导读:本文包含了细胞间质论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:探讨肿瘤坏死因子(TNF-α),前列腺癌,上皮间质转化,侵袭转移
细胞间质论文文献综述
焦敏,郭卉,秦天洁,孙红,陈玉乐[1]（2019）在《肿瘤坏死因子α促进人前列腺癌ARCaP细胞上皮细胞间质转化的实验研究》一文中研究指出目的探讨肿瘤坏死因子(TNF-α)对人前列腺癌ARCaP细胞上皮细胞间质转化的影响。方法比较人前列腺癌ARCaPE细胞和ARCaPM细胞形态学差异,通过Western blot实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞E-cadherin表达水平差异;通过Transwell体外侵袭实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞体外侵袭能力差异;通过real time RT-PCR实验比较ARCaPE细胞和ARCaPM细胞TNF-α表达水平差异;通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,观察比较处理组与对照组在形态学、E-cadherin表达及体外侵袭能力方面的差异。结果 ARCaPE细胞呈类似铺路石样的类圆形,细胞间连接紧密,呈岛屿状生长。ARCaPM细胞排列松散,部分细胞拉长呈纺锤形。与ARCaPE细胞相比,ARCaPM细胞E-cadherin表达下调,但具有更高的体外侵袭能力和更高的TNF-α表达水平。通过重组人TNF-α蛋白处理ARCaPE细胞,可使其排列松散,细胞拉长呈纺锤形,E-cadherin表达下调,并获得较高体外侵袭能力。结论 TNF-α可诱导人前列腺癌ARCaP细胞EMT。(本文来源于《现代泌尿外科杂志》期刊2019年11期）
李叁科,洪振宇,苗战会,霍晓庆,王颖拓[2]（2019）在《GW5074抑制高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化》一文中研究指出目的:评估C-Raf抑制剂GW5074对高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化的影响。方法:观察GW5074处理对高剂量放射线引起的细胞形态学改变;细胞经GW5074处理或转染sh-Twist1后,通过Western blot检测C-Raf、p-C-Raf、Twist1、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量。应用高剂量小范围放射线照射小鼠后,通过对损伤组织的HE染色及免疫荧光染色观察上皮间质转化现象。结果:在细胞实验中,GW5074可有效减轻高剂量放射线引起的细胞形态学变化。高剂量放射线可使C-Raf蛋白激活,且在照射后48 h的作用最强。照射前应用GW5074和sh-Twist1预处理,能使Twist1和α-SMA的表达量减少而E-cadherin的表达量增加,sh-Twist1组p-C-Raf的表达量与照射组无明显差异。在动物实验中,GW5074可有效减轻放射线造成肺损伤的程度,明显减少α-SMA并增强E-cadherin的表达。结论:GW5074可能通过抑制C-Raf/Twist1信号通路有效减轻高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2019年11期）
王炎,李思泠,朱钟慧,李秋月,赵静[3]（2019）在《Snail在染石英尘小鼠肺上皮细胞间质转化中的作用》一文中研究指出目的:观察转录因子Snail在石英诱导的小鼠肺上皮细胞间质转化(EMT)的作用。方法:雄性C57BL/6J小鼠20只随机分为4组,每组5只,分别为对照组、石英组,石英+空病毒组,石英+Snail基因抑制组。采用尾静脉注射腺相关病毒(AAV)的方式对小鼠肺组织进行Snail基因抑制。石英+空病毒组和石英+Snail基因抑制组分别经尾静脉注射空病毒或抑制Snail基因的病毒,而石英组和对照组给予同体积生理盐水。尾静脉注射后第7天,除对照组外,其余组小鼠均一次性气管内注入浓度为25mg/ml石英粉尘混悬液0.1ml,对照组气管注入同体积生理盐水。染尘后第14 天,处死小鼠,收集肺组织,采用real-timePCR的方法检测各组小鼠肺组织中Snail和间质标志物(vimentin、α-SMA)的基因表达。结果:与对照组相比,石英组小鼠肺组织中vimentin和α-SMA基因表达显着上调(p<0.05),表明石英能诱导小鼠肺组织发生EMT。尾静脉注射AAV后,与石英+空病毒组相比,石英+Snail基因抑制组小鼠肺组织中Snail基因表达明显下调(p<0.05),间质细胞标志物vimentin、α-SMA也出现了明显的下调(p<0.05),表明可以通过尾静脉注射AAV的方式抑制小鼠肺组织中Snail基因的表达,而抑制Snail的基因表达能抑制石英诱导小鼠肺组织发生EMT。结论:转录因子Snail可能在石英诱导的小鼠肺上皮细胞间质转化中发挥重要的作用。(本文来源于《2019全国呼吸毒理与卫生毒理学术研讨会论文集》期刊2019-10-25）
