首页> 正文

四川部分地区腹泻家兔大肠杆菌及其毒力因子的流行特征分析

2020-12-02阅读(842)

四川部分地区腹泻家兔大肠杆菌及其毒力因子的流行特征分析

论文摘要

大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）能引起人类、哺乳动物等广泛宿主的腹泻,一些毒力、传播力和耐药性强的菌株给公共卫生及畜牧生产造成了巨大的威胁。为掌握四川主要家兔规模化养殖区兔大肠杆菌腹泻相关毒力基因的流行情况,清楚大肠杆菌分子流行特征,对大肠杆菌进行毒力基因的分布调查和分子分型研究。20152017年间从四川部分地区（成都、德阳、雅安、自贡、绵阳）养殖场采集腹泻家兔肛门拭子样本,经麦康凯（MAC）、伊红美蓝（EMB）选择培养基、形态学及特异性PCR鉴定获得兔源大肠杆菌。随后,对涉及肠毒素（Enterotoxin）、志贺毒素（Shiga-toxin,Stx）、菌毛粘附素（Fimbrial adhesins）、侵袭因子（Invasive factors）、肠聚集性大肠杆菌（Enteroaggregative Escherichia coli,EAEC）和毒力岛（Pathogenicity island,PAI）等类别的17种毒力基因进行PCR检测,通过Fisher精确检验,对分离株的毒力基因分布情况进行比较。采用多位点序列分型（MLST）对分离株进行7个管家基因的扩增和测序后,在Warwick数据库比对获取序列型,再采用MAGA 6.0、SplitsTree4软件基于管家基因构建系统发育树,分析各序列型的亲缘关系;另外,用DnaSP6软件进行管家基因的核苷酸多态性分析。采用美国疾控中心PulseNet的脉冲场凝胶电泳（PFGE）方案,用Quantity One软件进行基因分型。最后,综合分析MLST和PFGE分型结果与毒力基因检出情况之间的关联性。结果从腹泻家兔病例中共分离、鉴定39株大肠杆菌,对其进行的17种毒力基因检测发现携带6种毒力基因,分别为肠细胞脱落位点（LEE）毒力岛eae（41.0%）、ler（41.0%）;兔菌毛粘附素ral（33.3%）、afr2（10.3%）;耶尔森菌强毒力岛（HPI）irp2（15.4%）;肠毒素astA（7.7%）,其余11种毒力基因（aggR、aap、aaf、aggA、IpaH、STa、STb、LT、stx1、stx2、afr1）均未检出。39株大肠杆菌中24株至少拥有一种或多种与腹泻相关的毒力基因,共有6种毒力基因组合:eae-ler-ral（50%）、eae-ler-afr2（13%）、eae-ler-afr2-ral（4%）、irp2（21%）、astA（8%）和astA-irp2（4%）。统计学分析发现成都、德阳两地20152016年与2017年的毒力分布有显著差异,20152016年间成都、德阳、雅安、自贡、绵阳5个地区的毒力分布有显著差异。MLST将39株大肠杆菌分为17个序列型,U328（8株）、ST162（6株）、ST328（4株）、ST380（3株）、ST20（3株）为主要的序列型,管家基因序列的遗传进化分析显示U328和ST328亲缘关系很近。7个管家基因序列核苷酸多态性（Pi）范围为0.00342（purA）0.01374（fumC/icd）。PFEG将39株大肠杆菌分成21个型,菌株总体表现为较高多样性,但在部分区域基因型也较为单一。PFGE分型-MLST-毒力基因综合分析表明:MLST与PFGE分型结果有较高的一致性,PFGE的分辨率略高于MLST。本研究表明四川省5个地区39株腹泻家兔大肠杆菌具有较高的多样性,但在部分养殖区域存在大肠杆菌基因型较为单一的情况;毒力基因研究表明,调查区域的家兔大肠杆菌毒力基因谱存在时空差异且eae、ler、ral和afr2等毒力基因与MLST序列型有较密切的相关性。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 符号说明
  • 前言
  • 第一章 文献综述
  •   1 大肠杆菌特性
  •     1.1 大肠杆菌的生物学特性
  •     1.2 大肠杆菌的致病性
  •     1.3 大肠杆菌基因组多样性
  •   2 大肠杆菌的鉴定
  •     2.1 16S rRNA寡核苷酸序列分析
  •     2.2 大肠杆菌特异性基因鉴定
  •   3 大肠杆菌毒力因子
  •     3.1 毒力岛
  •       3.1.1 LEE毒力岛
  •       3.1.2 HPI毒力岛
  •     3.2 肠毒素
  •     3.3 志贺毒素
  •     3.4 菌毛黏附素
  •     3.5 侵袭因子
  •     3.6 肠聚集性大肠杆菌相关毒力因子
  •   4 细菌分型技术
  •     4.1 细菌分型技术进展
  •     4.2 PFGE在细菌分子分型中的应用
  •       4.2.1 PFGE技术概要
  •       4.2.2 PFGE技术应用现状与技术评价
  •     4.3 MLST在细菌分子分型中的应用
  •       4.3.1 MLST技术概要
  •       4.3.2 MLST技术应用现状与技术评价
  • 第二章 家兔大肠杆菌分离鉴定与毒力基因检测
  •   1 材料
  •     1.1 病料来源
  •     1.2 主要试剂
  •     1.3 主要仪器
  •   2 方法
  •     2.1 样品采集
  •     2.2 细菌的分离纯化
  •     2.3 细菌的PCR鉴定
  •       2.3.1 引物的设计与合成
  •       2.3.2 DNA模板的制备
  •       2.3.3 大肠杆菌菌种的PCR鉴定
  •     2.4 大肠杆菌的毒力基因检测
  •       2.4.1 引物的设计与合成
  •       2.4.2 大肠杆菌的毒力基因检测
  •       2.4.3 大肠杆菌毒力基因检测结果的统计分析
  •   3 结果
  •     3.1 大肠杆菌的分离鉴定
  •       3.1.1 选择培养基鉴定与形态学观察
  •       3.1.2 菌株PCR鉴定及分离情况
  •     3.2 大肠杆菌毒力基因检测与分析
  •       3.2.3 毒力基因PCR检测结果
  •       3.2.4 毒力基因型的分布
  •       3.2.5 毒力基因分布统计分析
  •   4 讨论
  •   5 小结
  • 第三章 家兔大肠杆菌的分子分型
  •   1 材料
  •     1.1 菌株
  •     1.2 主要试剂
  •     1.3 主要仪器
  •   2 方法
  •     2.1 大肠杆菌MLST
  •       2.1.1 DNA模板的制备
  •       2.1.2 PCR扩增产物测序
  •       2.1.3 管家基因序列号及序列型的获取
  •       2.1.4 管家基因序列的分析
  •     2.2 大肠杆菌PFGE
  •       2.2.1 细菌培养
  •       2.2.2 凝胶块的制备
  •       2.2.3 细菌的裂解
  •       2.2.4 裂解后胶块的洗涤
  •       2.2.5 凝胶块内DNA以XbaI限制性酶切
  •       2.2.6 灌制电泳胶
  •       2.2.7 电泳
  •       2.2.8 电泳图像的获取和聚类分析
  •   3 结果
  •     3.1 MLST结果
  •       3.1.1 菌株管家基因序列号及序列型的获取
  •       3.1.2 管家基因序列的分析
  •     3.2 PFGE分型结果
  •     3.3 PFGE分型-MLST-毒力基因综合分析
  •   4 讨论
  •   5 小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 作者简历

    • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 王世震

    导师: 耿毅,张凯

    关键词: 家兔,大肠杆菌,流行病学,毒力基因,分子分型,脉冲场凝胶电泳,多位点序列分型

    来源: 四川农业大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,农业科技

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 四川农业大学

    分类号: S852.61

    DOI: 10.27345/d.cnki.gsnyu.2019.000729

    总页数: 75

    文件大小: 2097k

    下载量: 12

    相关论文文献

    • [1].家兔科学合理饲喂技术[J]. 现代农村科技 2020(01)
    • [2].家兔综合养殖技术[J]. 中国畜禽种业 2018(10)
    • [3].养兔要充分掌握和利用家兔的消化特性[J]. 植物医生 2016(11)
    • [4].搬家兔[J]. 故事作文(低年级版) 2011(03)
    • [5].家兔饲养过程中如何防治包虫病[J]. 中国动物保健 2017(07)
    • [6].家兔养殖要慎用抗生素[J]. 科学种养 2017(07)
    • [7].家兔科学养殖技术[J]. 乡村科技 2016(30)
    • [8].家兔葡萄球菌病的临床症状及防治措施[J]. 中国养兔 2017(04)
    • [9].家兔腹泻病的鉴别诊断与防治措施[J]. 农技服务 2017(11)
    • [10].怎样防治家兔流行性腹胀病[J]. 农家女 2009(08)
    • [11].家兔安全度夏综合措施(上)[J]. 农家致富 2010(13)
    • [12].家兔资源利用的探讨[J]. 新疆畜牧业 2012(05)
    • [13].家兔腹泻防治的措施[J]. 养殖技术顾问 2012(10)
    • [14].家兔防暑四措施[J]. 农村养殖技术 2009(13)
    • [15].不同基础体温的家兔对热原检查结果的影响[J]. 微生物学免疫学进展 2009(04)
    • [16].家兔饲养需重视“四控”[J]. 中国养兔 2020(03)
    • [17].山西省家兔产业现状、发展趋势和政策建议[J]. 中国养兔 2014(05)
    • [18].从家兔习性看日常管理(上)[J]. 农业知识 2016(09)
    • [19].提高家兔繁殖率七措施[J]. 农村科学实验 2013(01)
    • [20].浅谈黎明乡家兔养殖的现状和发展前景[J]. 畜牧市场 2010(09)
    • [21].家兔的繁殖特性[J]. 中国养兔 2020(01)
    • [22].家兔流行性腹胀病的发病原因与综合防治措施[J]. 中国养兔 2019(02)
    • [23].家兔腹泻成因与防治措施探析[J]. 山东畜牧兽医 2017(05)
    • [24].家兔育肥要点[J]. 农村科学实验 2015(11)
    • [25].药品检验动物实验中普通级家兔的管理要点[J]. 中国药事 2011(09)
    • [26].提高家兔养殖效益的措施[J]. 农村养殖技术 2010(03)
    • [27].提高家兔繁殖率九措施[J]. 四川农业科技 2008(01)
    • [28].家兔的正确捕捉方法[J]. 农家之友 2008(02)
    • [29].家兔脱毛的原因及应对措施[J]. 中国养兔杂志 2008(04)
    • [30].四氧嘧啶联合饮食失节法诱导家兔糖尿病胃轻瘫模型探讨[J]. 中国现代医生 2008(19)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  ;  ;  

    四川部分地区腹泻家兔大肠杆菌及其毒力因子的流行特征分析
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕论降 版权所有 鄂ICP备12018319号-6