吉林省集安市益盛药业134200
摘要：目的通过对金银花中绿原酸提取过程的研究，从而确定最佳提取方案，为下一步工业化生产高纯度绿原酸奠定基础。方法采用超声波法对金银花进行提取，用乙酸乙酯进行萃取，经考察本法非常适合从金银花中提取绿原酸，采用UV法进行测量。结果通过UV法测定绿原酸含量可达79.69%，最终确定的最佳工艺为温度50℃、提取时间25min、pH为6，乙醇用量为80ml。结论本工艺条件稳定，可行。
关键词：超声波；绿原酸；提取
绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名3O咖啡酰奎尼酸，分子量：354.30，是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，为众多药材以及中成药抗菌解毒、消炎利胆的主要有效成分，同时是某些中药制剂质量控制的重要指标［1］。目前，我国以金银花为原料加工制成的市售产品除复方制剂外，多为浸膏或粗粉，其中绿原酸含量较低，高含量的绿原酸产品上市量很少，且价格昂贵，远远不能满足市场需求［2-3］。研究新的高含量绿原酸提取分离方法，降低提取分离成本是当务之急。
本文主要采取超声波法进行提取，利用超声产生的强烈振动和空化效应，加速植物细胞内物质的释放、扩散并溶解到溶液中，从而达到分离的目的。克服了无水提法难以过滤的制约因素，无醇提法因溶剂使用而带来的成本高、溶剂回收难之弊，而且绿原酸的得率和纯度都有所提高。与常规的溶剂提取法相比，该方法能大幅度地缩短提取时间、溶剂消耗量少，但目前仅限于实验室规模。
1仪器与试剂
KQ-200KDB型高功率数控超波清洗器昆山市超声仪器有限公司
CP225D电子天平Sartoris公司
TU-1907双光速紫外可见分光光度计北京普析通用仪器责任有限公司
绿原酸对照品中国药品生物制品检定所
醋酸乙酯等均为分析纯天津科密欧化学试剂有限公司
金银花原药购于通化市医药大厦，经制药与食品科学系董艳辉老师鉴定，符合2005年版《中国药典》一部项下金银花的质量要求。
2方法与结果
金银花→水溶→醇沉→蒸去乙醇→醋酸乙酯萃取→蒸去醋酸乙酯→配成溶液待用［4］，本文对超声提取过程进行了深入研究，并找到超声提取的最佳条件。
2.1绿原酸的提取过程
精密称取原料金银花10g，加10倍量的水，利用超声波提取器（50HZ）进行提取，克服了无水提取法难过滤的制约因素。确定温度、时间、PH及乙醇用量4个因素，分别取3个水平进行考察。考察因素及水平见表1。按照L9（34）正交试验表设计实验方案表2。
取上述粗粉，采用水提醇沉法进行提取纯化，文献知其最佳醇沉度为60%［5］，醇沉可有效去除绿原酸粗粉中的杂质，蒸去大部分水及乙醇得到绿原酸湿粉，最后经自然干燥得绿原酸干粉。绿原酸回收率=（绿原酸干粉/药材称重量），记录结果。
2.2绿原酸含量测定
2.2.1对照品溶液的制备
精密称取0.5%的绿原酸标品2ml，用50%甲醇定容至50ml，分别用50%甲醇稀释1、2、3、4、5、6倍（10℃下保存），备用。
2.2.2供试品溶液制备
精密称取原料金银花10g，加10倍量的水，利用超声波提取器（50HZ）进行提取，采用水提醇沉法进行提取纯化，蒸去大部分水及乙醇得到绿原酸湿粉，最后经自然干燥得绿原酸干粉溶于水中，加入乙酸乙酯进行萃取，蒸去乙酸乙酯，溶于50%甲醇，用50%甲醇定容至50ml容量瓶中，摇匀，备用［6］。
2.2.3色谱条件
以50%甲醇为空白，用1cm比色杯于327nm波长处测吸光度［7］。以吸光度为纵坐标，对照品溶液浓度为横坐标，绘制绿原酸标准工作曲线，得到回归方程：Y=0.0001X-0.0012，r=0.9995。绿原酸含量在60.0～100.0μg/ml，范围内，浓度与吸光度间呈良好的线性关系，见图2。
表2L9（34）正交实验及结果表
R值顺序为RC＞RB＞RD＞RA。从工业生产考虑，样品4提取条件是工业生产最佳条件。样品4提取条件：温度50℃、提取时间20min、pH为6，乙醇用量为80ml。在4号样品的提取条件下优化工艺，考察提取时间与药物有效成分关系。
2.3工艺细化
图2标准曲线图
3问题与讨论
有文献采用95％乙醇提取绿原酸，提取绿原酸含量较高。《中国药典》2005版采用水煎煮，从经济角度采用水煎煮更能节省资源。
通过对绿原酸提取液的测定结果表明：在提取温度为50℃，pH为6，乙醇用量为80ml的条件下，时间为25min为最佳工艺，提取率最高，实验表明本工艺条件稳定，可行。
参考文献：
［1］尉芹，马希汉.绿原酸及其提取分离方法评述［J］.中成药2001，23（2）：135.
［2］刘军海，裘爱泳.绿原酸及其提取纯化和应用前景［J］.粮食与油脂，2003，（09）：44.
［3］谢碧秀，孙智达.金银花中主要有机酸的研究进展［J］.现代食品科技.2007，09-0093-05.
［4］杨海燕，孙海峰，汪爱国等.醋酸乙酯萃取绿原酸过程研究［J］.时珍国医国药.2006，11：41-42.
［5］王辉，田呈瑞.金银花的提取工艺.食品工业科技［J］.2009，05-0341-05.
［6］AnselmiC，FacinoD.Theantioxidantpropertiesofferulicacidderivativesinmembranemodels[J].JInorgBio-chem.2004.8，98（8）：1457-1464.
［7］国家药典委员会.中国人民共和国药典［S］.北京：化学工业出版社，2005：152.