鸭甲肝病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

鸭甲肝病毒2型TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立

论文摘要

研究利用全基因合成技术合成DHAV-2全基因组序列,并以此为标准品建立检测DHAV-2的TaqMan实时荧光定量PCR方法。结果表明:建立的方法敏感性高,最低检测限仅为33.7拷贝/μL;特异性强,对鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)、禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,N-DRV)、鸭源禽Ⅰ型副黏病毒(Duck-origin avian paramyxovirus type 1,APMV-1)和禽坦布苏病毒(Avian Tembusu virus,ATmV)均无交叉扩增;重复性佳,组内和组间变异系数最高分别为1.68%和2.19%。对2018年福建地区临床收集的128份鸭源病料进行检测,结果未检测DHAV-2感染阳性。研究结果为DHAV-2的快速检测试剂盒研究及储备DHAV-2检测技术奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 毒株
  •   1.2 主要试剂和仪器
  •   1.3 TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立
  •     1.3.1 标准品准备
  •     1.3.2 引物设计
  •     1.3.3 反应条件优化和标准曲线的建立
  •     1.3.4 特异性分析
  •     1.3.5 敏感性检测
  •     1.3.6 重复性试验
  •   1.4 临床样品检测
  • 2 结果
  •   2.1 优化后的TaqMan实时荧光定量PCR反应条件
  •   2.2 TaqMan实时荧光定量PCR的标准曲线
  •   2.3 敏感性试验
  •   2.3 特异性分析
  •   2.4 重复性试验
  •   2.5 临床样品的检测
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 万春和,陈翠腾,施少华,程龙飞,傅光华,刘荣昌,陈红梅,傅秋玲,黄瑜

    关键词: 鸭甲肝病毒型,实时荧光定量

    来源: 中国家禽 2019年15期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 福建省农业科学院畜牧兽医研究所福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心福建省禽病防治重点实验室

    基金: 福建省属公益类科研院所基本科研专项(2018R1023-5),福建省农业科学院青年科技创新团队(STIT2017-3-10)

    分类号: S852.65

    DOI: 10.16372/j.issn.1004-6364.2019.15.005

    页码: 23-27

    总页数: 5

    文件大小: 1384K

    下载量: 47

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