
  •     1.1.2 试剂
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 转基因烟株的PCR鉴定
  •     1.2.2 转基因烟草不同组织GUS活性分析
  •     1.2.3 转基因烟草对草铵膦敏感性分析
  •     1.2.4 叶片外源基因的表达量分析
  •     1.2.5 外源基因删除率的分析
  •     1.2.6 数据处理
  • 2 结果
  •   2.1 转基因烟草移栽及鉴定
  •   2.2 转基因烟草GUS染色活性分析
  •   2.3 转基因烟草除草剂抗性分析
  •   2.4 转基因烟草外源基因表达量分析
  •   2.5 转基因烟草花粉中外源基因清除效率统计
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 秦利军,李启龙,赵德刚

    关键词: 烟草,外源基因清除,筛选报告基因,重组酶基因

    来源: 中国烟草学报 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 贵州大学农业生物工程研究院/山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室,贵州省农业科学院

    基金: 贵州省科技计划项目“烟草钾离子通道蛋白及BR对植株抗非生物胁迫研究”(黔科合LH [2016]7449号),贵大人基合字“利用基因编辑技术创制抗除草剂烟草新种质研究”([2015]24号)

    分类号: S572;Q943.2

    DOI: 10.16472/j.chinatobacco.2019.239

    页码: 90-97

    总页数: 8

    文件大小: 1992K

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