导读:本文包含了饲养层细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:饲养层细胞,基因修饰,干细胞,诱导多能干细胞
饲养层细胞论文文献综述
周芳颖,刘玉琴[1]（2019）在《饲养层细胞作用机制研究进展》一文中研究指出饲养层细胞法被广泛应用于干细胞及其他哺乳动物细胞的体外培养,通过分泌生长因子和物理支持可以一定程度模拟细胞增殖的体内环境。根据培养目的的不同,可以有选择性的挑选饲养层细胞种类、处理方法,或通过基因编辑对饲养层细胞进行改良,从而达到最佳的培养效果。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2019年07期）
任亚辉[2]（2018）在《甲醇固定法制备饲养层细胞的应用和作用机制》一文中研究指出饲养层细胞在多能干细胞的体外培养中发挥重要的支持作用。传统饲养层细胞的制备方法主要是通过丝裂霉素C和伽玛射线照射处理小鼠胚胎成纤维细胞,使其失去分裂能力。饲养层细胞分泌的生长因子能够抑制多能干细胞的分化,促进自我更新。传统制备饲养层细胞的方法,制备过程复杂、需要饲养小鼠和获取早期胎儿、需要丝裂霉素C或射线照射设备等,这些要求极大制约了饲养层细胞制备方法的应用。本研究首次通过甲醇固定细胞的方法制备饲养层,简化了实验流程,提高了饲养层细胞的制备效率,便于广泛推广应用。实验结果如下:1.甲醇制备饲养层细胞方法的建立通过优化甲醇和丙酮的比例,发现丙酮比例高于70%,不利于饲养层细胞的制备。进一步通过比较甲醇不同浓度对饲养层细胞的影响发现,低浓度的甲醇对细胞的固定作用较弱。结合以上两个结果,最终确定100%的甲醇作为固定饲养层细胞的固定剂。通过比较甲醇温度和固定时间对饲养层细胞,以及多能干细胞生长的影响,确定甲醇的使用温度为4°C,固定时间为5 min。对饲养层细胞密度的优化结果显示甲醇固定的饲养层细胞密度不能低于2×10~4/cm~2。甲醇固定法不仅对小鼠原代成纤维细胞有效,建系的细胞和其他物种的细胞都可以通过甲醇固定法制备成饲养层细胞。2.甲醇固定法制备饲养层细胞用于多能干细胞培养小鼠多能干细胞,包括ES和iPS细胞,都可以在甲醇固定的饲养层细胞上稳定培养。与丝裂霉素C法制备的饲养层相比,小鼠多能干细胞在甲醇固定的饲养层上具有更快的增殖速度、更高的多能基因(Oct4、Nanog、Sox2)表达水平、更多的SSEA-1阳性克隆,并具备体内叁胚层分化潜能。人和猪iPS细胞也可以在甲醇固定的饲养层上稳定传代,有正常的克隆形态和稳定的多能基因表达。以上实验结果表明,甲醇固定法制备的饲养层细胞可以替代丝裂霉素C法制备的饲养层细胞,用于小鼠、人、猪等多能干细胞的体外培养。3.甲醇固定法制备饲养层细胞的其他应用饲养层细胞经过甲醇处理后能够牢固地固定在细胞培养皿表面,能够耐受抗性药物和低浓度胰蛋白酶的处理。实验结果表明,在甲醇固定法制备的饲养层细胞上可以快速地用药物处理筛选出稳转多能干细胞株,并且甲醇固定法制备的饲养层细胞在重复利用叁次后,小鼠多能干细胞SSEA-1的阳性率仍然高达90%以上。将甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板放置在不同温度环境中保存不同时间后,还可以用于多能干细胞的培养。通过检测多能干细胞碱性磷酸酶活性和多能基因的表达,确定甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板可以放在室温长期保存。4.甲醇固定法制备饲养层细胞的作用机制饲养层细胞经过甲醇固定后,细胞表面存在有四型胶原和纤维粘连蛋白。甲醇固定的饲养层细胞经过四型胶原酶处理一定时间后,细胞表面的四型胶原和纤维粘连蛋白被降解。小鼠多能干细胞在四型胶原和纤维粘连蛋白被降解的饲养层细胞上贴壁能力明显下降,部分克隆在培养基中处于悬浮状态。多能性检测发现,贴壁能力下降的小鼠多能干细胞退出na?ve状态,出现primed状态。以上结果表明,四型胶原和纤维粘连蛋白被四型胶原酶降解后,多能干细胞在甲醇固定的饲养层上的贴壁能力下降,细胞多能状态发生转变,即甲醇固定的饲养层细胞的胞外基质蛋白对多能干细胞贴壁能力和多能状态的转变有重要影响。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2018-06-01）
