导读:本文包含了电重构论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:心房,重构,迷走神经,糖原,激酶,心肌梗死,心力衰竭。
电重构论文文献综述
祁伶姗,邢晓春[1]（2019）在《血管紧张素-(1-7)与电重构中心房钠尿肽关系的探讨》一文中研究指出目的观察血管紧张素-(1-7)及其信号转导途径拮抗剂对心房电重构时心房钠尿肽(ANP)水平的影响,为房颤(AF)机制的探讨提供进一步的理论基础和资料。方法以普通杂种犬56只建立心房快速起搏(600次/分)模型,分为S组(空白对照组)、C组(起搏对照组)、A组[Ang-(1-7)组]、N组[Ang-(1-7)+A-779组]、P组[Ang-(1-7)+API-2组]、W组[Ang-(1-7)+Wort组]、L组[Ang-(1-7)+L-NAME组],每组8只。各组药物于起搏开始前5 min静脉点滴至起搏结束。右房上部起搏2 h后,留取左房心肌标本,采用ELISA法测定心肌组织中的ANP含量。结果左房组织ANP水平,A组高于S组及C组,其余各组间ANP水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论在急性心房快速起搏犬模型中,Mas受体特异性拮抗剂可以使Ang-(1-7)刺激ANP增加的作用消失,提示Ang-(1-7)刺激ANP增加可能是通过Mas受体发挥作用。(本文来源于《继续医学教育》期刊2019年06期）
王运,刘铁成,刘恩照,刘洪梅,李健[2]（2019）在《急性心房扩张对心房电重构及相关因子的影响》一文中研究指出目的探讨急性心房扩张后心房电生理特性、N末端心房钠尿肽(NT-proANP)及NO的变化。方法 32只长耳白兔随机分为A、B、C和D组,依次代表心房内静水压为0、8、12和20cm H_2O(1cm H_2O=0.098kPa),每组8只。比较各组电生理参数,记录快速心房刺激诱发心房颤动(房颤)情况,检测心房组织局部NT-proANP及NO水平。结果 4组心房有效不应期(AERP)、左AERP(LAERP)、右AERP(RAERP)、LAERP离散度(dLAERP)及房间传导时间(IACT)比较,有统计学差异(P <0.05,P <0.01)。与A组比较,B、C和D组AERP、LAERP及RAERP水平明显缩短,C、D组IACT明显延长(P<0.05);D组dLAERP明显高于A、B组(P<0.05)。A、B、C、D组房颤诱发率和阵发性房颤诱发率呈明显增长趋势,有统计学差异(P<0.05)。B、C、D组持续性房颤的诱发率明显高于A组(P<0.05),C、D组持续性房颤诱发率明显高于B组(P<0.05)。B组NT-proANP水平最高,且明显高于A、D组[(3507.48±377.54)ng/L vs (3028.41±238.43)ng/L和(2883.95±353.11)ng/L,P<0.05)]。C、D组NO水平较A、B组明显降低(P<0.05)。结论急性心房扩张程度的增加,可导致房颤诱发率增加,心房组织局部NO水平减少,NT-proANP水平呈先增加后降低的现象。(本文来源于《中华老年心脑血管病杂志》期刊2019年06期）
李烽,朱永翔,张叶,潘子磊,张瑶俊[3]（2019）在《微小RNA在心肌电重构中研究进展》一文中研究指出心肌细胞离子通道协调活动是心肌细胞正常电活动的基础。心肌电重构即心肌细胞离子通道的改变,能引起心肌细胞跨膜离子流紊乱及有效不应期(effective refractory period,ERP)和动作电位时程(action potential duration,APD)的异常,从而导致心肌细胞兴奋性、传导性和自律性改变,促进心律失常的发生及发展[1]。因此,抑制心肌电重构是预防及治疗心律失常的重要措施。微小RNAs(microRNAs,(本文来源于《临床军医杂志》期刊2019年05期）