孙翼,高永棣,董蓉,俞佳丽,查艳[4]（2019）在《SOCS2在1型糖尿病肾病肾小管上皮细胞间质转分化中的作用》一文中研究指出目的:研究细胞因子信号传导抑制因子(SOCS)2在1型糖尿病肾病(T1DN)肾小管上皮细胞间质转分化(EMT)的作用。方法:28只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组(n=7)和T1D组(n=21)。T1D组单次空腹腹腔注射链脲佐菌素(STZ)100 mg/kg,48 h后随机血糖测定结果≥16.7 mmol/L,确诊为1型糖尿病(T1D)。建模成功后,将21只T1D小鼠随机分为3组:T1DN组(n=7)、联合组(贝那普利联合胰岛素用药,n=7)、胰岛素组(胰岛素单独用药,Insulin,n=7)。持续给药8周后处死小鼠,收集血清、尿和肾组织,分别进行生化、病理和相关蛋白与mRNA的检测。结果:与对照组[(3.81±0.24)mmol/L,(32±4.68)μg/24 h]相比,T1DN组血糖、尿蛋白[(21.70±2.26)mmol/L,(286±42.41)μg/24 h]均明显增高(P<0.001),联合组血糖、尿蛋白[(11.84±0.69)mmol/L,(173±17.83)μg/24 h]均明显下降(P<0.001),而Insulin组[(13.05±0.81)mmol/L]血糖明显下降(P<0.001),但对尿蛋白[(262±34.40)μg/24 h]作用不明显。天狼星红染色结果显示对照组肾组织结构完整,肾间质未见胶原纤维沉积;T1DN组肾组织结构破坏,间质胶原纤维沉积明显增多(P<0.001);联合组上述病变明显减轻(P<0.001),Insulin组减轻效果不明显。T1DN组肾组织中FN和SOCS2表达明显增加,E-cadherin表达明显减少(P<0.001);联合组E-cadherin表达明显增加,FN和SOCS2表达明显减少(P<0.001);Insulin组的效果不明显。Pearson相关性分析显示,T1DN小鼠肾组织中SOCS2的表达水平与肾组织胶原纤维沉积量和FN呈正相关,与E-cadherin呈负相关。结论:SOCS2在T1DN肾组织的EMT过程中发挥重要作用。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年19期）
徐珊,周游,刘钰妮,王世恩,杨建林[5]（2019）在《力达霉素对人宫颈癌Hela细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化能力的影响》一文中研究指出目的研究力达霉素(LDM)对Hela细胞的细胞周期、凋亡、自噬和上皮细胞间质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法 MTT法分析LDM对Hela细胞增殖的影响;流式细胞术检测LDM对Hela细胞的细胞周期、细胞凋亡的影响;Western blot检测细胞内相关蛋白的表达水平;Transwell法分析LDM对Hela细胞迁移、侵袭能力的影响;QT-PCR分析LDM对Hela细胞赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)表达的影响。结果 LDM明显抑制Hela细胞增殖,其不同处理时间的IC_(50)值分别为19.24 ng·mL~(-1)(24 h)、6.678 ng·mL~(-1)(48 h)和3.221 ng·mL~(-1)(72 h)。LDM可诱导Hela细胞发生G_2/M期阻滞和细胞凋亡。低浓度LDM(5 ng·mL~(-1))可诱导Hela细胞发生自噬,但高浓度LDM(20 ng·mL~(-1))则抑制Hela细胞的自噬水平。LDM抑制Hela细胞迁移和侵袭,改变EMT相关因子的蛋白表达水平,且这一过程与LSD1无关。结论 LDM能抑制宫颈癌Hela细胞增殖和侵袭转移,其作用机制可能与阻遏细胞周期、诱导细胞凋亡、干扰细胞自噬和抑制EMT密切相关。(本文来源于《中国药理学通报》期刊2019年10期）
渠景连,杨邯捷,赵惠亮[6]（2019）在《补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响》一文中研究指出目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显着增强(P <0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显着上调(P <0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P <0. 05,P <0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P <0. 05,P <0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。(本文来源于《中国实验方剂学杂志》期刊2019年19期）