邓磊玉,林戈,卢光琇[3]（2016）在《经典饲养层细胞Wnt表达的差异及其对人胚胎干细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响》一文中研究指出目的:研究比较叁种经典饲养层体系使用的成纤维细胞中Wnt基因的表达,及其对共培养的人胚胎干细胞的影响。方法:PCR验证19种Wnt基因在叁种不同来源饲养层细胞中的表达情况,q PCR验证各组共培养人胚胎干细胞的Wnt/β-Catenin信号通路相关基因表达水平,流式检测其在不同密度饲养层条件下的增殖分化情况。结果:在全部19种Wnt基因(Wnt1,Wnt2,Wnt2b,Wnt3,Wnt3a,Wnt4,Wnt5a,Wnt5b,Wnt6,Wnt7a,Wnt7b,Wnt8a,Wnt8b,Wnt9a,Wnt9b,Wnt10a,Wnt10b,Wnt11,Wnt16)的表达检测中,昆明白小鼠来源饲养层细胞表达其中的16种,ICR小鼠来源饲养层细胞表达其中的10种,人成纤维细胞来源饲养层细胞表达其中的10种;增加饲养层细胞密度能够不同程度活化Wnt/β-Catenin信号通路下游基因的表达,并激活人胚胎干细胞中的负反馈机制;高密度小鼠饲养层条件促进人胚胎干细胞的分化,高密度人饲养层条件促进人胚胎干细胞的增殖和分化。结论:不同经典饲养层体系提供的Wnt环境不同,其培养的人胚胎干细胞状态也有差异。(本文来源于《激光生物学报》期刊2016年05期）
刘进,席超[4]（2015）在《饲养层细胞培养》一文中研究指出饲养层细胞在胚胎干细胞培养过程中起重要作用。以原代小鼠成纤维细胞为例,介绍了饲养层细胞的分离培养和制备过程,并就饲养层细胞如何通过分泌LIF(leukemia inhibitory factor,白血病抑制因子)和BMP(bone morphogenetic proteins,骨形成蛋白家族)等细胞因子,维持胚胎干细胞的自我复制和未分化状态的分子机制作出概述。(本文来源于《生物学通报》期刊2015年10期）
战立香[5]（2015）在《高效经济型饲养层细胞制备体系的研究和应用》一文中研究指出目前广泛使用的丝裂霉素C（MMC）法制备饲养层（Feeder）细胞（简称“传统方法”）有诸多问题有待优化：（1）产量低，成本高，消耗大量的人力物力；（2）易出现细胞增殖抑制不充分；（3）小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的生物学行为易受影响，得到的Feeder细胞质量不高；（4）操作不灵活，易错过最佳处理时机等。因此，有必要开发新的方法，既能单批获得大量高质量的Feeder细胞，又能保证细胞增殖被充分抑制。首先，本研究在传统方法基础上进行改进优化，建立了悬浮-贴壁法，它能提高抑制细胞有丝分裂的效率，同时，还能筛选出状态良好的细胞作为Feeder，提高所得Feeder的质量。而且，我们无需密切观察MEFs的生长密度，不用担心错过最佳处理时间，操作更为灵活方便。其次，本研究对悬浮-贴壁法进一步优化，建立了利用细胞培养转瓶机CELLSPINSystem快速制备Feeder细胞的方法。CELLSPIN System的搅拌锤可在电磁场作用下不断旋转，能使细胞在悬浮状态下与培养基中的MMC充分接触，可明显提高MMC抑制细胞增殖的效率，缩短处理时间；悬浮状态下处理细胞，回收时无需消化液消化，可减少酶消化带来的细胞损伤，最大限度地保持细胞的良好状态；旋转瓶的容积是普通培养瓶/皿的数倍甚至上百倍，短时间内可处理大量细胞，在提高Feeder制备效率的同时，又能明显降低Feeder细胞的制备成本。所以，细胞培养转瓶机法便于人胚胎干细胞（hESCs）和人诱导型多潜能干细胞（hiPSCS）的大规模生产。(本文来源于《吉林大学》期刊2015-05-01）
饶淑梅,马永超,高丽,范文娟[6]（2015）在《制作诱导多能干细胞饲养层细胞最佳条件的研究》一文中研究指出诱导多能干细胞(IPS)是近年来研究的热门,而IPS细胞体外培养需要饲养层细胞。小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)可分泌白血病抑制因子,作为IPS细胞的饲养层细胞。目的建立分离培养小鼠胚胎成纤维细胞的体系,制作高质量的IPS饲养层细胞。方法选妊娠11.5~15.5d的昆明小鼠制作MEF细胞,选择第叁代MEF细胞用不同浓度丝裂霉素C处理,制作饲养层细胞,在饲养层细胞上接种IPS细胞,观察各组IPS细胞生长状态并计算克隆数目。结果妊娠第13.5天的胚胎制作的MEF,经10μg/ml的丝裂霉素C处理3h的饲养层细胞状态较好,其IPS生长状况最好,克隆数目和质量最佳。结论不同胎龄胚胎分离的MEF可用做IPS饲养层,第13.5d的胚胎分离的MEF细胞经10μg/ml的丝裂霉素C处理3h制成的饲养层细胞最适于IPS细胞生长。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2015年02期）