常成[4]（2019）在《GSK-3β抑制剂增加内向整流钾通道Kir2.1的表达改善心肌梗死大鼠的电重构》一文中研究指出研究背景及目的心肌重构是慢性心力衰竭发生发展的主要病理生理过程,是许多严重心血管疾病发展为心力衰竭的最后共同通路。尽管目前治疗心血管疾病的药物和手段有多种,死亡率有所下降,但心源性猝死的比重却持续增加。心肌重构包括结构重构和电重构,其中心肌电重构引起的离子通道电流异常是诱发恶性心律失常及心源性猝死的主要原因。阐明心肌电重构的细胞与分子机制,对于发现电重构的潜在治疗靶标,以及控制恶性室性心律失常的发生意义重大。糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它参与心肌重构的多个方面,GSK-3β是重要的心肌肥厚负性调节信号分子,对心肌细胞凋亡有重要的调节作用,而且在血管组织中能促进血管增生,由于它具有一定的促凋亡能力,因而也可以作为提高缺血后心肌存活率的治疗靶点。近年发现,GSK-3β对多种离子通道有作用,但是这些文献主要集中于GSK-3β对神经细胞离子通道的作用,而其对心肌细胞中离子通道的影响未见有报道,并且它在心肌电重构有着怎样的作用也未见阐明。本课题拟建立大鼠心肌梗死(myocardial infarction,MI)模型和大鼠心肌细胞系H9C2缺氧模型,观察GSK-3β抑制剂SB216763对心肌梗死大鼠心肌组织、心脏功能和QT间期的影响,筛选GSK-3β参与调节的离子通道,并进一步通过大鼠H9C2心肌细胞缺氧模型对筛选通道进行验证。为解释心肌损伤后心肌电重构的分子机制以及心律失常的防治提供新思路和新靶点。研究方法1.大鼠心肌梗死模型的建立:采用冠状动脉左前降支(LAD)结扎术建立急性心肌梗死模型,手术全程心电监护,手术后II导联有ST段明显的抬高,则模型建立成功。2.分组和给药:雄性8周龄SD大鼠平均分为3组(2天组每组各10只,7天组每组各11只):假手术组(Sham),手术组(MI),给药组(MI+SB)(术前1小时,GSK-3β抑制剂SB216763,尾静脉注射给药,0.6 mg·kg~(-1)·d~(-1),在2天组中,每24h后给一次药,2天后处死;在7天组中,每24h后给一次药,连续给药7天后处死);Sham组只手术不结扎,MI+SB组同MI组处置方法。3.观察SB216763对大鼠心肌梗死的影响:采用H&E染色、Masson染色、心电图、超声心动图、血清心肌酶的方法检测SB216763对大鼠心脏组织形态、纤维化、心功能以及QT间期的影响,并采用qPCR方法对影响QT间期的离子通道进行筛选,进一步采用qPCR和Western blot的方法对筛选出来的离子通道在mRNA和蛋白水平上进行验证。4.观察SB216763对缺氧H9C2细胞活性和钾离子通道表达的影响:使用Research Science AW400TG细胞工作站建立细胞缺氧模型。分组和给药:H9C2分为7组:NC(正常)、缺氧组(6h、12h、24h)、SB216763预处理组(SB/6h、SB/12h、SB/24h)。预处理组均采用10μM GSK-3β抑制剂SB216763预处理1h后再进行缺氧的方法处理,根据所筛选出的12h时间点检测SB216763对Kir2.1的蛋白表达水平的影响。结果1.GSK-3β抑制剂SB216763对大鼠心肌梗死后心肌组织形态和纤维化的保护作用HE染色结果显示,MI组细胞有空泡化和炎性浸润发生,7天的程度较2天更加明显,所对应的同期的MI+SB组均可以降低细胞损伤的恶性程度。术后Masson染色结果可见,术后组2天和7天MI组胶原纤维增生,比Sham组的纤维化程度明显加重,(P<0.001,P<0.01),所对应的MI+SB组较MI组皆有所减轻(P<0.01,P<0.05)。2.GSK-3β抑制剂SB216763减轻大鼠心肌梗死后心功能的损伤与Sham组相比,MI组在心梗后2天心脏功能受到损害,LVEF和LVFS显着降低(LVEF:P<0.01,LVFS:P<0.01),同MI组相比,MI+SB组改善了LVEF和LVFS的不良后果(LVEF:P<0.05,LVFS:P<0.01)。与Sham组相比,MI组在心梗后7天心脏功能受到损害(LVEF:P<0.001,LVFS:P<0.01),同MI组相比,MI+SB组改善了LVEF和LVFS的不良后果(LVEF:P<0.05,LVFS:P<0.05)。