刘刚[7]（2019）在《IL-32β诱导人肺泡上皮细胞间质转化的效应及机制研究》一文中研究指出目的:探讨IL-32β在人肺泡上皮细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程中的作用和机制。方法:首先,使用衣霉素(Tunicamycin,TM)作用于A549细胞,观察细胞形态并检测IL-32及各亚型表达情况,筛选IL-32亚型;其次,使用rhIL-32β(筛选出的亚型)作用于A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态,RT-qPCR检测EMT相关标志物,正向验证IL-32β对A549细胞的作用;再使用含有IL-32 siRNA的质粒转染A549细胞,细胞分组选择衣霉素处理后使用RT-qPCR及Western Blot检测EMT相关标志物,逆向证实IL-32β在A549细胞EMT中的作用;最后使用内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ER stress)抑制剂4-PBA作用于A549细胞,RT-qPCR及Western Blot检测GRP-78的表达,明确IL-32β是否通过激活ER stress诱导EMT。结果:1.在体外肺纤维化模型中,IL-32及其各亚型表达均上调,IL-32β及IL-32γ亚型的上调最为显著;2.rhIL-32β诱导A549细胞发生EMT:rhIL-32β作用于A549细胞24小时后,发现一些细胞形态从鹅卵石样变成细长不规则的形状。rhIL-32β作用后,上皮细胞标志物E-cadherin的表达显着下调(P<0.05),而间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin及Zeb-1的表达则明显上调(P<0.05);3.IL-32 siRNA能抑制衣霉素所致EMT:IL-32 siRNA+TM组较TM组比较,N-cadherin、Vimentin、Snail及Zeb-1的表达显着下调(P<0.05);4.rhIL-32β诱导A549细胞ER Stress的发生:rhIL-32β作用于A549细胞24小时后,GRP-78 mRNA及蛋白表达均显着增加(P<0.05)。而加入4-PBA后,GRP-78mRNA表达及蛋白表达均降低(P<0.05);5.rhIL-32β促进ER Stress介导A549细胞的EMT:用rhIL-32β或4-PBA作用A549细胞24h,发现与rhIL-32β组相比,4-PBA可降低间皮细胞标志物N-Cadherin、Vimentin和Zeb-1 mRNA的表达,及上调上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA的表达(P<0.05),同样,rhIL-32β组N-Cadherin和α-SMA蛋白表达均上调,而加入4-PBA后其表达均显着下降(P<0.05);6.IL-32β可诱导A549细胞致炎因子产生:rhIL-32β作用A549细胞24h后,炎症细胞因子TNF-α、IL-6、TGF-β1和IL-1βmRNA的表达均显着高于对照组(P<0.05)。7.IL-32β在A549细胞中可上调p-FAK的表达:rhIL-32β作用A549细胞后,对照组和IL-32β组之间的FAK蛋白表达没有差异(P>0.05),但rhIL-32β组p-FAK蛋白表达水平显着高于对照组(P<0.05)。结论:IL-32β通过激活ER Stress诱导A549细胞发生EMT,IL-32可能是肺纤维化治疗的新靶点。(本文来源于《遵义医科大学》期刊2019-06-30）
陶娅玲,朱亮亮,邹嘉乐,杜威,付先芸[8]（2019）在《子宫腺肌病小鼠子宫内膜基底/功能层上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞中ROCK1蛋白表达观察》一文中研究指出目的观察子宫腺肌病(AM)小鼠子宫组织及内膜基底/功能层上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞中与Rho相关的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶(ROCK1)的表达变化,并分析其与内膜侵袭能力相关性。方法出生2 d的雌性ICR小鼠38只,随机分为空白组8只、模型组30只。模型组采用初生小鼠枸橼酸他莫昔芬灌胃法制作AM模型,空白组不做任何处理。饲养至12周龄,引颈处死两组小鼠后取子宫组织,HE染色后镜下观察两组小鼠子宫组织AM病灶内膜浸润程度,采用Western blotting法检测小鼠子宫组织ROCK1蛋白、ras同源基因家族(Rho),采用免疫组化法检测两组小鼠子宫内膜基底层(NJ)、内膜功能层(NG)上皮细胞、间质细胞、平滑肌细胞ROCK1蛋白,分析AM小鼠病灶的子宫内膜浸润深度与ROCK1蛋白表达的相关性。结果空白组子宫组织无内膜浸润,模型组AM病灶轻度、中度、重度浸润分别为8、12、6例。模型组、空白组子宫组织ROCK1相对表达量分别为1. 554±0. 079、0. 079±0. 006,二者比较,P <0. 01;模型组、空白组子宫组织Rho相对表达量分别为0. 442±0. 094、0. 109±0. 