导读:本文包含了扩增前引物延伸论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:引物,地中海,产前诊断,基因,基因组,胚胎,分子病。
扩增前引物延伸论文文献综述
韦红英,龙桂芳,刘壮,林伟雄[1]（2007）在《引物延伸预扩增在β-地中海贫血产前基因诊断中的应用研究》一文中研究指出目的探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(NRBC)经引物延伸预扩增(PEP)后在β-地中海贫血产前基因诊断中应用的可行性。方法以2004年7月至2005年6月在广西医科大学第一附属医院行产前诊断,夫妇均为轻型β-地中海贫血,孕龄9～34周的28例孕妇为研究对象。显微操作获取母血中NRBC,PEP对单个NRBC进行全基因组扩增,短串联重复序列(STR)鉴定所取细胞的来源。证实为胎儿细胞的PEP产物作为模板进行β-珠蛋白基因扩增,反向点杂交确定胎儿β-珠蛋白基因型。结果每例发现NRBC4～13个,约43.6%的NRBC来源于胎儿。单个NRBC经PEP后STR及β-珠蛋白基因扩增成功率分别为100.0%和90.8%。经反向点杂交可鉴定胎儿β-珠蛋白基因点突变类型,与传统的产前诊断结果相比较,符合率为85.7%,误诊率14.3%。结论母血中单个胎儿NRBC经PEP后可以进行产前基因诊断,不仅可以应用于β-地中海贫血,也可应用于其它遗传病,是一条可供尝试的无创性产前诊断途径。(本文来源于《中国实用妇科与产科杂志》期刊2007年11期）
陈玲,王慧君,刘超[2]（2007）在《改良扩增前引物延伸技术检测痕量DNA》一文中研究指出痕量DNA又称低拷贝模板(low copy number,LCN)。G ill等[1]最初对其定义为少于100 pg的DNA模板。现有的PCR-STR方法,虽从一定程度上解决了微量模板DNA分析的难题,但对于痕量DNA仍很难检测成功。由于痕量生物检材是法(本文来源于《医学研究生学报》期刊2007年04期）
陈玲[3]（2007）在《改良扩增前引物延伸方法的法医学应用研究》一文中研究指出研究背景与目的在法医学检案实践中，常遇到样本DNA含量极其有限，以致DNA分型无法完成或不能满足重复检测的需要。因此，对微量模板DNA分析便成为法医学DNA检验的一个难题。以PeR-STR为代表的遗传标记分析技术虽然一定程度上解决了法医学微量检材的难题，但一些检材仍因DNA含量极其有限而无法检测成功，或仅检出少数基因座而无法使累计鉴别能力达到认定水平。这类检材被称为痕量DNA，也称低拷贝模板(low copy number，LCN)，Gill等将其定义为低于100pg的模板DNA。为解决这一难题，有研究用增加PeR循环数，但模板DNA量太低时易产生等位基因丢失或非特异带，且循环数增加到一定程度后再增加循环数也不会显着增加灵敏度；另外，有人试图用巢式PCR，但巢式PCR技术仅限于单一位点分析，无法提高目前法医学中常规DNA检测所用的多位点复合扩增所需的模板数量。全基因组扩增(Whole Genome Amplification，WGA)是一种能从有限的DNA样品获得充足的DNA量供后续分析的技术，其基本思路是通过对微量组织甚至单个细胞的整个基因组DNA扩增，大幅度增加DNA的总量。因此被认为是目前可以解决上述难题的一种有效方法。WGA技术经10余年探索，在方法上已逐步发展和不断完善起来，已被广泛用于疾病基因研究等领域，并取得了良好的效果。但在法医学方面的应用很少。在目前常用的几种WGA方法中，改良扩增前引物延伸方法(Improved primer extension preamplification，IPEP)和多重置换扩增方法(multipledisplacement amplification，MDA)对STR基因座分型显示出较好的效果。故本研究探讨了这两种方法用于法医学微量检材的效果，包括对其灵敏度、扩增忠实性、能否用于法医学常用STR基因座及常用检材等进行系统性研究，从而对其用于法医学实践的可行性进行评价，并建立稳定可行的技术方案。方法1．对30例口腔拭子样品，采用酚—氯仿法提取DNA，实时荧光定量PCR技术定量，并分别稀释成1ng、0.5ng、0.1ng、0.05ng、0.025ng、0.01ng六种模板量DNA，然后进行MDA反应和IPEP反应。采用实时荧光定量PCR技术检测MDA方法和IPEP方法的产物浓度，比较两种方法的扩增效率。