赵瑞媛,刘春霞,李慧鹏,王申元,周欢敏[7]（2015）在《饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响》一文中研究指出家畜胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)的研究进展缓慢,绵羊ES细胞的研究虽早有报道,但仍未建立可稳定传代的细胞系。在已建立的绵羊体外受精发育体系的基础上,摸索了饲养层(Feeder)细胞对绵羊ES细胞生长的影响,包括在一定的丝裂霉素浓度下处理Feeder的时间、细胞种类、代数、接种密度及新鲜制备和冷冻复苏后的Feeder细胞,通过试验比较研究,目的在于筛选合适的饲养层细胞,为建立绵羊ES细胞体外培养体系奠定基础。结果表明,10μg/ml丝裂霉素C处理2~2.5h获得的1~5代的SEF和1~3代的MEF及两者的1∶1混合细胞都能较好地支持绵羊ES细胞的生长。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年02期）
谭小兵,George,T-J,Huang[8]（2014）在《人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法》一文中研究指出目的建立一种能维持人胚胎干细胞(ESC)和诱导性多功能干细胞(iPSC)生长的饲养层细胞的标准制备方法。方法选取受孕12.5~14.5 d的CF-1雌鼠,原代培养的鼠胚胎成纤维细胞(MEF)经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞,观察其维持人ESC和iPSC的生长情况;同时研究不同培养器具所需细胞数量,制备高质量饲养层细胞。结果经丝裂霉素C处理后,MEF可很好维持人ESC和iPSC的生长,使其保持自我更新能力和未分化状态;控制铺板的细胞密度,可得到高质量饲养层细胞。结论本实验得到的饲养层细胞能很好支持人ESC和iPSC生长,可作为饲养层细胞制备的标准方法使用。(本文来源于《国际口腔医学杂志》期刊2014年03期）
[9]（2012）在《用于胚胎干细胞培养的饲养层细胞》一文中研究指出胚胎干细胞体外培养条件要求非常严格,在体外极易分化、死亡,保持其未分化状态生长是充分利用胚胎干细胞资源的前提。目前,要保持其未分化状态生长,必须在培养基中加入分化抑制因子-白血病抑制因子或将其培养在能分泌分化抑制因子且无增殖能力的饲养层细胞上,其中饲养层细胞已常规用于各种胚胎干细胞培养过程。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年32期）
刘峰,徐永胜,俞海燕,王薇,张纯[10]（2011）在《人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究》一文中研究指出目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的表达为阳性,SSEA1表达为阴性,体外悬浮培养可以形成拟胚体。结论人脐带间充质干细胞可以作为人胚胎干细胞的饲养层细胞,支持其生长,并维持其未分化生长状态。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2011年04期）
饲养层细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
