体外重组Ca_V1.2钙通道CT1蛋白片段制备方法的优化

论文摘要

目的通过改变多种实验条件提高CaV 1.2钙通道C末端GST融合蛋白（GST-CT1）在大肠杆菌BL21中的表达量及分离纯化产量。方法把pGEX-6p-3/CT1质粒转入大肠杆菌BL21中,筛选其中转化成功的菌株培养并用异丙基硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG）在不同细菌浓度,不同诱导时间或不同温度下诱导表达GST-CT1蛋白,Glutathione-Sepharose 4B beads（GS-4B beads）纯化蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测蛋白表达水平。结果当吸光度为0.6～1.0时,GST-CT1在大肠杆菌BL21中的表达量较高,IPTG诱导表达蛋白大于4h后无明显表达量差异,并且当诱导温度为25℃时,蛋白的产量将大大增加。结论可以通过控制细菌数量、控制诱导时长和降低诱导温度的方法来提高GST-CT1蛋白的产量。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 康泽,邵冬雪,彭羽,苏敬阳,封瑞,孙雪菲,郝丽英

关键词: 钙通道,融合蛋白,包涵体,蛋白表达

来源: 解剖科学进展 2019年05期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 中国医科大学药学院药物毒理学教研室

基金: 国家自然科学基金(31471091,21677030)

分类号: Q78;Q51

DOI: 10.16695/j.cnki.1006-2947.2019.05.009

页码: 528-531

总页数: 4

文件大小: 1328K

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