BDNF和NOS在扬子鳄眼球中的定位和表达分析

论文摘要

目的:本研究以安徽省扬子鳄（Alligator sinensis）繁殖研究中心提供扬子鳄眼球为研究对象,通过免疫组织化学染色和免疫荧光染色分析并观察一氧化氮合酶（NOS）和脑源性神经营养因子（BDNF）在扬子鳄眼球中的表达及分布情况,从而为后续探讨BDNF和NOS在扬子鳄视觉形成中的作用提供实验基础。方法:查询NCBI GenBank公共数据库中的人（accession no:NP000616.3）、家兔（accession no:AAB68663.1）、非洲爪蟾（accession no:AAD55136.2）、斑马鱼（accession no:NP571735.1）的NOS和以及人（accession no:CAA62632.1）,家兔（accession no:XP017201122.1）,非洲爪蟾（accession no:AAH82887.1）,斑马鱼（accession no:AAH66468.1）的BDNF蛋白氨基酸序列,利用MEGA软件对NOS和BDNF的氨基酸序列进行序列同源性比对和分析。取新鲜的鳄鱼眼球并立即用4%多聚甲醛固定,剔除周围的结缔组织,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST漂洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加H2O2封闭30 min,然后滴加一抗（稀释比例分别为兔抗BDNF抗体为1:200,鼠抗nNOS抗体为1:200）,置于湿盒内于4℃孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。分别滴加HRP标记的羊抗兔IgG抗体和HRP标记的兔抗鼠IgG抗体,室温孵育1小时,PBST洗3次,每次10min,DAB显色液显色后,光镜下观察BDNF和nNOS在眼球中的表达;HE染色观察成年扬子鳄眼球切片的结构。将新鲜的鳄鱼眼球取出后立即用4%多聚甲醛固定,将周围结缔组织清除干净,OCT包埋后进行冰冻切片,切片厚度为6μm。将切片在室温晾置20 min后,PBST洗三次,每次10 min,在组织周围用免疫组化笔画圈后滴加入5%马血清封闭30 min后,分别滴加兔抗BDNF抗体（稀释比列为1:200）和鼠抗nNOS抗体（稀释比列为1:200）后,置于湿盒内于4℃冰箱孵育过夜。次日将片子取出,PBST洗3次,每次10min。滴加二抗（同时加入驴抗小鼠-594,驴抗兔-488,稀释比例均为1:1000）,室温孵育2小时后,PBST洗3次,每次10min。滴加DAPI（1:1000）染核10 min后,PBST洗10min。甘油封片后于激光共聚焦显微镜拍照,观察NOS、BDNF在眼球中的分布情况。结果:通过生物学分析发现NOS和BDNF蛋白氨基酸序列在不同物种之间存在差异性,NOS蛋白氨基酸序列中,家兔和非洲爪蟾的同源性最高,为76.70%,其次为非洲爪蟾与斑马鱼的同源性74.02%;BDNF蛋白氨基酸序列中,人和非洲爪蟾的同源性最高,为85.48%,其次为人和家兔的同源性72.95%。HE染色可观察到扬子鳄眼球巩膜、脉络膜、视网膜结构清晰。免疫组织化学染色明显发现BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达。免疫荧光染色发现BDNF和NOS在视网膜层共同表达,二者在视网膜层出现共存现象。结论:1.BDNF在扬子鳄眼球切片的脉络膜层和视网膜层表达,而NOS主要在视网膜层表达,二者在视网膜层共同表达并出现共存现象。2.BDNF和NOS在扬子鳄的眼球中均有表达且共存,可能参与扬子鳄视觉形成的调节。

论文目录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 黄艳姣

导师: 郑兰荣

关键词: 扬子鳄,视网膜

来源: 皖南医学院

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 皖南医学院

分类号: Q436

总页数: 66

文件大小: 2657K

下载量: 13

相关论文文献

• [1].《儿童视网膜疾病图谱》出版[J]. 中国斜视与小儿眼科杂志 2019(04)
• [2].《儿童视网膜疾病图谱》出版[J]. 中国斜视与小儿眼科杂志 2020(01)
• [3].蛋白酪氨酸磷酸酶1B在视网膜疾病中的研究进展[J]. 眼科学报 2020(03)
• [4].光学相干断层扫描仪应用于视网膜疾病检查中的护理配合[J]. 医疗装备 2017(10)
• [5].视网膜疾病眼局部给药研究进展[J]. 中国中医眼科杂志 2017(02)
• [6].对失明说拜拜[J]. 大科技(科学之谜) 2016(12)
• [7].骨髓间充质干细胞在视网膜疾病研究中的应用[J]. 海峡科学 2010(05)
• [8].川芎嗪对兔缺血性视网膜疾病的疗效[J]. 国际眼科杂志 2009(02)
• [9].5-氟尿嘧啶治疗糖尿病视网膜病变的研究进展[J]. 湖北科技学院学报(医学版) 2020(02)
• [10].睫状神经营养因子在视网膜疾病中的应用研究进展[J]. 海峡科学 2016(02)
• [11].准分子激光原位角膜磨镶术术前视网膜疾病的早期干预[J]. 中国医药导刊 2010(11)
• [12].间充质干细胞来源外泌体对视网膜新生血管影响的研究进展[J]. 国际眼科杂志 2020(06)
• [13].赵培泉领衔的“中国小儿视网膜疾病诊疗规范的兴起与推广”成果荣获“中国眼科学2009至2013年十大研究进展”称号[J]. 上海交通大学学报(医学版) 2014(12)
• [14].间充质干细胞在视网膜疾病中的临床应用展望[J]. 眼科 2011(04)
• [15].视网膜疾病的彩色多普勒超声成像[J]. 眼科新进展 2010(11)
• [16].抗血管内皮生长因子在视网膜疾病中的应用[J]. 中国眼耳鼻喉科杂志 2018(01)
• [17].人工智能平台高效诊断视网膜疾病[J]. 技术与市场 2018(04)
• [18].视网膜神经信号的调制和视网膜疾病[J]. 复旦学报(医学版) 2017(06)
• [19].小胶质细胞的特征及其在视网膜疾病中的作用[J]. 眼科新进展 2016(03)
• [20].生活中需注意保护视网膜[J]. 山西老年 2020(11)
• [21].骨髓间充质干细胞诱导分化及在视网膜疾病中的应用[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2010(49)
• [22].小鼠视网膜透射电镜样品制备方法与注意事项[J]. 电子显微学报 2019(04)
• [23].婴幼儿视网膜广域成像关键技术研究[J]. 光学与光电技术 2018(06)
• [24].视网膜中央静脉阻塞病因的研究进展[J]. 临床眼科杂志 2010(06)
• [25].非增殖性糖尿病视网膜病变的程度与视网膜血流指数相关性研究[J]. 中华全科医学 2018(11)
• [26].光学相干断层扫描对视网膜疾病的诊断价值[J]. 眼科新进展 2015(01)
• [27].LncRNA在视网膜发育和病变中的研究进展[J]. 解剖科学进展 2019(06)
• [28].骨髓间充质干细胞治疗视网膜疾病的实验进展[J]. 海峡科学 2010(05)
• [29].间充质干细胞在视网膜疾病研究中的应用[J]. 国际眼科杂志 2011(02)
• [30].干细胞移植治疗视网膜变性疾病临床试验现状及前景[J]. 第三军医大学学报 2019(03)

标签：扬子鳄论文;  视网膜论文;