3.GSK-3β抑制剂SB216763减少大鼠心肌梗死后血清LDH、cTn-I的水平术后2天的动物血清中,MI组的心肌酶LDH显着升高,cTn-I无显着升高(LDH:P<0.001,cTn-I:P>0.05),同MI组相比,MI+SB组LDH显着降低,cTn-I无显着降低(LDH:P<0.001,cTn-I:P>0.05)。术后7天的动物血清中,同Sham组相比,MI组心肌酶LDH、cTn-I显着升高(LDH:P<0.001,cTn-I:P<0.001),而MI+SB组LDH、cTn-I比MI组显着降低(LDH:P<0.001,cTn-I:P<0.001)。4.GSK-3β抑制剂SB216763缩短大鼠心肌梗死后心电图的QT间期心电图仪Ⅱ导联测量叁组大鼠手术前、手术后和处死前叁个时间点的心电图,并计算心率(heart rate,HR)、QT间期和QTc。术前各组之间HR、QT、QTc并未明显差异,术后MI组出现异常波形,ST端抬高,表明心肌梗死手术模型造模成功;术后2天和7天的结果均显示,MI组和Sham组相比,HR加快,QT、QTc均明显延长,MI+SB组和MI组相比,HR减慢,QT和QTc均缩短。5.GSK-3β抑制剂SB216763对心肌梗死大鼠Kir2.1 mRNA(KCNJ2)和蛋白表达水平的降低具有上调作用在大鼠心肌梗死后2天和7天检测各组动物心肌组织缺血区SCN 5A(Nav1.5)、KCND2(Kv4.2)、CACNA1C(Cav1.2)、KCNQ1(K_V7.1)、hERG(K_V11.1)、KCNJ2(Kir2.1)的mRNA表达水平。结果显示,心肌梗死后,SCN 5A(Nav1.5)、KCND2(Kv4.2)、KCNQ1(K_V7.1)、hERG(K_V11.1)、KCNJ2(Kir2.1)mRNA表达水平下降,采用B216763预处理后,MI大鼠心肌组织中KCNJ2的表达上调,其余离子通道的mRNA水平无显着变化(P<0.05)。Western blot结果显示,同Sham组相比,MI组Kir2.1蛋白表达水平显着降低(P<0.01),MI+SB组同MI组相比,Kir2.1表达升高(P<0.05)。6.10μM SB216763对H9C2细胞活性的影响用10μM浓度的GSK-3β抑制剂SB216763作用于H9C2细胞培养不同时间后,结果显示,同NC组相比,在此浓度下的SB216763对H9C2细胞培养6h、12h、24h、48h不同时间点的细胞活性没有影响。7.GSK-3β抑制剂SB216763减少缺氧诱导的H9C2细胞后cTn-I的释放量细胞分组处理后,收集细胞上清进行cTn-I检测,同NC相比,缺氧6h、12h、24h的H9C2细胞cTn-I释放显着增加,分别为(P<0.01,P<0.01,P<0.001),抑制剂组在12h时能够显着降低cTn-I的释放(P<0.01)。8.GSK-3β抑制剂SB216763能减弱缺氧H9C2细胞Kir2.1蛋白的降低同NC组相比,在缺氧12h之后,Kir2.1蛋白表达水平显着下调(P<0.01),SB216763预处理之后,Kir2.1蛋白表达上调(P<0.05);结论1.GSK-3β抑制剂SB216763能缓解大鼠心肌梗死后心功能损伤;2.GSK-3β抑制剂SB216763能上调大鼠心肌梗死后钾离子通道KCNJ2/Kir2.1的mRNA和蛋白水平的表达;3.在H9C2细胞水平,GSK-3β抑制剂SB216763对缺氧12h诱导的钾离子通道Kir2.1的表达降低具有上调作用。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）
