采用酵母双杂交系统筛选梨PbTMT4互作因子

采用酵母双杂交系统筛选梨PbTMT4互作因子

论文摘要

为筛选梨糖转运相关蛋白PbTMT4互作因子,基于已经建立好的砀山酥梨果实发育时期的cDNA文库,利用MatchmakerTMGold酵母双杂交系统,以构建的重组质粒pDHB1-PbTMT4为诱饵质粒,采用PEG/LiAc法转化酵母菌株NMY51。利用表型筛选法检测PbTMT4的自激活作用和毒害作用,利用氨基酸缺陷型培养基筛选PbTMT4互作因子。结果表明,诱饵蛋白PbTMT4在酵母双杂交系统中无毒性和自激活作用。通过酵母双杂交筛选以及测序和序列比对分析,共获得13个与PbTMT4蛋白相互作用的宿主蛋白。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 RNA提取和cDNA合成
  •   1.3 基因克隆引物设计
  •   1.4 基因克隆及诱饵表达载体构建
  •   1.5 诱饵蛋白毒性及自激活活性检测
  •   1.6 PbTMT4互作因子初步筛选及分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 PbTMT4基因克隆及融合载体构建
  •   2.2 酵母转化
  •   2.3 自激活和毒性试验
  •   2.4 酵母双杂交筛选及阳性菌落分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 程寅胜,杨立,陈健秋,张绍铃,伍涛,张虎平

    关键词: 酵母双杂交系统,文库,互作因子

    来源: 湖北农业科学 2019年24期

    年度: 2019

    分类: 农业科技

    专业: 园艺

    单位: 湖北省农业科学院果树茶叶研究所,南京农业大学园艺学院

    基金: 中央高校基本科研业务费专项(KYZ201834),湖北省自然科学基金项目(2018CFB285)

    分类号: S661.2

    DOI: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.24.058

    页码: 240-245

    总页数: 6

    文件大小: 3363K

    下载量: 172

    相关论文文献

    • [1].梨糖转运相关基因PbTMT4启动子克隆及功能分析[J]. 园艺学报 2019(01)

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    采用酵母双杂交系统筛选梨PbTMT4互作因子
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