073,二者比较,P <0. 01。与空白组比较,模型组NJ平滑肌细胞、NJ上皮细胞、NJ间质细胞、NG上皮细胞、NG间质细胞ROCK1蛋白OD值均升高(P均<0. 05)。在模型组NJ处,上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高,显着高于间质细胞及平滑肌细胞(P均<0. 05);与模型组NG上皮细胞比较,NJ间质细胞ROCK1蛋白OD值降低(P <0. 05)。与无浸润者比较,轻、中、重度浸润小鼠子宫NJ及NG平滑肌细胞、间质细胞、上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高(P均<0. 01);与轻度及中度浸润组比较,重度浸润组小鼠子宫NJ及NG平滑肌细胞、间质细胞、上皮细胞ROCK1蛋白OD值升高(P均<0. 01)。AM小鼠子宫NJ间质细胞及上皮细胞间、NG间质及上皮细胞间ROCK1蛋白表达均呈正相关(r分别为0. 913,0. 893,0. 866,0. 897; P均<0. 05)。结论 AM小鼠子宫组织Rho、ROCK1高表达,子宫NJ、NG不同细胞ROCK1蛋白均呈高表达。子宫不同部位上皮细胞ROCK1蛋白的表达与间质表达呈正相关,ROCK1蛋白高表达与AM的侵袭能力相关。(本文来源于《山东医药》期刊2019年18期）
杜建奎[9]（2019）在《Kallikrein-8促进内皮细胞间质转化在糖尿病心脏和肾脏间质纤维化中的作用及其机制研究》一文中研究指出组织激肽释放酶相关肽酶(tissue kallikrein-related peptidases,KLKs)是一类具有胰蛋白酶和糜蛋白酶样活性的丝氨酸蛋白酶家族,KLKs可特异性地裂解低分子量激肽原以形成激肽,后者通过选择性地刺激缓激肽B1和B2受体进而发挥广泛的生物学作用。本课题组前期研究指出KLK8上调诱导心肌肥厚以及进展性心功能障碍,并且这一作用是依赖于EGF及PAR1/2信号通路而并非激肽受体信号通路。与此同时,本课题组同样发现KLK8上调诱导心肌间质纤维化,并且内皮细胞功能紊乱触发的内皮间质转化(Endothelial-mesenchymal transition,EndMT)参与KLK8上调介导的心肌间质纤维化的发生。糖尿病是以长期高血糖为主要特征,全身多器官系统病变的代谢紊乱综合征;据统计,2017年全球糖尿病患者人数高达4.35亿;据估计,至2045年,全球糖尿病患者人数将超过6亿,糖尿病正逐渐成为全球性疾病。糖尿病如果不能够及时诊断、治疗将会引发多种并发症,包括糖尿病心肌病、糖尿病肾病等,而后者以器官功能紊乱以及组织纤维化为主要特征。研究指出激肽释放酶-激肽系统(Kallikrein-kinin system,KKS)参与糖尿病及其并发症的病理发生发展,然而其中的机制尚未完全阐明,那么是否KLK8参与糖尿病心肌病以及糖尿病肾病器官功能紊乱以及组织纤维化的发生呢?因此,本研究在整体水平上采用1型糖尿病小鼠模型,细胞水平上高糖处理HCAECs以及HRGECs,拟首先观察KLK8在内皮细胞高糖处理时的表达改变,继而利用KLK8转基因和KLK8基因敲除两种模式动物、通过整体和细胞水平的实验证实KLK8在糖尿病心肌以及肾脏组织EndMT和间质纤维化病理发生发展过程中的关键作用,并阐明其分子机制。主要实验结果如下:第一部分KLK8促进内皮间质转化在糖尿病心肌病心肌间质纤维化中的作用及其机制研究一.高糖显着上调糖尿病小鼠心脏及冠脉内皮细胞KLK8表达1.(1)腹腔注射STZ构建1型糖尿病小鼠,构建成功3/6个月后检测心脏KLK8mRNA表达,糖尿病组KLK8表达显着高于对照组,并表现出明显的时间依赖性;(2)人冠状动脉内皮细胞(Human coronary artery endothelial cells,HCAECs)给与5.5mM、15mM、25mM葡萄糖处理120h,对照组给与mannitol处理;与对照组相比,高糖可显着上调KLK8在mRNA水平表达,并表现出明显的浓度依赖性;二.过表达KLK8诱导人冠状动脉内皮细胞发生EndMT1.HCAECs给与KLK8腺病毒转染72h以过表达KLK8,同空载体组相比,过表达KLK8可显着增加间质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(αSMA)与波形蛋白(vimentin)蛋白表达,降低内皮细胞标志物血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)和内皮细胞钙粘蛋白(VE-cadherin)表达,即诱导EndMT;(2)TGF-β1中和抗体部分阻断过表达KLK8诱导的EndMT,即抑制KLK8诱导的αSMA与vimentin表达上调以及CD31与VE-cadherin表达下调;二.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱、EndMT以及心脏纤维化应用KLK8 siRNA以敲低内皮细胞KLK8表达,对照组给与等量control siRNA;与对照组相比,KLK8 siRNA可显着逆转高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,即内皮细胞损伤标志物vWF,sTM以及E-selectin均显着降低,内皮细胞活力显着升高,而单独转染KLK8 siRNA对内皮细胞功能无影响;此外,KLK8 siRNA可显着逆转高糖诱导的VE-cadherin与CD31蛋白表达下调以及αSMA与vimentin蛋白上调;叁.