棉花GbCML24基因的克隆及其功能分析

棉花GbCML24基因的克隆及其功能分析

论文摘要

钙调蛋白类似蛋白(CML)是一类Ca2+感受蛋白,在植物生长发育和极性细胞起始伸长过程中发挥重要的作用。为了研究CML在棉花纤维发育过程中的功能,本研究从海岛棉7124中克隆到1个拟南芥ATCML24的同源基因,命名为GbCML24,并对其分子特征以及功能进行初步分析。结果表明,该基因序列包含1个465 bp的开放阅读框,编码1个由155个氨基酸残基组成的蛋白,生物信息学分析表明,GbCML24具有4个CML家族保守的EF-hand钙结合结构域。亚细胞定位主要位于细胞膜和细胞核,细胞质中也微弱可见。组织表达分析发现该基因在棉花的根、茎、叶、子叶、纤维中均有表达,在根中的表达量最高,在纤维中主要表达在纤维起始期(0 DPA)和第2次纤维快速伸长期(15 DPA)。启动子特异性分析表明转基因拟南芥的叶片、根和花器官中均检测到GUS活性,其中,莲座叶表皮毛中的GUS活性比较强。分析其ATG上游1 500 bp启动子序列顺式作用元件发现,在ATG附近500 bp处分布有大量和纤维发育有关的激素响应元件。荧光显微分析发现Ca2+主要在纤维细胞中积累,胚珠培养发现低浓度的Ca2+可以促进纤维伸长,而高浓度的Ca2+可以抑制纤维伸长,且随着外源Ca2+的不同处理,纤维中GbCML24的表达量也发生变化,趋势与纤维长度相似。本研究克隆到1个棉花CML基因,在纤维发育的关键时期表达量升高,能感知Ca2+的变化并随纤维伸长而变化,推测其与纤维发育有关,为后续纤维发育的机制研究提供了科学依据。

论文目录

  • 1 结果与分析
  •   1.1 棉花GbCML24基因克隆与载体构建
  •   1.2 GbCML24基因的进化分析
  •   1.3 GbCML24基因的组织表达模式分析
  •   1.4 GbCML24启动子分析
  •   1.5 GbCML24亚细胞定位
  •   1.6 纤维长度和GbCML24基因的表达受Ca2+浓度变化影响
  • 2 讨论
  • 3 材料与方法
  •   3.1 实验材料
  •   3.2 植物种植及取样
  •   3.3 棉花GbCML24的克隆及表达模式分析
  •   3.4 多序列比对及进化分析
  •   3.5 棉花GbCML24基因启动子分析
  •   3.6 棉花GbCML24基因亚细胞定位
  •   3.7 胚珠体外培养及纤维观察
  • 作者贡献
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 王艳鸽,孙全,李祖亮

    关键词: 棉花,纤维发育,钙调蛋白类似蛋白,基因功能

    来源: 分子植物育种 2019年15期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,农作物

    单位: 河南大学棉花生物学国家重点实验室植物逆境生物学重点实验室,重庆邮电大学生物信息学院

    基金: 河南大学博士研究生科研创新专项(Y1426003)资助

    分类号: S562;Q943.2

    DOI: 10.13271/j.mpb.017.004873

    页码: 4873-4882

    总页数: 10

    文件大小: 3288K

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