邵梦娇,张玲,商鲁翔,石佳,冯敏[5]（2019）在《β1肾上腺素能受体自身抗体表达增强对心房颤动及心房电重构的影响》一文中研究指出目的探讨β1肾上腺素能受体自身抗体(β1AR)表达增强对心房颤动(简称房颤)及心房电重构的影响。方法 24只新西兰大白兔随机分为对照组(Con组)和β1AR组。β1AR组给予2 mgβ1受体细胞外第二环功能表位肽段与佐剂背部皮下多点注射,对照组给予佐剂背部皮下多点注射。每2周注射1次,共4次。于0、2、4、6 W采耳缘静脉血,离心取血清通过酶联免疫吸附测定血清中抗体滴度,验证造模是否成功。每只兔子在免疫前后,采用S_1S_2递减刺激测量心房有效不应期(AERP),通过Burst刺激测量房颤诱发率和持续时间。免疫结束后取心房肌组织进行蛋白免疫印记法检测各组内离子通道蛋白(Kir3.1及Cav1.2)和缝隙连接蛋白(Cx43和Cx40)总量的表达变化,逆转录聚合酶链反应分析上述指标各组内mRNA的表达变化。结果①与0 w比较,β1AR组在2、4和6 w血清中β1AR水平逐渐增加(P<0.05),而Con组内各个时间点血清中β1AR水平无差异(P>0.05);与Con组相比,除0 w两组比较无差异外,其余β1AR组血清中β1AR水平高于Con组(P<0.05)。②β1AR组免疫后较免疫前AERP缩短[(65±8.5)ms vs (116±23.4)ms,P<0.05],平均心率显着增快[(290±35.3)次/分vs (187±31.1)次/分,P<0.05];与Con组相应时间比较,β1AR组免疫后均出现AERP缩短[(65±8.5) ms vs (116±25.3)ms,P<0.05]和平均心率增快[(290±35.3)次/分vs (198±13.7)次/分,P<0.05]。③β1AR组免疫后较免疫前房颤诱发率增加[83.3%(10/12) vs 0(0/12),P<0.05]及持续时间延长[(24.66±40.92)s vs (0±0)s,P<0.05];与Con组相应时间比较,β1AR组房颤诱发率显着增加[83.3%(10/12) vs 0(0/12),P<0.05]及持续时间延长[(24.66±40.92)s vs (0±0)s,P<0.05];④与Con组相比,β1AR组Cx43和Cav1.2蛋白水平及mRNA水平显着降低(P<0.05)。Kir3.1及Cx40蛋白水平及mRNA含量显着升高(P<0.05)。结论β1AR表达增强能缩短AERP,增加房颤易感性和持续时间,通过改变离子通道特性造成心房肌电重构,促进房颤的发生和维持。(本文来源于《中国心脏起搏与心电生理杂志》期刊2019年02期）
阿曼姑丽·亚森[6]（2019）在《低强度迷走神经刺激调控慢性心力衰竭犬电重构及结构重构机制的研究》一文中研究指出目的Beagle犬给予起搏器起搏制作心力衰竭模型,造模后给予低频迷走神经刺激8周,解释低强度迷走神经刺激改善心室电重构和结构重构相关机制。方法18只Beagle犬分成叁组(假手术组6只、心衰组只、VNS组6只),叁组Beagle犬均植入起搏器,心衰组和VNS组给予起搏器起搏制作慢性心力衰竭模型,VNS犬组给予低强度迷走神经刺激,用二维超声检测心脏射血分数和左室舒张末期直径、用酶联免疫法和免疫荧光法检测方法检测血清中nt-proBNP、CRP和TNF-α、用电生理方法检测心率、ERP,最后取心肌组织做Masson染色观察心肌组织形态学改变。心衰模型建立后和低强度迷走神经刺激8周后,叁组犬心脏超声、血清学指标、电生理指标数据统计学分析,结合心肌组织病理改变得出结论。结果叁组Beagle犬均植入起搏器,心衰组和VNS组给予起搏器起搏制作慢性心力衰竭模型,与造模前相比,心衰组:Nt-proBNP(P<0.05)、射血分数(P<0.05);VNS组:Nt-proBNP(P<0.05)、射血分数(P<0.05),心衰组和VNS组成功建立慢性心力衰竭模型(基线水平)。心力衰竭模型建立后心衰组未给予特殊干预,VNS组给予低强度迷走神经刺激治疗8周,叁组犬基线水平与8周后比较,假手术组:射血分数(P=0.054)、左室舒张末直径(P=0.293)、Nt-proBNP(P=0.650)、CRP(p=0.507)、TNF-α(p=0.571)、心率(P=0.076)、ERP(p=0.372),心肌组织Masson染色提示心肌细胞形态整齐,排列有序,炎症细胞浸润较少;心衰组:射血分数(P<0.05)、左室舒张末直径(P<0.05)、Nt-proBNP(P<0.05)、CRP(p=0.368)、TNF-α(p=0.745)、心率(P<0.05)、ERP(p=0.430),心肌组织Masson染色提示心肌细胞形态不规则,伴有胶原纤维和炎症细胞浸润;VNS组:射血分数(P<0.05)、左室舒张末直径(P=0.518)、Nt-proBNP(P<0.05)、CRP(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)、心率(P<0.05)、ERP(P<0.05),心肌组织Masson染色提示心肌细胞形态较规则,伴有少量胶原纤维。