赵文华兰海舰门庆娟吕瑞琪（莒县人民医院检验科山东莒县276500）
【中图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）31-0035-02
【摘要】目的通过阐述腺苷脱氨酶（ADA）检测的方法以及在临床上的实际应用，分析ADA检测在诊断和辅助诊断疾病中所发挥的作用，从而了解ADA活性的高低在肝脏疾病、免疫疾病、血液疾病、肿瘤、神经系统疾病以及浆膜腔积液的鉴别等诊断，为鉴别诊断提供了有用的信息和实验室诊断指标。
【关键词】腺苷脱氨酶检测意义
1ADA生物特性
ADA广泛分布于人体各组织中，以胸腺、脾和其他淋巴组织中含量最高，肝、肺、肾和骨胳肌等处含量较低。血液中ADA主要存在于红细胞、粒细胞和淋巴细胞，其活性约为血清的40～70倍，T淋巴细胞比B淋巴细胞该酶活性更高。人ADA基因位于第20对染色体上，并呈现出遗传多态性现象，其同工酶有3种，分别为ADA1，ADA1＋CP和ADA2。ADA1分子量为35kD，为一种单链蛋白质；ADA1＋CP分子量为280kD，实际上是由2条单键的ADA1分子和1个不具酶活力的200kD结合蛋白结合而成；ADA2分子量为100kD。3种同工酶具有不同的动力学性质。ADA同工酶在各类组织和细胞中的分布不同，ADA1在脾脏、红细胞、淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞中占优势，ADA1+CP在肝脏、肺、胰、肾组织和骨骼中占优势，ADA2只存在于单核细胞，目前在其他组织细胞中尚未检出。是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。ADA是一种与机体细胞免疫活性有重要关系的核酸代谢酶，测定血液、体液中的ADA及其同工酶水平对某些疾病的诊断、鉴别诊断治疗及免疫功能的研究日趋受到临床重视。
2ADA测定在临床上的应用
2.1肝病：ADA是反映肝损伤敏感指标，可作为肝功能常规项目之一，与AIT或GGT等组成肝酶谱。
2.1.1用于判断急性肝损伤及残留病变。
2.1.2协助诊断慢性肝病。
2.1.3有助于肝纤维的诊断。
2.1.4有助于黄疸的鉴别。
2.2阿米巴肝脓肿（ALA）ADA活性明显减少。
2.3重症联合免疫缺陷病（SCID）1972年Giblett等首先报道ADA活性缺乏与SCID有关，这一发现曾引起临床和基础免疫学的很大重视。ADA作为核酸代谢重要的酶类，其缺乏可导致核酸代谢障碍，影响到胸腺的发育，从而引起免疫功能缺陷。综合国内外资料表明，SCID的传递者细胞内ADA活性显著低于正常对照，SCID患者该酶活性更低，甚至不及正常人的10%，患儿羊水细胞内ADA活性可能低至正常胎儿的1%以下。因此，胎儿羊水中纤维细胞ADA活性能有效地对SCID婴儿进行产前诊断。
2.4血液病Valentine等报道慢性溶血患者红细胞ADA活性显著升高，为正常人的45～70倍。由于腺苷的过度消耗，使ATP生成减少，导致红细胞提前破坏，而出现贫血症状。先天性再生障碍性贫血患者红细胞ADA明显高于正常对照，其酶活性高于溶贫及获得性再障。因此，红细胞内ADA活性可能成为诊断先天性再障的唯一指标。
2.5肿瘤肿瘤患者血清及组织中ADA活性均升高，但前者阳性率仅为15%～40%。肺癌和结肠癌组织中ADA活性均明显高于正常肺和结肠组织。