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏组织纤维化以及心脏EndMT1.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏内皮功能紊乱以及心脏功能紊乱;(1)小鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozocin,STZ)以构建1型糖尿病小鼠,模型构建成功后6个月检测血糖水平,同野生型组相比,野生型糖尿病组血糖显着增高,然而KLK8敲除糖尿病组小鼠血糖未见明显降低;(2)同野生型对照组相比,糖尿病小鼠血清vWF,sTM,E-selectin均显着升高,而KLK8缺失组糖尿病小鼠vWF,sTM,E-selectin较野生型组糖尿病小鼠显着降低;2.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏EndMT;与野生型组相比,糖尿病小鼠心脏组织VE-cadherin和CD31表达显着降低,αSMA和vimentin表达显着升高,KLK8缺失可显着逆转高糖诱导的内皮细胞标志物降低以及间质细胞标志物增高,而单独KLK8缺失小鼠心肌组织内皮细胞以及间质细胞标志物未见明显改变,免疫荧光双染结果同样显示,同对照组相比,野生型糖尿病小鼠心脏CD31表达显着降低而αSMA,vimentin与fsp1表达显着增高,并且存在大量CD31与αSMA,vimentin以及fsp1共染,而KLK8缺失可显着增加心脏CD31表达且αSMA,vimentin与fsp1表达显着降低;3.KLK8缺失可显着减轻糖尿病心脏组织纤维化及心脏功能紊乱;(1)同野生型对照组相比,6个月糖尿病小鼠血压升高、心率降低、心脏收缩功能障碍,KLK8缺失可显着逆转高糖诱导的血压升高、心率降低以及心脏收缩功能障碍,而单独KLK8缺失小鼠血压、心率、心功能未见明显异常;(2)Masson染色结果显示,KLK8缺失同样可显着降低糖尿病心脏组织纤维化;四.KLK8降解VE-cadherin,进而促进γ-catenin发生核转位1.KLK8过表达诱导内皮细胞损伤以及EndMT并非通过激肽B1或B2受体,而是通过其酶的活性(1)应用B1R siRNA与B2R siRNA以下调激肽B1和B2受体表达,MTT结果显示,B1R siRNA与B2R siRNA并不能阻断KLK8腺病毒引起的内皮细胞活力降低,不仅如此,B1R siRNA与B2R siRNA同样不能阻断KLK8上调引起的EndMT;(2)应用两种蛋白酶的抑制剂:antipain与硫酸锌以阻断KLK8的蛋白水解作用,同对照组相比,antipain及硫酸锌可部分阻断KLK8诱导的内皮损伤以及EndMT,即增加内皮细胞活力,上调VE-cadherin和CD31蛋白表达,降低αSMA和vimentin蛋白表达;2.KLK8降解VE-cadherin继而引发γ-catenin发生核转位(1)Western blot结合N-末端测序KLK8可剪切VE-cadherin形成一个约30kDa细胞外片段;(2)腺病毒载体处理的内皮细胞γ-catenin位于细胞膜并且部分与VE-cadherin共定位,而KLK8腺病毒处理组细胞膜γ-catenin与VE-cadherin量显着减少,并且细胞核内存在大量γ-catenin表达;不仅如此,同腺病毒载体相比,KLK8导致内皮细胞胞膜及胞浆中γ-catenin表达降低而细胞核内表达量显着升高,而转染VE-cadherin慢病毒可逆转KLK8诱导的γ-catenin核转位以及胞膜和胞浆γ-catenin表达量;五.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT,而这一作用是通过与p53相互作用完成1.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT应用γ-catenin siRNA以下调内皮细胞γ-catenin表达,γ-catenin siRNA可显着逆转KLK8诱导的内皮细胞VE-cadherin与CD31表达降低以及αSMA与vimentin的表达升高;2.