结论:低强度迷走神经刺激显着提高心力衰竭犬心脏射血分数,抑制心肌重塑,抑制心肌细胞变形和纤维化,降低nt-proBNP和炎症因子,减慢心率和延长有效不应期。低强度迷走神经刺激能够拮抗交感神经过度激活,增强迷走神经活性,改善心力衰竭电重构和结构重构。(本文来源于《新疆医科大学》期刊2019-03-01）
周天一,金艳,韩志君[7]（2018）在《microRNA在心房颤动电重构及治疗中的进展》一文中研究指出心房颤动(房颤,AF),是临床上最常见的心律失常之一,房颤具有极高的卒中、心力衰竭风险,也是认知障碍、痴呆的独立危险因素。房颤主要由心房重构,自主神经系统改变,炎症因子和氧化应激,肾素-血管紧张素-醛固酮系统异常等引起~([1])。而心房重构在房颤中起到至关重要的作用。miRNA是一类大约22个核苷酸的内源性非编码小分子RNA,通过与靶mRNA结合,参与mRNA降解或转录后翻译抑制,调控靶基因的表达。近年来大量研究表明,miRNA(本文来源于《中国循证心血管医学杂志》期刊2018年10期）
李凤德,赵玲,尚艳菲,夏岳[8]（2018）在《心脉隆注射液对家兔快速心房起搏心房电重构的影响》一文中研究指出目的观察心脉隆注射液对家兔快速心房起搏心房电重构的干预效果。方法选取健康成年家兔28只,随机分为心脉隆注射液组、生理盐水组,每组14只。心脉隆注射液组以心脉隆注射液5 mg/kg每日08:00、16:00耳缘静脉输注给药5 d。生理盐水组以等容量的生理盐水耳缘静脉输注给药5 d。用BL-420生物机能实验系统分别测量两组家兔心房快速起搏前的心房有效不应期(AERP),然后以600次/min的频率对两组家兔分别进行快速心房起搏,测定起搏6 h后的AERP。结果生理盐水组快速起搏6 h后AERP200和AERP150较起搏前缩短,与基础状态时比较差异有统计学意义(P <0.05)。心脉隆注射液组快速起搏6 h后AERP200和AERP150较起搏前无明显缩短,与基础状态下比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论心房快速起搏可以使心房发生电重构;心脉隆注射液可以预防快速心室率引起的心房电重构。(本文来源于《中西医结合心脑血管病杂志》期刊2018年17期）
付茜,潘一龙,李斌,李晓东[9]（2018）在《糖尿病源性心房颤动——心房电重构的研究进展》一文中研究指出目前糖尿病在全世界普遍流行,最新数据显示,2015年全世界有4.15亿糖尿病患者,如不加以临床干预,到2040年,糖尿病患病人数将增长55%,达到6.42亿[1]。糖尿病患者发生心血管疾病的风险率及病死率明显高于非糖尿病患者[2]。糖尿病患者常具有较高的冠心病发病率,且动脉粥样硬化病变多在糖尿病早期就已经形成,通常表现多支血管病变并累及冠状动脉血管远端[3]。2型糖尿病(T2DM)(本文来源于《中国实用内科杂志》期刊2018年07期）
李展[10]（2018）在《长链非编码RNA TCONS_00075467在心房颤动兔心房电重构中的功能及其机制研究》一文中研究指出研究背景心房颤动(简称房颤,AF)是临床上最常见的快速性心律失常,发病率居高不下且随年龄增长逐年增高,我国房颤总患病率为0.77%;房颤引起的血流动力学不稳定、血液高凝状态,导致脑卒中等血栓栓塞并发症,造成极高的致残率和致死率,严重危害人类健康。尽管房颤的药物治疗和介入治疗近年来取得了长足的进展,但治疗效果依然不能令医患双方满意,这要追溯于其复杂的发生机制,至今仍未被明了阐释。心房电重构已被证实在房颤的起始和维持中发挥重要作用。电重构伴随房颤早期出现,其基础是参与电活动的离子通道的变化,主要引起心房有效不应期(AERP)及动作电位时程(APD)的缩短,动作电位传导速度减慢,这一心房电生理特性的改变有利于房颤的发生和维持。