2.6脑膜炎的鉴别诊断[2]1973年Piras首先提出结核性脑膜炎患者CSF-ADA明显升高，并用于结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎及病毒性脑膜炎的鉴别。C00vadia和Ribera等报道结脑患者CSF-ADA增高的阳性率为73%～99.4%。曾迎春等报告64例结脑CSF-ADA值分别为(18.24±0.2)U/L，病毒性脑炎(1.50±0.21)U/L,化脓性脑炎(1.60±0.25)U/L,对照组(1.30±0.28）U/L,可见结核性脑膜炎CSF-ADA水平显著高于其他非结核性脑膜炎组。罗蔚锋等发现结脑患者CSF-ADA活性显著高于正常对照和病脑组。以8U/L为阳性界限值，病脑组和对照组均100%阴性，结脑组阳性率91%，特异性为100%，其含量变化与结脑患者抗痨治疗及病程发展有一定关系。因此，CSF-ADA测定可作为早期结脑诊断、观察病情和疗效的常规检查项目。
Mishra等报道结核性脑膜炎组CSF-ADA活性明显高于细菌性脑膜炎组、脑炎组和对照组，以ADA活性＞5U/L为临界值，其对结核性脑膜炎的诊断灵敏度和特异分别为89%和92%。结核性脑膜炎CSF-ADA水平与CSF细胞数、淋巴细胞百分数、蛋白浓度显著相关。认为CSF-ADA活性可作为儿童结核性脑膜炎早期鉴别的简便快速和有用的诊断指标。
2.7浆膜腔积液的鉴别诊断鉴别结核性和非结核性胸腹腔积液是临床病因诊断的一个常见难题，1978年Piras等报告结核性胸水中ADA活性明显高于其他原因所致的胸水，提出胸水ADA活性可用于结核性和癌性胸膜炎的鉴别诊断。费晓峰等对72例不同胸水ADA活性测定，以40U/L为界，结核性均超过此值，恶性者97.9%低于此值，小于35U/L者占93.2%，故作者认为胸水ADA大于40U/L提示结核性，小于35U/L提示恶性或非结核性。
3ADA测试方法演变
近十几年来，随着对ADA的深入研究，检测方法也不断发展。目前已发展了四代。
第一代ADA测试将腺苷(Adenosine）脱氨产生次黄苷(Inosine）和氨(NH3)。一个ADA活性单位在测试特定条件下每分钟脱氨1μMole腺苷成为次黄苷。通过动态测量腺苷265nM处吸光度下降的速度，可以测算ADA的活性大小。Kaplan法(1955）由此建立。由于高底物浓度造成吸光度过高，该法仅适用于腺苷浓度低于40μM。如此低的底物浓度达不到底物饱和要求，造成ADA活性检测失真。因此，该法不适用于临床应用。
第二代ADA测试原理为腺苷脱氨酶催化腺嘌呤核苷水解，产生次黄嘌呤核苷和氨。然后用Berthelot显色反应(1859)测定反应过程中产生氨的量，从而计算血清ADA活性单位。所需试剂易配制，仪器简单，但灵敏度低，易受外源性NH3影响，空白过高，不能直接测定红细胞ADA活性。
同样原因，ADA偶联谷氨酸脱氢酶(GLDH)反应:
通过测量340nM处NADPH吸光度下降的速度来测算ADA活性。该法也因血清含氨干扰，以及测试系统中过高NADPH造成非特异性氧化而无成算。
第三代ADA测试：Kalckar氏应用ADA偶联嘌呤核苷磷酸化酶(PNP）和黄嘌呤氧化酶(XOD)反应连续监测法。通过测量293nM处尿酸盐吸光度上升的速度来测算ADA活性。但是，293nM时血清吸光度太高，造成临床应用不便。
第四代ADA测试:检测方法XOD-PAP法（第四代改良法）通过ADA偶联PNP，XOD，过氧化氢酶和醛脱氢酶，借助过氧化氢反应测量334nM处NADPH吸光度上升的速率来测算ADA活性。该法克服了以往ADA测试的困难，然而，鉴于试剂成本高，阻碍实际临床使用。
最新对第四代测试方法的改进为偶联PNP，XOD和过氧化物酶(POD)反应。ADA酶解腺苷脱氨产生次黄苷;再通过PNP的作用，生成次黄嘌呤;后者在XOD氧化下生成尿酸和过氧化氢;最后在POD的作用下H2O2再与N-Ethyl-N-3-Methylaniline、4-氨基安替比林反应，生成紫红色的有色醌。通过动态测量有色醌550nM处吸光度上升的速度来测算ADA的活性。
参考文献
[1]蔡卫民,陈峰.近年来肝纤维化主要进展(上).临床肝胆病杂志,1998,14:65～68.
[2]曾迎春,王立军.64例脑膜炎患者CSF-ADA测试结果临床应用分析.现代医院,2009,5:77～78.