饲养层细胞在多能干细胞的体外培养中发挥重要的支持作用。传统饲养层细胞的制备方法主要是通过丝裂霉素C和伽玛射线照射处理小鼠胚胎成纤维细胞,使其失去分裂能力。饲养层细胞分泌的生长因子能够抑制多能干细胞的分化,促进自我更新。传统制备饲养层细胞的方法,制备过程复杂、需要饲养小鼠和获取早期胎儿、需要丝裂霉素C或射线照射设备等,这些要求极大制约了饲养层细胞制备方法的应用。本研究首次通过甲醇固定细胞的方法制备饲养层,简化了实验流程,提高了饲养层细胞的制备效率,便于广泛推广应用。实验结果如下:1.甲醇制备饲养层细胞方法的建立通过优化甲醇和丙酮的比例,发现丙酮比例高于70%,不利于饲养层细胞的制备。进一步通过比较甲醇不同浓度对饲养层细胞的影响发现,低浓度的甲醇对细胞的固定作用较弱。结合以上两个结果,最终确定100%的甲醇作为固定饲养层细胞的固定剂。通过比较甲醇温度和固定时间对饲养层细胞,以及多能干细胞生长的影响,确定甲醇的使用温度为4°C,固定时间为5 min。对饲养层细胞密度的优化结果显示甲醇固定的饲养层细胞密度不能低于2×10~4/cm~2。甲醇固定法不仅对小鼠原代成纤维细胞有效,建系的细胞和其他物种的细胞都可以通过甲醇固定法制备成饲养层细胞。2.甲醇固定法制备饲养层细胞用于多能干细胞培养小鼠多能干细胞,包括ES和iPS细胞,都可以在甲醇固定的饲养层细胞上稳定培养。与丝裂霉素C法制备的饲养层相比,小鼠多能干细胞在甲醇固定的饲养层上具有更快的增殖速度、更高的多能基因(Oct4、Nanog、Sox2)表达水平、更多的SSEA-1阳性克隆,并具备体内叁胚层分化潜能。人和猪iPS细胞也可以在甲醇固定的饲养层上稳定传代,有正常的克隆形态和稳定的多能基因表达。以上实验结果表明,甲醇固定法制备的饲养层细胞可以替代丝裂霉素C法制备的饲养层细胞,用于小鼠、人、猪等多能干细胞的体外培养。3.甲醇固定法制备饲养层细胞的其他应用饲养层细胞经过甲醇处理后能够牢固地固定在细胞培养皿表面,能够耐受抗性药物和低浓度胰蛋白酶的处理。实验结果表明,在甲醇固定法制备的饲养层细胞上可以快速地用药物处理筛选出稳转多能干细胞株,并且甲醇固定法制备的饲养层细胞在重复利用叁次后,小鼠多能干细胞SSEA-1的阳性率仍然高达90%以上。将甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板放置在不同温度环境中保存不同时间后,还可以用于多能干细胞的培养。通过检测多能干细胞碱性磷酸酶活性和多能基因的表达,确定甲醇固定法制备的饲养层细胞培养板可以放在室温长期保存。4.甲醇固定法制备饲养层细胞的作用机制饲养层细胞经过甲醇固定后,细胞表面存在有四型胶原和纤维粘连蛋白。甲醇固定的饲养层细胞经过四型胶原酶处理一定时间后,细胞表面的四型胶原和纤维粘连蛋白被降解。小鼠多能干细胞在四型胶原和纤维粘连蛋白被降解的饲养层细胞上贴壁能力明显下降,部分克隆在培养基中处于悬浮状态。多能性检测发现,贴壁能力下降的小鼠多能干细胞退出na?ve状态,出现primed状态。以上结果表明,四型胶原和纤维粘连蛋白被四型胶原酶降解后,多能干细胞在甲醇固定的饲养层上的贴壁能力下降,细胞多能状态发生转变,即甲醇固定的饲养层细胞的胞外基质蛋白对多能干细胞贴壁能力和多能状态的转变有重要影响。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
饲养层细胞论文参考文献
[1].周芳颖,刘玉琴.饲养层细胞作用机制研究进展[J].基础医学与临床.2019
[2].任亚辉.甲醇固定法制备饲养层细胞的应用和作用机制[D].西北农林科技大学.2018
[3].邓磊玉,林戈,卢光琇.经典饲养层细胞Wnt表达的差异及其对人胚胎干细胞Wnt/β-Catenin信号通路的影响[J].激光生物学报.2016
[4].刘进,席超.饲养层细胞培养[J].生物学通报.2015
[5].战立香.高效经济型饲养层细胞制备体系的研究和应用[D].吉林大学.2015
[6].饶淑梅,马永超,高丽,范文娟.制作诱导多能干细胞饲养层细胞最佳条件的研究[J].中国优生与遗传杂志.2015
[7].赵瑞媛,刘春霞,李慧鹏,王申元,周欢敏.饲养层细胞对绵羊胚胎干细胞体外培养的影响[J].中国生物工程杂志.2015
[8].谭小兵,George,T-J,Huang.人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法[J].国际口腔医学杂志.2014
[9]..用于胚胎干细胞培养的饲养层细胞[J].中国组织工程研究.2012
[10].刘峰,徐永胜,俞海燕,王薇,张纯.人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究[J].中国实验动物学报.2011