深入阐释房颤电重构发生的分子机制,对于改善房颤的防治具有重要意义。长链非编码RNAs(long non-coding RNAs,lncRNAs)是一组内源性、长度超过200nt、缺少特异完整的开放阅读框、无或很少有蛋白编码功能的RNAs分子。相比于mRNAs,lncRNAs具备显着的组织表达特异性,在生物体的不同组织或相同组织的不同时期表达存在差异(时空特异性);且lncRNAs以RNA的形式已被证实在表观遗传水平、转录水平及转录后水平等多个层面调节基因的表达。越来越多的研究证实lncRNAs参与到心脏疾病的发生与发展过程中,如肥厚型心肌病、心力衰竭、心肌梗死、室间隔缺损、房颤神经重构等。但lncRNAs与房颤电重构的发生有无联系,在重构的发生中起到怎样的作用,目前仍未被探索。研究目的基于右心房快速起搏(atrialtachypacing,A-TP)构建实验性房颤兔模型,应用二代高通量测序检测房颤及对照兔右心房中lncRNAs的差异表达,并通过一系列生物信息学方法,鉴定与房颤心房电重构相关的lncRNAs。应用敲低实验实现功能沉默,研究目标lncRNA在兔心房电重构及房颤发生中的作用;并阐明目标lncRNA影响房颤电重构的分子机制,推动lncRNAs在房颤发生中的研究,有利于对房颤发病机制的揭示和临床潜在防治靶点的筛选。研究方法1.构建实验性房颤兔模型将12只健康成年新西兰白兔随机分为房颤组和对照组。对房颤组行手术将起搏电极置于右心房,以额定频率600次/分(10Hz)连续起搏7天建立实验性房颤兔模型。对照组行同样手术但不起搏。并于手术前和手术7天后分别行心内电生理检查,包括AERP和房颤诱发性。2.lncRNAs的高通量测序并验证TRIzol法提取3只对照组及3只房颤组兔右心房中总RNAs,进行二代高通量测序,检测基因转录本及lncRNAs的表达变化。行实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR),验证测序结果的准确性。3.生物信息学分析及筛选对表达变化显着的转录本行Gene Ontology(GO)富集分析及Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)通路分析;基于表达变化量、靶基因预测、保守性分析、共表达分析、组织特异性等生物信息学及统计方法,筛选并鉴定与心房电重构相关的全新转录本。4.预测lncRNAs的作用机制(1)cis-机制通过基于位置关系的cis-机制筛选lncRNAs所在基因组区域上下游10kb以内的转录本,明确lncRNAs及其上下游邻近转录本的表达变化趋势是否具有相关性。(2)trans-机制及共表达分析通过基本局部比对搜索工具(BLAST)来评估lncRNAs与转录本序列形成复合物的可能性;根据皮尔逊相关系数(COR)及P值,计算并选取|COR|>0.85、P<0.05与lncRNAs共表达的转录本;对这些转录本行GO富集分析及KEGG通路分析,预测lncRNAs的trans-作用机制。5.目标lncRNA的功能缺失实验(1)在体感染体外构建阴性对照慢病毒、TCONS_00075467的沉默慢病毒及ocu-miR-328的沉默和过表达慢病毒,滴度为1×109TU/rrml。将25只健康成年新西兰白兔随机分为阴性对照组、TCONS_00075467沉默组、ocu-miR-328沉默组、ocu-miR-328过表达组、TCONS_00075467沉默和ocu-miR-328沉默慢病毒共感染组。麻醉开胸后,将相应的慢病毒在体多点斜行注射至右心房中,感染7天后处死,低温留存心房组织备用,冷冻切片观察荧光强度,检测感染效率。分别于感染慢病毒前、感染慢病毒即刻、感染慢病毒7天后检测AERP、房颤诱发性等电生理学指标。(2)细胞感染提取兔原代心房肌细胞培养。将细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、TCONS_00075467沉默慢病毒组、ocu-miR-328沉默慢病毒组、ocu-miR-328过表达慢病毒组、TCONS_00075467沉默慢病毒与ocu-miR-328沉默慢病毒共感染组。