分别以MDA产物和IPEP产物为模板DNA，用AmpFLSTR(?) Identifiler(?)试剂盒扩增，ABI3100基因分型仪检测基因型，比较MDA产物和IPEP产物用于STR分型的效果。2．对IPEP方法反应体系的成分和终浓度进一步优化，建立改良IPEP方法，并检测其扩增效率和STR分型效果。将改良IPEP方法用于30例血液、30例血纱、30例精液等叁类法医学常见生物检材进行检测，观察改良IPEP方法的可重复性和对法医学常见生物性检材的适用性。3．将改良IPEP方法用于20例汗潜指印、20例一次性牙刷、20例自然脱落头发等叁种法医学常见疑难微量检材的模拟案例，观察改良IPEP方法对上述检材的STR分型效果；用于现场果核10例、矿泉水瓶10例、烟蒂10例、衣领10例等实际案例样品，观察改良IPEP方法对实际案件中微量DNA样品的检验效果。结果1．MDA法产量为5.15μg～19.75μg，可对模板DNA增加5.15x10~3～1.98x10~6倍；IPEP法产量为0.5ng～66ng，可对模板DNA增加25～310倍。MDA法产物浓度高于IPEP法，差异有显着性意义(F=3643.433，P＜0.001)。2．常规检测法、MDA法、IPEP法的基因座检出数有显着性差异(F=1033.297，P＜0.001)。当DNA模板量为1ng时，常规检测方法、MDA方法、IPEP方法均可获得复合扩增系统所有基因座的准确分型结果；当DNA模板量为0.5ng时，常规检测方法和IPEP方法均获得所有基因座的准确分型结果，MDA法获得10个以上基因座的准确分型结果；当DNA模板量为0.1ng～0.01ng时，MDA法基因座检出数高于常规检测法，IPEP法基因座检出数高于MDA法。3．DNA模板量≥1ng，其MDA产物杂合子基因座的等位基因扩增均衡；DNA模板量≤0.5ng，其MDA产物的STR分型图谱可见等位基因不平衡或丢失现象，且模板DNA量越低，等位基因不平衡或丢失现象越明显。DNA模板量≥0.05ng，其IPEP产物杂合子基因座的等位基因扩增均衡；DNA模板量≤0.025ng，其IPEP产物的STR分型图谱可见等位基因不平衡或丢失。MDA产物和IPEP产物用于STR分型时均未观察到非特异产物峰。4．采用保真性更好的DNA聚合酶和增加随机引物用量，建立了改良IPEP方法。0.1ng、0.05ng、0.025ng、0.01ng四组模板量DNA经改良IPEP法扩增所得产物浓度均高于IPEP法，差异有显着性(F=289.899，P＜0.001)。改良IPEP法对上述模板DNA扩增获得3ng～84ng产物，可使模板DNA增加160～1220倍。DNA模板量为0.025ng时，改良IPEP方法可获得完整准确的分型结果。DNA模板量为0.01ng时，改良IPEP法的平均基因座检出数高于IPEP法，部分基因座仍未检出，以D7S820、D18S51、FGA等较常见。改良IPEP方法的产物用于STR分型时，未见非特异产物峰及等位基因不平衡或丢失。5．改良IPEP方法对0.025ng血液DNA、血纱DNA、精液DNA检测均获得所有基因座的准确分型结果。6．改良IPEP方法可显着提高汗潜指印DNA(t=5.423，P＜0.001)、一次性牙刷DNA(t=6.835，P＜0.001)的基因座检出数，但对自然脱落毛发DNA的基因座检出数低于常规检测法(t=3.249，P＜0.001)。改良IPEP方法对实际案件中果核、杯口、烟蒂、衣领等检材的的检测成功率和平均基因座检出数均高于常规检测方法，且检出STR基因座数均不少于9个。结论1．MDA法产量高，但灵敏度低，当模板量低于1ng时，产物序列保真性差，影响后续STR分型的准确性。因此，MDA法可能不适用于痕量DNA检测。2．IPEP法灵敏度高，产物序列保真性好，对0.05ng的基因组DNA可获得良好的STR分型效果，但产量低。3．DNA聚合酶和随机引物用量对IPEP方法有重要影响。采用保真性更好的DNA聚合酶和增加随机引物至一定终浓度，提高了扩增效率。在此基础上建立的改良IPEP方法的产物序列保真性好，且产量和灵敏度都进一步提高，改善了痕量DNA的STR分型效果。4．改良IPEP方法对于口腔拭子、血液、血纱、精液等不同生物性检材、不同状态的同种检材均获得准确可靠的结果，表明了改良IPEP方法的稳定性好，适用于上述法医学常见生物性检材。5．改良IPEP方法可显着提高微量皮肤脱落细胞、微量口腔粘膜脱落细胞的检测成功率和平均基因座检出数，以满足法医学个体识别要求。但改良IPEP方法对自然脱落毛发这类降解的短片段DNA样品效果不佳。(本文来源于《南方医科大学》期刊2007-04-01）