γ-catenin参与介导KLK8诱导EndMT的作用是通过与p53相互作用完成(1)Co-IP结果显示,γ-catenin在内皮细胞中与p53和TCF4相互联系,且KLK8过表达可进一步加强γ-catenin与p53和TCF4间的结合作用;(2)p53抑制剂pifithrin-α可逆转KLK8诱导的EndMT,然而,TCF/β-catenin通路抑制剂ICG-001不能逆转KLK8介导的EndMT;3.TGF-β1参与介导KLK8诱导的EndMT和心脏组织纤维化(1)KLK8可显着增加内皮细胞TGF-β1在mRNA的表达,这一作用可以被γ-catenin siRNA以及pifithrin-α部分逆转,然而,ICG-001不能逆转KLK8对TGF-β1的mRNA表达;(2)CHIP结果表明HIF-1α可结合到TGF-β1启动子区的缺氧反应元件,而KLK8可进一步增强这一结合作用,HIF-1α的抑制剂echinomycin不仅能够抑制TGF-β1的基础表达,而且能够阻断KLKL8诱导的TGF-β1在内皮细胞mRNA水平的表达,γ-catenin siRNA与pifithrin-α可显著逆转KLK8诱导的HIF-1α与TGF-β1的结合作用;4.p53-Smad3通路参与介导KLK8诱导的EndMT以及心脏组织纤维化(1)KLK8过表达可显着增加内皮细胞p53与Smad3的结合作用,而这一作用可被γ-catenin siRNA部分阻断;(2)KLK8过表达可显着增加内皮细胞TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因包括Snail,Slug,Twist,Zeb1,Zeb2在mRNA水平的表达,然而γ-catenin siRNA与pifithrin-α可显著逆转KLK8诱导的促纤维化转录因子表达;六、高葡萄糖促进γ-catenin依赖性的p53与HIF-1α和Smad3相互作用,继而以KLK8依赖性的方式增加TGF-β1/Smad3促纤维化靶基因表达1.KLK8参与高葡萄糖诱导的γ-catenin核转位及TGF-β1依赖性促纤维化通路激活(1)高葡萄糖处理导致内皮细胞胞膜及胞浆中γ-catenin表达显着降低,细胞核中γ-catenin表达明显升高,然而KLK8 siRNA可降低细胞核且增加胞膜和胞浆中γ-catenin含量;(2)高葡萄糖处理导致TGF-β1 mRNA表达及释放显着增加,与此同时TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因mRNA表达同样明显增加,然而KLK8siRNA与γ-catenin siRNA可以很大程度上逆转高葡萄糖所诱导的TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达。2.KLK8参与介导高糖诱导的γ-catenin依赖性p53与Smad3、HIF-1α的相互作用(1)高葡萄糖可导致内皮细胞γ-catenin与p53间联系明显加强,然而KLK8siRNA可显着逆转γ-catenin与p53间相互联系。不仅如此,KLK8 siRNA与γ-catenin siRNA同样能够逆转高葡萄糖诱导的内皮细胞p53与HIF-1α和Smad3间的相互作用。CHIP结果显示:高葡萄糖能够进一步加强HIF-1α与TGF-β1启动子区缺氧反应元件的结合作用,然而KLK8 siRNA,γ-catenin siRNA及p53抑制剂可显着逆转高糖诱导的HIF-1α与TGF-β1启动子的结合作用;(2)在整体水平上,我们发现STZ诱导的1型糖尿病小鼠在24周时心脏TGF-β1 mRNA与蛋白水平及TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达均显着增加,而KLK8缺失可显着逆转糖尿病心脏TGF-β1 mRNA与蛋白水平及TGF-β1/Smad3通路促纤维化靶基因表达的增加;(3)KLK8缺失可显着逆转糖尿病心脏γ-catenin与p53间相互联系,KLK8缺失同样可以逆转糖尿病心脏p53与HIF-1α和Smad3间的相互作用。整体水平的CHIP结果显示,同野生型组相比,KLK8缺失可显着逆转HIF-1α与TGF-β1启动子区的结合作用。结论:高糖促进心肌组织KLK8表达,进而通过诱导心脏内皮细胞功能紊乱触发的EndMT导致心脏间质纤维化、心脏功能紊乱,而这一作用是依赖于KLK8作用于VE-cadherin-γ-catenin复合体,VE-cadherin被降解,γ-catenin发生核转位,进而激活TGF-β信号通路来完成。第二部分KLK8促进内皮间质转化在糖尿病肾病肾脏间质纤维化中的作用及其机制研究一.转基因KLK8大鼠肾脏组织发生End MT以及纤维化1.KLK8过表达导致肾脏组织纤维化和肾脏损伤Masson染色结果显示:转基因KLK8大鼠肾脏组织较之同龄野生型相比出现明显的胶原堆积,并且表现出明显的时间依赖性,即12周龄转基因KLK8大鼠肾脏组织胶原堆积明显多于6周龄;并且肾脏组织中羟脯氨酸和胶原蛋白及TGF-β1水平较对照组明显升高;尿蛋白检测结果同样显示转基因KLK8大鼠较之同龄野生型相比尿蛋白含量明显增加,并且均表现出明显的时间依赖性;2.KLK8过表达导致肾脏组织发生End MT同野生型大鼠相比,转基因KLK8大鼠肾脏组织vimentin和α-SMA表达显着增加,而VE-cadherin和CD31表达显着降低;进一步免疫荧光双染技术结果表明:较之同龄野生型大鼠相比,12周龄转基因KLK8大鼠肾脏组织内皮细胞标志物CD31表达显着降低,而间质细胞标志物α-SMA、fsp1显着增多,并且存在大量与CD31共染的阳性细胞,共聚焦结果同样证实转基因KLK8大鼠肾脏组织CD31与α-SMA、fsp1存在共定位;3.