48 h后开始在荧光显微镜下观察感染细胞的荧光强度;培养96 h后提取RNA和蛋白质。6.分子生物学指标的检测TRIzol法提取感染后组织和细胞的总RNAs,qRT-PCR方法检测TCONS_00075467、ocu-miR-328 的表达量;应用 Western Blotting 方法测定靶基因CACNA1C蛋白的表达水平。7.荧光原位杂交实验细胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC水配制)中固定,滴加含5ng/μl寡核苷酸荧光探针的杂交液(TCONS_00075467探针为Cy3标记,ocu-miR-328探针为Dylight488标记),37㈧杂交过夜;DAPI染液复染细胞核;爬片于Olympus荧光显微镜下观察并采集图像(Cy3红光激发波长550 nm,Dylight 488绿光激发波长 492 mm)。8.荧光素酶分析报告合成 TCONS_00075467 基因的 DNA 片段、ocu-miR-328 靶基因 CACNA1C的3' UTRDNA片段野生型,并合成其突变型DNA片段,构建picheck-2荧光素酶载体;应用荧光素酶报告基因来检测ocu-miR-328与载体结合后的荧光强度,用于验证 CACNA1C 基因为 ocu-miR-328 的靶基因、TCONS_00075467 与 ocu-miR-328间存在相互作用。9.膜片钳实验配制细胞外液和电极内液;制备玻璃电极,所用电极控制在3-5MΩ,并填充电极内液,银丝镀氯;将接种于爬片上的心肌细胞置于显微镜((Olympus IX-70)下方槽内,加入预热37℃的细胞外液,并将参比电极放入细胞外液中;应用Axopatch 700B放大器记录全细胞模式信号;信号以1 kHz行过滤,应用Digidata1550B数模/模数转换器获取数据。L型钙离子电流(ICaL)在全细胞电压钳模式下记录,APD在电流钳模式下记录。研究结果1.基于A-TP成功构建实验性房颤兔模型,房颤组AERP明显缩短,房颤诱发率增高。2.通过房颤与非房颤兔右心房组织的二代高通量测序,发现99843种全新lncRNAs转录本,其中1220个全新转录本lncRNAs存在显着性差异表达,其中983个转录本表达下调,237个转录本表达上调。随机选取6个全新的lncRNAs转录本行qRT-PCR方法验证,证实测序结果真实、可靠。3.生物信息学(GO富集)分析表明差异表达的基因转录本主要参与了心脏发育、离子转运及细胞黏附等生物学过程;基于表达量变化≥2倍的转录本筛选、靶基因预测、共表达分析、预测靶基因的生物学功能分析、组织表达特异性鉴定、保守性分析等一系列统计学和生物信息学方法,筛选出3个与电重构相关的新lncRNAs 转录本 TCONS_00106987、XR_516397、TCONS_00075467,其中TCONS_00106987 表达上调,XR_516397、TCONS_00075467 表达下调。并选取TCONS_00075467作为目标lncRNA行进一步深入的机制研究。4.对目标lncRNATCONS_00075467行功能沉默实验后,冷冻切片和细胞爬片观察荧光强度以确定感染效率,qRT-PCR检测表达水平,验证沉默效率。心内电生理检查表明,感染前及感染即刻的AERP不存在差异性变化;与阴性对照组比较,TCONS_00075467沉默组的AERP在感染7天后显着缩短,同时使阵发性房性心动过速及房颤易诱发。5.TCONS_00075467位于兔基因组13号染色体正义链141223079-141225530区域(OryCun2.0),该区域无编码基因覆盖,此转录本属于基因间lncRNA(lincRNA),且不具备蛋白编码能力,主要分布在心房肌细胞的细胞质中。GO富集分析表明TCONS_00075467参与离子转运、心脏发育等生物学过程;KEGG分析表明其与钙离子信号通路、各种心肌病等生物学通路密切相关。6.对于cis-机制,TCONS_00075467所在的基因组区域前后10kb范围内没有寻找到与房颤电重构或离子通道相关的基因转录本。根据生物信息学分析,转录本TCONS_00075467与ocu-miR-328存在多个结合位点,且其表达呈现明显负相关。