固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱的制备及在蛋白质等电点分析中的应用

固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱的制备及在蛋白质等电点分析中的应用

论文摘要

通过聚合物原位聚合反应,制备了部分填充的毛细管整体柱。pH 3~10的载体两性电解质被固化在该毛细管整体柱上。在引入八通进样阀、三通阀和四通连接单元的基础上,构建了适用于固化pH梯度毛细管等电聚焦整体柱(M-IPG)的平台。在蛋白质药物测定过程中,用M-IPG柱和羟丙基纤维素(HPC)涂层毛细管柱同时对曲托珠单抗和依那西谱的等电点进行了测定。结果表明,两种等电聚焦柱都能够同时分离混合蛋白质样品并测定蛋白质类药物中单抗和融合蛋白质的等电点(pI), M-IPG柱所测的pI值与HPC涂层毛细管柱测定的结果基本一致,表明了该柱在进一步构建多维分离平台进行蛋白质组学研究方面的潜力。

论文目录

  • 1 实验部分
  •   1.1 仪器与试剂
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 样品溶液的配置
  •     1.2.2 M-IPG柱的制备
  •     1.2.3 HPC涂层毛细管柱的制备
  •     1.2.4 M-IPG柱法
  •     1.2.5 HPC涂层毛细管等电聚焦柱法
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 HPC涂层毛细管柱
  •     2.1.1 HPC涂层毛细管柱的系统适用性及其线性关系
  •     2.1.2 HPC涂层毛细管柱的重复性
  •     2.1.3 HPC涂层毛细管柱对曲托珠单抗和依那西谱的等电聚焦分离
  •     2.1.4 HPC涂层毛细管柱对曲托珠单抗和依那西谱pI的测定
  •   2.2 M-IPG柱
  •     2.2.1 M-IPG柱的表征
  •     2.2.2 M-IPG柱的pH范围和线性关系
  •     2.2.3 M-IPG柱的重复性、耐受性及使用次数
  •     2.2.4 M-IPG柱对曲托珠单抗和依那西谱的等电聚焦分离
  •     2.2.5 M-IPG柱对曲托珠单抗和依那西谱的pI的测定
  •     2.2.6 M-IPG柱的分辨率
  •   2.3 HPC涂层毛细管等电聚焦和M-IPG方法的比较
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘让东,许歆瑶,王薇薇,王彦,闫超

    关键词: 毛细管等电点聚焦,固化梯度,等电点,在线平台,蛋白质分离

    来源: 色谱 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,农业科技

    专业: 化学,有机化工,植物保护

    单位: 上海交通大学药学院

    基金: 国家自然科学基金项目(21874088,81874307),上海市科委“科技创新行动计划”(16142200300,17142201000,18142200700),上海市标准化推进专项(17DZ2201500)~~

    分类号: O652;TQ450.7

    页码: 1090-1097

    总页数: 8

    文件大小: 1146K

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