过表达KLK8导致人肾小球内皮细胞功能紊乱KLK8腺病毒转染人肾小球内皮细胞(Human glomerular endothelial cells,HRGECs)以过表达KLK8,KLK8可导致内皮细胞活力显着下降,并表现出时间和浓度依赖性,不仅如此,内皮损伤的标志物E-selectin,s TM,v WF的释放量明显增加,并且内皮细胞通透性显着增加;4.过表达KLK8诱导HRGECs发生EndMTKLK8可剂量依赖性地增加αSMA与vimentin蛋白表达,降低CD31与VE-cadherin表达;二.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱、End MT以及肾脏间质纤维化1.KLK8上调参与高糖诱导的内皮细胞功能紊乱应用KLK8 si RNA以敲低内皮细胞KLK8表达,MTT结果表明KLK8 si RNA可显着逆转高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,而单独转染KLK8 si RNA对内皮细胞功能无影响;2.KLK8上调参与高糖诱导的End MT同对照组相比,高糖可显着上调αSMA与vimentin蛋白的表达,降低VE-cadherin与CD31蛋白表达,而KLK8 si RNA可降低高糖诱导的αSMA与vimentin上调以及VE-cadherin与CD31下调;叁.γ-catenin参与介导KLK8诱导End MT(1)γ-catenin si RNA可显着逆转KLK8诱导的内皮细胞VE-cadherin与CD31表达降低以及αSMA与vimentin的表达升高;此外,γ-catenin si RNA可同样逆转KLK8诱导的内皮细胞活力降低;(2)KLK8可显着增加内皮细胞TGF-β1在m RNA水平的表达,这一作用可以被γ-catenin si RNA部分逆转;(3)CHIP方法证实HIF-1α可结合到TGF-β1启动子区的缺氧反应元件,而KLK8可进一步增强这一结合作用,且HIF1-α抑制剂可逆转KLK8上调内皮细胞TGF-β1在m RNA水平的表达;结论:高糖促进肾脏组织KLK8表达,进而通过诱导心脏内皮细胞功能紊乱、End MT导致肾脏间质纤维化、肾脏功能紊乱,而这一作用是依赖于KLK8激活TGF-β信号通路来完成。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-01）
蒋莉莉[10]（2019）在《尼达尼布对肺泡上皮细胞间质转分化的作用及机制研究》一文中研究指出目的:探讨尼达尼布是否通过影响VEGF/TGF-β1/Notch1信号通路抑制肺泡上皮细胞间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),进而抑制肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的发生与发展,从而为PF的治疗提供了理论依据。方法:雄性SD大鼠52只,随机分为对照组、博来霉素(Bleomycin,BLM)组、BLM+尼达尼布(50 mg/kg)剂量组、BLM+尼达尼布(100 mg/kg)剂量组,每组12只。采用气管内注射博来霉素(5000 U/kg)来建立大鼠的肺纤维化模型。造模后连续灌胃给药四周,对照组和模型组在相同环境下给予相等体积(1mL/100g)生理盐水。HE和Masson染色分别观察肺组织病理变化及胶原沉积情况。免疫组织化学法检测肺组织转化生成因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(collagen I)蛋白的阳性表达情况。大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(RLE-6TN)随机分为5组:Control组、血管内皮生成因子(VEGF,10ng/mL)组、VEGF+尼达尼布(1、10、100 nmol/L)剂量组。细胞用VEGF预处理1 h,再加入不同剂量的尼达尼布处理48h。Real time-PCR检测肺组织及(或)细胞collagen I、III型胶原(collagen III)、α-SMA、波形蛋白(Vimentin)、E-钙粘蛋白(E-Cadherin)、紧密结合蛋白(ZO-1)、VEGF、TGF-β1、Notch1 mRNA的表达情况。Western blot分析肺组织及(或)细胞中collagen I、collagen III、Vimentin、α-SMA、ZO-1、E-Cadherin、VEGF、TGF-β1、Notch1蛋白表达情况。结果:1.动物实验(1)HE染色结果显示正常组的肺组织肺泡结构无明显破坏,无明显炎症反应。与正常组相比,BLM组的大鼠肺泡结构破坏严重,炎性细胞浸润,肺组织发生实质性病变,肺泡间隔变宽,成纤维细胞显着增生。与模型组相比,尼达尼布各组给药四周后上述病理变化明显减轻。(2)Masson染色结果显示正常组的肺组织肺泡结构无明显改变,肺间质仅有少量胶原表达。与正常组相比,BLM组肺泡间隔明显增厚,肺间质胶原沉积明显增多,而不同剂量尼达尼布连续给药28天后肺组织胶原沉积明显减轻。