嗜热芽孢杆菌丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶的基因克隆、蛋白表达纯化及活性分析

论文摘要

偶联法测定酶的活性是常用酶活测定方法之一。核苷二磷酸（NDP）是核苷三磷酸的β,γ高能磷酸键水解产物之一,丙酮酸激酶（PK）和乳酸脱氢酶（LDH）是用来测定NDP生成的常用偶联酶。为了分析嗜热菌苍白空气芽孢杆菌（Aeribacillus pallidus JH-7）（最适生长温度为50℃）的PK和LDH是否可以作为50℃条件下的偶联酶,研究从Aeribacillus pallidus JH-7基因组中克隆pk和ldh,连接到表达载体pET24a。结果表明,经诱导表达、纯化得到纯度达95%以上的Ap PK和Ap LDH。并利用分光光度法,分别对Ap LDH和Ap PK的动力学常数及催化效率进行了分析。结果表明,Ap PK对NDP的最适底物为ADP,催化效率为5×104 mol/（L·s）,最适p H值为8.0,最适温度为45℃;NADH为Ap LDH的最适底物,催化效率为3.7×105 mol/（L·s）,最适pH值为5.8,最适温度为35℃。虽然50℃不是Ap LDH和Ap PK的最适温度,但它们在此温度下的kcat分别为16.4,64.5 s-1,暗示它们可以作为此温度下的偶联酶。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王文珍,王慧慧,陈美雯,徐如飞,蒋培蓉,蒲首丞,巩菊芳,孙梅好

关键词: 嗜热菌,丙酮酸激酶,乳酸脱氢酶,原核表达,酶活性测定

来源: 山西农业科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 浙江师范大学化学与生命科学学院

基金: 国家自然科学基金项目(30800019),浙江省重中之重学科生物学开放基金项目(2017KFJJ001)

分类号: Q78;Q936

页码: 580-584+593

总页数: 6

文件大小: 355K

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标签：嗜热菌论文;  丙酮酸激酶论文;  乳酸脱氢酶论文;  原核表达论文;  酶活性测定论文;