行荧光素酶报告实验证实TCONS_00075467与ocu-miR-328间存在相互结合。TCONS_00075467沉默后ocu-miR-328的表达量上调。7.Ocu-miR-328的在体沉默和过表达模型行心内电生理检查表明,ocu-miR-328的高表达能够显着缩短AERP,同时使阵发性房性心动过速及房颤易诱发;反之,ocu-miR-328的低表达可以延长AERP,使阵发性房性心动过速及房颤不易诱发。荧光素酶报告实验证实CACNA1C为ocu-miR-328的靶基因。ocu-miR-328高表达后呈现出CACNA1C的表达下调,同时ocu-miR-328的低表达使CACNA1C的表达上调。8.TCONS_00075467低表达后出现CACNA1C的表达下调,同时能够使心房肌细胞的ICaL电流密度减弱和APD缩短。与TCONS_00075467沉默组相比,TCONS-00075467沉默慢病毒和ocu-miR-328沉默慢病毒的共感染使AERP明显延长,且阵发性房性心动过速及房颤的诱发率降低,CACNA1C的表达量上调;但与阴性对照组相比,共感染组的上述变化不具有统计学意义。研究结论1.lncRNAs转录本在实验性房颤兔模型心房内具有显着性差异表达,差异表达的lncRNAs参与了房颤心房电重构的发生;2.全新lncRNA转录本TCONS_00075467与房颤电重构密切相关,且通过功能沉默实验明确了 TCONS_00075467在房颤诱发中的作用;3.TCONS_00075467在体内和体外均能竞争性结合ocu-miR-328进而调控下游靶基因CACNA1C的表达,且ocu-miR-328能够部分逆转TCONS_00075467在电重构中的作用。创新性1.基于敲低实验的功能沉默,明确lncRNAs表达量变化对心房电重构和房颤发生的影响;2.探索lncRNAs通过内源竞争性结合机制调控靶基因影响房颤心房电重构的分子机制,有助于推动lncRNAs在房颤发生机制中的研究;3.基于慢病毒介导的lncRNA沉默载体在体和体外感染,借助于心内电生理检查和膜片钳技术,阐释lncRNAs在心房电重构中发挥作用的机制。(本文来源于《山东大学》期刊2018-05-23）
电重构论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨急性心房扩张后心房电生理特性、N末端心房钠尿肽(NT-proANP)及NO的变化。方法 32只长耳白兔随机分为A、B、C和D组,依次代表心房内静水压为0、8、12和20cm H_2O(1cm H_2O=0.098kPa),每组8只。比较各组电生理参数,记录快速心房刺激诱发心房颤动(房颤)情况,检测心房组织局部NT-proANP及NO水平。结果 4组心房有效不应期(AERP)、左AERP(LAERP)、右AERP(RAERP)、LAERP离散度(dLAERP)及房间传导时间(IACT)比较,有统计学差异(P <0.05,P <0.01)。与A组比较,B、C和D组AERP、LAERP及RAERP水平明显缩短,C、D组IACT明显延长(P<0.05);D组dLAERP明显高于A、B组(P<0.05)。A、B、C、D组房颤诱发率和阵发性房颤诱发率呈明显增长趋势,有统计学差异(P<0.05)。B、C、D组持续性房颤的诱发率明显高于A组(P<0.05),C、D组持续性房颤诱发率明显高于B组(P<0.05)。B组NT-proANP水平最高,且明显高于A、D组[(3507.48±377.54)ng/L vs (3028.41±238.43)ng/L和(2883.95±353.11)ng/L,P<0.05)]。C、D组NO水平较A、B组明显降低(P<0.05)。结论急性心房扩张程度的增加,可导致房颤诱发率增加,心房组织局部NO水平减少,NT-proANP水平呈先增加后降低的现象。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
电重构论文参考文献
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