韦红英,龙桂芳,刘壮,林伟雄,李树全[4]（2006）在《引物延伸预扩增技术在β地中海贫血无创性产前基因诊断的应用研究》一文中研究指出目的:探讨孕妇外周血中单个胎儿有核红细胞(Nucleated red blood cell,NRBC)经引物延伸预扩增 (Primer extension preamplification,PEP)后在β地中海贫血无创性产前基因诊断中应用的可行性,试图建立一条新的β地中海贫血无创性产前基因诊断途径。方法:1．新鲜孕妇外周血用淋巴细胞分离液分离到单个核细胞,涂片,干燥,1％联苯胺染色,苏木素复染。400倍光镜下观察识别到NRBC,显微操作器将细胞单个获取。2．PEP法对单个NRBC进行全基因组扩增,产物分装为数份保存备检。3．取待检细胞的一份PEP产物进行短串联重复序列(Short tandem repeat,STR)PCR,根据STR基因型来鉴定所取(本文来源于《中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编》期刊2006-11-01）
韦红英,龙桂芳,林伟雄,李树全[5]（2006）在《引物延伸预扩增后STR分型在鉴定母血中胎儿有核红细胞的应用》一文中研究指出目的探讨一种鉴定母血中胎儿有核红细胞(NRBC)的方法,为无创性产前基因诊断创造必要条件。方法联苯胺染色识别孕妇外周血中 NRBC,经显微操作获取,并以引物延伸预扩增(PEP)对单个 NRBC 进行全基因组扩增后,用短串联重复序列(STR)分析其基因型,与父母基因型比对,确定该细胞的来源。结果 28例轻型β地中海贫血孕妇外周血样本中每例发现 NRBC 4～13个/5ml,经鉴定每例有胎儿 NRBC 2～8个/5ml,约43.6%的 NRBC 来源于胎儿。结论 PEP 后 STR 基因型分析能有效鉴定孕妇外周血中 NRBC 的来源,使应用单个胎儿 NRBC 进行产前基因诊断成为可能。(本文来源于《中华血液学杂志》期刊2006年10期）
焦泽旭,庄广伦,周灿权,梁晓燕,张敏芳[6]（2003）在《应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究》一文中研究指出植入前遗传学诊断 (PGD)由于可检测的材料仅 1～ 2个卵裂球细胞 ,很难进行一个基因的多种突变或多位点基因改变的基因分析。引物延伸预扩增 (PEP)是随机扩增单细胞全基因组的有效方法 ,有望解决这个问题。我们在本研究中探讨PEP在地中海贫血 (珠蛋白(本文来源于《中华血液学杂志》期刊2003年10期）
马锦琪,盛毅,赵亚南,纪亚忠[7]（2003）在《引物延伸预扩增用于胚胎种植前诊断的实验研究》一文中研究指出目的 用引物延伸预扩增 (PEP)方法对种植前胚胎进行单基因病诊断的实验研究。方法 取IVF后剩余胚胎的一个卵裂球用PEP方法 ,扩增SRY、ZP3 、RhCE、RhD和FVIII 5个基因 ,而同一胚胎的另一个卵裂球双重套式PCR扩增SRY和ZP3 基因。结果 PEP分析分别由 6个胚胎获得的 6个卵裂球 ,1- 4号胚胎有 19个基因呈阳性 (19/ 2 0 ) ,1个基因阴性 ,5 ,6号胚胎除SRY均阴性 ,其余基因为阳性 ;而 6个胚胎的卵裂球双重套式PCR扩增SRY和ZP3 基因的结果与同一胚胎PEP的结果相同。结论 采用PEP方法进行种植前胚胎单基因病的诊断是可靠、准确的 ,且可用于无创性产前诊断。(本文来源于《中国优生与遗传杂志》期刊2003年02期）
焦泽旭,庄广伦,周灿权,舒益民,李洁[8]（2003）在《引物延伸预扩增法应用于β-地中海贫血患者胚胎植入前遗传学诊断——附一例报告》一文中研究指出目的 探讨对 β 地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断 (PGD)的方法。 方法 两对夫妇双方均分别为密码子 41 42 ( TCTT)及插入序列 (IVS) Ⅱ 65 4(C→T)突变杂合子 ,在本中心进行超排卵和体外受精 胚胎移植治疗 ,胚胎活检后应用全基因组扩增技术及反向点杂交进行胚胎PGD ,根据诊断结果选择健康的胚胎移植入子宫。结果 2例患者共获卵 3 5个 ,受精率为 87% ,共活检胚胎16个 ,获卵裂球 2 5个 ,单卵裂球总扩增效率为 84% ,等位基因脱扣率为 15 %。 2例患者共移植 5个胚胎 ,1例获得妊娠 ,已分娩健康双胎。结论 应用引物延伸预扩增技术可对 β 地中海贫血进行PGD ,达到优生的目的(本文来源于《中华妇产科杂志》期刊2003年03期）
