猪细小病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

猪细小病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

论文摘要

为制备针对猪细小病毒(PPV)NS1蛋白的单克隆抗体,本研究以原核表达的NS1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,经间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,获得了3株能稳定分泌抗PPV NS1蛋白的杂交瘤细胞株,间接ELISA检测3株单克隆抗体腹水的抗体效价分别达到1∶2.048×106、1∶4.096×106和1∶2.048×106,染色体数分别为105、104和106,均能与PPV NS1重组蛋白及PRV毒株感染的PK-15细胞发生特异性反应,而与6种常见病毒不发生交叉反应。表明制备的3株NS1蛋白单克隆抗体效价高、特异性强,为NS1蛋白抗原表位分析、结构与功能研究,以及PPV免疫学诊断试剂的开发奠定了基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 毒株、细胞、试验动物
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 NS1重组蛋白
  •   1.4 动物免疫
  •   1.5 间接ELISA方法的建立
  •   1.6 细胞的融合与培养
  •   1.7 阳性杂交瘤细胞株的筛选与亚克隆
  •   1.8 腹水制备
  •   1.9 单克隆抗体的鉴定
  •     1.9.1 效价的测定
  •     1.9.2 染色体数目的测定
  •     1.9.3 亚型鉴定
  •     1.9.4 Western-blot检测
  •     1.9.5 间接免疫荧光试验
  •     1.9.6 特异性试验
  • 2 结果与分析
  •   2.1 筛选方法的建立与单克隆抗体的鉴定结果
  •   2.2 染色体数目测定结果
  •   2.3 Western-blot检测结果
  •   2.4 间接免疫荧光试验结果
  •   2.5 特异性试验结果
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 粟元文,王怀禹,魏玲

    关键词: 猪细小病毒,蛋白,单克隆抗体,制备,鉴定

    来源: 家畜生态学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 南充职业技术学院

    基金: 南充市研发资金项目(16YFZJ0146)

    分类号: S852.4

    页码: 65-68

    总页数: 4

    文件大小: 209K

    下载量: 169

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