免疫组化、real-time PCR及Western blot检测发现,与对照组相比,模型组的大鼠的肺组织中collagen I、III mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01);与BLM组相比,尼达尼布各剂量组的肺组织collagen I、collagen III mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。(3)免疫组化、real-time PCR及Western blot检测发现,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中Vimentin、α-SMA mRNA及蛋白的表达明显上调(P<0.01)而E-cadherin及ZO-1mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.01);与BLM组相比,尼达尼布各剂量组的肺组织α-SMA、Vimentin mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)而E-cadherin及ZO-1 mRNA及蛋白的表达明显升高(P<0.05或P<0.01)。(4)免疫组化、real-time PCR及Western blot分析发现,与对照组相比,模型组大鼠肺组织中VEGF、TGF-β1、Notch1 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.01);与BLM组相比,不同剂量尼达尼布能明显下调肺组织VEGF、TGF-β1、Notch1mRNA及蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。2.细胞实验(1)Real-time PCR和Western blot结果显示,与Control组相比,VEGF组TGF-β1、Notch1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与VEGF组相比,不同剂量尼达尼布组TGF-β1、Notch1 mRNA及蛋白的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)。(2)与Control组相比,VEGF组中Vimentin、α-SMA mRNA和蛋白均出现不同水平的上调(P<0.01)。而ZO-1和E-Cadherin的mRNA和蛋白均出现了不同水平的下降(P<0.01)。与VEGF组相比,不同剂量尼达尼布组Vimentin,α-SMA的mRNA和蛋白表达均不同程度的下调,而ZO-1和E-Cadherin的mRNA和蛋白表达均不同水平的上升(P<0.05或P<0.01)。(3)与正常组相比,VEGF组collagen I、collagen III mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.01);与VEGF组相比,不同剂量尼达尼布组collagen I、collagen III mRNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:尼达尼布对博来霉素诱导的肺纤维化大鼠肺泡上皮细胞转分化(EMT)具有明显的抑制作用,其机制可能与其抑制VEGF/TGF-β1/Notch1信号通路有关。(本文来源于《皖南医学院》期刊2019-05-01）
细胞间质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:评估C-Raf抑制剂GW5074对高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化的影响。方法:观察GW5074处理对高剂量放射线引起的细胞形态学改变;细胞经GW5074处理或转染sh-Twist1后,通过Western blot检测C-Raf、p-C-Raf、Twist1、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量。应用高剂量小范围放射线照射小鼠后,通过对损伤组织的HE染色及免疫荧光染色观察上皮间质转化现象。结果:在细胞实验中,GW5074可有效减轻高剂量放射线引起的细胞形态学变化。高剂量放射线可使C-Raf蛋白激活,且在照射后48 h的作用最强。照射前应用GW5074和sh-Twist1预处理,能使Twist1和α-SMA的表达量减少而E-cadherin的表达量增加,sh-Twist1组p-C-Raf的表达量与照射组无明显差异。在动物实验中,GW5074可有效减轻放射线造成肺损伤的程度,明显减少α-SMA并增强E-cadherin的表达。结论:GW5074可能通过抑制C-Raf/Twist1信号通路有效减轻高剂量小范围放射线诱导的肺泡上皮细胞间质转化。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞间质论文参考文献
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标签：探讨肿瘤坏死因子(TNF-α); 前列腺癌; 上皮间质转化; 侵袭转移;