袁淑慧,金帆,黄荷凤[9]（2002）在《单细胞扩增前引物延伸多基因位点检测研究》一文中研究指出目的 :考察单细胞扩增前引物延伸 (PEP)全基因组扩增 ,后续巢式 PCR同步检测β地中海贫血突变基因 CD17、nt- 2 8及连锁基因 (ATTTT)、18和 2 1号染色体短串联重复序列 D18S5 1、D2 1S11和 D2 1S14 11、囊性纤维病 CFΔ F5 0 8及连锁基因 (GATT)、杜氏肌营养不良症 DMD基因外显子 17和 4 8以及 Y染色体性别决定基因 SRY的可行性。方法 :显微操作获取单个淋巴细胞和胚胎细胞 ,PEP全基因组扩增 ,后续特异性巢式 PCR,检测上述 10个基因位点的单细胞扩增成功率、假阳性率、假阴性率。结果 :上述 10个位点的单个淋巴细胞扩增成功率、假阳性率和假阴性率分别为 89.5 %、0 .4 8%和 2 .5 0 % ,单个胚胎细胞扩增成功率和假阳性率分别为 85 .5 6 %和 3.0 %。结论 :单细胞 PEP后续巢式 PCR同步检测上述 10个基因位点有较高的扩增成功率和很低的假阳性率和假阴性率 ,具有应用于植入前遗传学诊断的实际可行性。(本文来源于《浙江大学学报(医学版)》期刊2002年03期）
马锦琪,纪亚忠,盛毅,赵亚南[10]（2001）在《单细胞引物延伸预扩增分析多个基因》一文中研究指出目的 建立一种单细胞 (individual cell)水平引物延伸预扩增 (primer extensionpreamplification,PEP)方法 ,利用单个细胞同时分析多个基因。方法 采用 10 bp的随机引物先对单细胞的基因组预扩增 ,取其产物 5μl分别对 SRY、ZP3、Rh CE、Rh D、F 5个基因进行套式 PCR扩增。结果 单细胞 PEP后的产物能同时扩增 5个基因 ;对 4种已知基因型的白细胞进行诊断 ,正确率为 95 .6 %。结论PEP技术可以在单细胞水平分析 5个基因 ,可用于胚胎种植前诊断及无创性产前诊断(本文来源于《中华医学遗传学杂志》期刊2001年05期）
扩增前引物延伸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
痕量DNA又称低拷贝模板(low copy number,LCN)。G ill等[1]最初对其定义为少于100 pg的DNA模板。现有的PCR-STR方法,虽从一定程度上解决了微量模板DNA分析的难题,但对于痕量DNA仍很难检测成功。由于痕量生物检材是法
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
扩增前引物延伸论文参考文献
[1].韦红英,龙桂芳,刘壮,林伟雄.引物延伸预扩增在β-地中海贫血产前基因诊断中的应用研究[J].中国实用妇科与产科杂志.2007
[2].陈玲,王慧君,刘超.改良扩增前引物延伸技术检测痕量DNA[J].医学研究生学报.2007
[3].陈玲.改良扩增前引物延伸方法的法医学应用研究[D].南方医科大学.2007
[4].韦红英,龙桂芳,刘壮,林伟雄,李树全.引物延伸预扩增技术在β地中海贫血无创性产前基因诊断的应用研究[C].中华医学会第十四次全国儿科学术会议论文汇编.2006
[5].韦红英,龙桂芳,林伟雄,李树全.引物延伸预扩增后STR分型在鉴定母血中胎儿有核红细胞的应用[J].中华血液学杂志.2006
[6].焦泽旭,庄广伦,周灿权,梁晓燕,张敏芳.应用引物延伸预扩增方法对地中海贫血进行植入前遗传学诊断的初步研究[J].中华血液学杂志.2003
[7].马锦琪,盛毅,赵亚南,纪亚忠.引物延伸预扩增用于胚胎种植前诊断的实验研究[J].中国优生与遗传杂志.2003
[8].焦泽旭,庄广伦,周灿权,舒益民,李洁.引物延伸预扩增法应用于β-地中海贫血患者胚胎植入前遗传学诊断——附一例报告[J].中华妇产科杂志.2003
[9].袁淑慧,金帆,黄荷凤.单细胞扩增前引物延伸多基因位点检测研究[J].浙江大学学报(医学版).2002
[10].马锦琪,纪亚忠,盛毅,赵亚南.单细胞引物延伸预扩增分析多个基因[J].中华医学遗传学杂志.2001
论文知识图
