导读:本文包含了反转录套式聚合酶链反应论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:转录,链式反应,病毒,猪瘟,多态性,限制性,片段。
反转录套式聚合酶链反应论文文献综述
李安,崔言顺,沈志强,谢金文,王金良[1]（2011）在《新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立》一文中研究指出对GenBank中登录的25株猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株基因组全序列进行比较分析,在其高度保守区设计1对通用引物,扩增片段为609bp,并在该对引物扩增区域内设计针对疫苗弱毒的特异引物,扩增片段为237bp,建立一种能够区分猪瘟病毒强毒和疫苗弱毒的敏感、特异、重复性好的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别诊断方法。该方法能将我国大陆地区流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒与疫苗弱毒完全区分开来,且不与牛病毒性腹泻病毒及其他猪源病毒发生非特异反应。应用本试验建立的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)方法可以及早对猪瘟作出准确诊断,并可将强毒感染猪迅速从弱毒疫苗免疫猪群中筛选出来,减少了未感染免疫猪被误杀的可能性。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2011年01期）
司微,崔尚金,张洪英,刘立奎[2]（2007）在《检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用》一文中研究指出根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2007年03期）
李艳,仇华吉,王秀荣,张守发,朱庆虎[3]（2006）在《鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立》一文中研究指出【目的】建立一种能区分猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。【方法】根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列,选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物,建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。【结果】应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0.04pg的CSFVRNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。【结论】本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒,减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。(本文来源于《中国农业科学》期刊2006年09期）
高正琴,贺争鸣,邢瑞昌,卫礼,王吉[4]（2005）在《反转录-嵌套式聚合酶链反应检测乙脑病毒》一文中研究指出为进一步发展JEV分子诊断技术,本文应用嵌套式RT PCR方法检测人用猪源性生物制品中外源性JEV,现将结果报告如下。1.RT PCR和RT nestedPCR特异性根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M55506),针对E基因区段,设计合成两(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2005年04期）
李艳,仇华吉,王秀荣,张守发,朱庆虎[5]（2005）在《检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立》一文中研究指出根据GenBank上登录的所有猪瘟病毒(classical swine fever,CSFV)基因组全序列,选择高度保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗特异性引物P2及猪瘟强毒特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分猪瘟强弱毒的复合反转录一套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从猪瘟兔化弱毒株和猪瘟强毒石门株基因组中扩增出了大小分别为447 bp和343 bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447 bp和343 bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(RV)、乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)的细胞培养物以及正常细胞基因组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。该方法可以检测出0.04 pg的病毒RNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似猪瘟弱毒。用限制性片段长度多态性(RFIP)对15份病料、猪瘟兔化弱毒株和石门株的RT-nPCR产物进行分析,发现石门株和14份黑龙江省强毒样品的扩增产物中均能被ApaI切开,而猪瘟兔化弱毒株和1份黑龙江省弱毒样品无此识别位点,但有1个BanⅡ识别位点。从14份样品中抽检7份,对NS5B基因进行种系发生分析表明,它们均接近于石门株。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测猪瘟病毒感染并把强毒和弱毒区分开,有助于减少未感染的免疫猪被误杀的可能,降低经济损失。(本文来源于《中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集》期刊2005-05-01）
李春华[6]（2000）在《反转录—套式聚合酶链反应检测、鉴别鸡新城疫病毒强、弱毒株的研究》一文中研究指出为了快速、准确地诊断鸡新城疫(ND)，本研究根据新城疫病毒(NDV)基因组结构特点及强、弱毒株F_0裂解位点的序列差异设计合成了3对引物(P_1、P_2，P_3、P_4和P_3、P_5)，建立了检测、鉴别鸡NDV强、弱毒株的反转录-套式聚合酶链反应(RT-nested PCR)技术。用RT-套式PCR技术对NDV标准强毒株F_(48)E_8、弱毒株La Sota、地方强毒株(HJ)及对照病毒IBV、IBDV感染的SPF鸡胚尿囊液和人工感染NDV鸡、自然发病鸡组织病料进行了检测，结果为：引物P_1、P_2为NDV的通用引物，对2株NDV标准毒和HJ株均可扩增出与预期大小相符的1.7Kb片段，而其它对照病毒IBV、IBDV、正常鸡胚尿囊液、非免疫健康鸡组织的RNA扩增结果为阴性；引物P_3为套式PCR的共用引物，以RT-PCR产物为模板，用引物P_3、P_4只能扩增出NDV强毒株靶序列，而用引物P_3、P_5只能扩增出NDV弱毒株靶序列，得到大小均为254bp的单一片段；该技术最低可以检出10fg的NDV RNA模板。试验表明，该RT-套式PCR技术对NDV的检测具有特异、灵敏、快速、简便的优点，不仅适用于对鸡胚毒的检测，还适用于对病死鸡组织匀浆的检测，而且还可以鉴别NDV强、弱毒株，是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子生物学诊断方法。(本文来源于《河南农业大学》期刊2000-06-30）
