导读:本文包含了重组奶牛干扰素论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:奶牛,γ-干扰素,克隆,原核表达
重组奶牛干扰素论文文献综述
范锋,徐正中,倪谷音,毛爱民,杨卫冲[1]（2014）在《重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定》一文中研究指出根据黑白花奶牛γ-干扰素(BovIFN-γ)基因的序列,通过RT-PCR扩增出BovIFN-γcDNA,并将其定向插入原核表达质粒pET-30a(+)和pGEX-6P-1,经DNA测序后,分别转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,分别表达出大小在23和43 ku左右的融合蛋白。通过对诱导剂的浓度、诱导起始时间、诱导持续时间的筛选,对表达条件进行了优化,BL21(DE3)/pET-30a(+)-BovIFN-γ与BL21/pGEX-6P-1-BovIFN-γ的融合蛋白的相对表达量最高时可分别达到菌体总蛋白的60%和45%左右。使用纯化的融合蛋白rHis-BovIFN-γ和rGST-BovIFN-γ进行细胞病变抑制试验,证实表达产物具有较高抗病毒感染活性,在牛肾细胞(MDBK)上抑制水疱性口炎病毒的活性分别为2.15×107和1.21×105U·mg-1。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2014年03期）
周学章,宋振威,王玉炯[2]（2008）在《重组奶牛干扰素-α基因的原核表达》一文中研究指出从健康奶牛的血液中分离白细胞,用刺激物诱导白细胞产生干扰素,采用RT-PCR扩增干扰素-α基因,构建原核表达载体pQE30-IFNα,用IPTG诱导表达。得到重组的奶牛成熟干扰素-α基因全长498bp,构建的原核表达载体诱导6h后表达量较高,表达产物的分子量约为20kD,从而获得了表达奶牛干扰素-α的基因工程菌株。(本文来源于《中国奶牛》期刊2008年07期）
李学仁[3]（2005）在《重组奶牛α、γ干扰素的研制及其抗病毒作用》一文中研究指出目前有多种疾病严重威胁着牛的健康,影响了我国养牛业的发展和牛肉和奶制品的对外贸易。因此,急需研制出安全、高效、新型的抗病毒和免疫增强剂用于增强牛的抵抗力。干扰素(Interferon,IFN)是动物机体感染病毒或接种疫苗后产生的一类具有抗病毒和免疫调节功能的蛋白质,是动物抵御病毒入侵的第一道防线。根据干扰素的氨基酸序列、抗原性和细胞来源的不同可将其分为2个型:Ⅰ型干扰素的主要成员为α干扰素和β干扰素,Ⅱ型干扰素为γ干扰素。Ⅰ型干扰素具有较强的抗病毒功能,Ⅱ型干扰素抗病毒功能稍弱,但免疫调节功能较强。人类重组干扰素用于治疗病毒感染和肿瘤疾病已有几十年的成功历史。近年来,牛干扰素(Bovine interferon,BoIFN)的抗病毒和疫苗佐剂功能也在更多的试验中被发现和证实。本研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组牛α、γ干扰素并研究其抗病毒作用,为我国重组牛干扰素的工程化生产及其在养牛业中的应用奠定基础。研究主要从以下几个方面展开: 1.应用RT-PCR方法从经刀豆素(ConA)刺激诱导的奶牛外周血淋巴细胞总RNA中克隆到牛γ干扰素成熟蛋白基因,与Genebank上登录的γ干扰素基因(NM_174086)同源性为100%。然后将特异性片段连在PBV载体上进行表达,经SDS-PAGE分析,原核表达产物为16KDa的重组蛋白,占菌体总蛋白的32%,表达产物以包涵体形式存在。经7mol/L盐酸胍的变性液溶解及0.5mol/L盐酸胍复性液处理,表达产物进行脱盐、凝胶层析纯化,细胞病变抑制法结果表明,重组牛IFN-γ具有较高的干扰素活性,约为6.0×10~5U/mg。 2.提取经新城疫病毒诱导培养的奶牛外周血淋巴细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增出奶牛α干扰素成熟蛋白基因,然后将特异性片段连接到pMD18-T载体,测序结果表明,扩增片段为牛α干扰素成熟蛋白序列,与Genebank上发表的α1干扰素序列同源性为98%。然后将特异性片段连接到含分泌信号肽序列的pichia pastoris表达载体pPICZαA上,将重组质粒经Sac Ⅰ酶切线性化后电转化导入毕赤酵母菌株X-33。转化子经PCR分析鉴定后利用甘油增菌和甲醇诱导,实现了BoIFN-α在毕赤酵母系统中的分泌表达。SDS-PAGE结果显示表达产物分子量约为23kDa,比其推导结果(20kDa)略大,推测可能是因为表达产物发生了一定程度的糖基化。细胞病变抑制(本文来源于《南京农业大学》期刊2005-06-01）
重组奶牛干扰素论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
从健康奶牛的血液中分离白细胞,用刺激物诱导白细胞产生干扰素,采用RT-PCR扩增干扰素-α基因,构建原核表达载体pQE30-IFNα,用IPTG诱导表达。得到重组的奶牛成熟干扰素-α基因全长498bp,构建的原核表达载体诱导6h后表达量较高,表达产物的分子量约为20kD,从而获得了表达奶牛干扰素-α的基因工程菌株。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组奶牛干扰素论文参考文献
[1].范锋,徐正中,倪谷音,毛爱民,杨卫冲.重组黑白花奶牛γ-干扰素在大肠杆菌中的原核表达与鉴定[J].畜牧与兽医.2014
[2].周学章,宋振威,王玉炯.重组奶牛干扰素-α基因的原核表达[J].中国奶牛.2008
[3].李学仁.重组奶牛α、γ干扰素的研制及其抗病毒作用[D].南京农业大学.2005