李立[7]（2000）在《反转录—套式聚合酶链式反应检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的研究》一文中研究指出本研究成功地建立了检测牛病毒性腹泻/粘膜病的反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nested PCR)技术。根据BVDV NADL株、Oregon C_(24)V和猪瘟病毒5，端非编码区保守核酸序列的异同，利用计算机设计合成了两套引物，分别对BVDV NADL株、Oregon C_(24)V、BVDV地方分离株和猪瘟兔化弱毒疫苗株等不同毒株的RNA进行了提取、反转录、PCR和套式PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳检查，用外部引物扩增BVDV和猪瘟病毒都获得了预期长度约为280bp的片段。用内部引物扩增第一次PCR的产物，叁株BVDV获得191bp片段，猪瘟病毒未被扩出，与预期结果相符。对伪狂犬病毒和未接种病毒进行PCR扩增，结果均为阴性。该技术检测到病毒最低浓度达10~(-1)TCID_(50)水平。以上结果表明RT-nested PCR技术对BVBV检测不仅具有特异、敏感、快速诊断的优点，而且可以与抗原性相似的猪瘟病毒加以区分。 另外，对RT-nested PCR技术中摸板RNA的制备及保存和BVDV的诊断技术进行了试验和探讨。(本文来源于《河南农业大学》期刊2000-06-30）
朱进,张云,唐家琪,李先富,郭恒彬[8]（1998）在《套式反转录-聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA》一文中研究指出选择覆盖肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）膜蛋白（ＭＰ）基因的保守区核苷酸序列合成２对引物，采用异硫氰酸胍一步抽提ＲＮＡ，建立了ＲＴ－ＰＣＲ检测鼠体恙螨及游离恙螨体内ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的方法，扩增产物经凝胶电泳及斑点印迹杂交证实具有特异性。结果显示，ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５０只组、１０只组、游离螨５０只组，ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠肺１０００ｍｇ、５００ｍｇ组经ＲＴ－ＰＣＲ检测为阳性；ＨＦＲＳＶ抗原阳性鼠体恙螨５只组，ＨＦＲＳＶ抗原阴性鼠体恙螨５０只和１０只组，游离螨１０只和５只组，鼠肺ＨＦＲＳＶ抗原阳性１００ｍｇ组均未见有明显扩增带。进一步用套式反转录－聚合酶链反应（ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ）检测，在ＲＴ－ＰＣＲ未测出ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ的各组中均检测有ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ。结果表明ＮｅｓｔｅｄＲＴ－ＰＣＲ具有高特异、高敏感的特点，可用于检测恙螨体内微量ＨＦＲＳＶ－ＲＮＡ，为确认恙螨作为ＨＦＲＳＶ的传播媒介提供了分子生物学证据。(本文来源于《中国兽医学报》期刊1998年05期）
吴建伟,孟阳春,李允鹤,周洪福,诸葛洪祥[9]（1998）在《套式反转录-聚合酶链反应检测革螨体内肾综合征出血热病毒的初步研究》一文中研究指出用ＨＴＮ病毒姬鼠型Ｍ基因型特异性引物，异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，ｎｅｓｔｅｄＲＴＰＣＲ检测鼠肺和厩真厉螨体内７６１１８株病毒ＲＮＡ，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和点印迹杂交证实。结果表明，姬鼠型７６１１８株病毒液和叮刺感染病毒乳鼠后第１０天厩真厉螨组织悬液接种乳鼠第９天鼠肺、叮剌后第１０天和３０天螨，均检出病毒ＲＮＡ。３０只螨样本提取ＲＮＡ也能扩增出病毒ＲＮＡ。家鼠型ＵＲ株感染样本不能被扩增。该方法具有较高特异性和敏感性，操作简单，结合原位分子杂交，可用于螨媒传播ＨＦＲＳＶ的研究。(本文来源于《中国公共卫生》期刊1998年03期）
刘丽慧[10]（1997）在《反转录和巢式聚合酶链反应诊断胎儿风疹病毒感染:34例胎儿诊断的研究》一文中研究指出诊断胎儿风疹病毒感染的方法过去多是采用检测胎儿血中风疹病毒特异免疫球蛋白M(IgM)抗体,虽然有效,但因为胎儿产生IgM抗体至少要在孕21～22周,故而不够及时。Ho-Terry等人通过分子生物学技术中的扩增方法成功地在绒毛中检测到风疹病毒(RNA),使在孕早期即可得到肯定的诊断结(本文来源于《国外医学(计划生育分册)》期刊1997年01期）
反转录套式聚合酶链反应论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
反转录套式聚合酶链反应论文参考文献
[1].李安,崔言顺,沈志强,谢金文,王金良.新型反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗方法的建立[J].中国兽医学报.2011
[2].司微,崔尚金,张洪英,刘立奎.检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用[J].中国预防兽医学报.2007
[3].李艳,仇华吉,王秀荣,张守发,朱庆虎.鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立[J].中国农业科学.2006
[4].高正琴,贺争鸣,邢瑞昌,卫礼,王吉.反转录-嵌套式聚合酶链反应检测乙脑病毒[J].中国生物制品学杂志.2005
[5].李艳,仇华吉,王秀荣,张守发,朱庆虎.检测和鉴别猪瘟强弱毒的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立[C].中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集.2005
[6].李春华.反转录—套式聚合酶链反应检测、鉴别鸡新城疫病毒强、弱毒株的研究[D].河南农业大学.2000
[7].李立.反转录—套式聚合酶链式反应检测牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的研究[D].河南农业大学.2000
[8].朱进,张云,唐家琪,李先富,郭恒彬.套式反转录-聚合酶链反应检测恙螨及鼠肺内肾综合征出血热病毒RNA[J].中国兽医学报.1998
[9].吴建伟,孟阳春,李允鹤,周洪福,诸葛洪祥.套式反转录-聚合酶链反应检测革螨体内肾综合征出血热病毒的初步研究[J].中国公共卫生.1998
[10].刘丽慧.反转录和巢式聚合酶链反应诊断胎儿风疹病毒感染:34例胎儿诊断的研究[J].国外医学(计划生育分册).1997
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