黄宁江1阳晓1郑德胜2黄海1
（1永州职业技术学院湖南永州425100）
（2永州市第一人民医院湖南永州425000）
【摘要】目的：探讨洛伐他汀在HTL所致在体大鼠血管内皮功能损伤的保护作用。方法：制造用HTL（50mg?kg-1）灌胃损伤大鼠血管内皮的模型，给予洛伐他汀10、40mg?kg-1灌胃后检测血管内皮依赖性舒张反应（EDR)，血管组织中NF-κBP65的表达，血清中一氧化氮、丙二醛的含量及总胆固醇、甘油三酯的水平，超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶的活性。结果：洛伐他汀呈剂量依赖性地改善HTL抑制大鼠胸主动脉的内皮依赖性舒张反应，能抑制血管组织中NF-κBP65表达的增加，可使一氧化氮水平升高，丙二醛含量降低，与HTL损伤组相比较均具有显著性差异，但各组大鼠血脂水平无明显变化。结论：HTL对在体大鼠血管内皮功能损伤洛伐他汀具有显著保护作用。
【关键词】洛伐他汀；HTL；内皮依赖性舒张
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2015）09-0021-03
LovastatininHTLratvascularendothelialfunctioninjurycausedbytheprotectiveeffectsofstudyHuangNingjiang,YangXiao,HuangHai.TheVocationalTechnicalCollegeofYongzhou,Hu’nanProvince,Yongzhou,425100,China;ZhengDesheng.TheFirstPeople'sHospitalofHu’nanProvince,Yongzhou425000,China
【Abstract】Objective:TostudytheprotectiveeffectoflovastatininHTL-inducedendothelialdysfunctioninrats.Methods:Manufacturingmodel,withHTLgavage,vascularendothelialinjuryinrats,andthenorallyadministeredlovastatin,detectsomecasesofvascularendothelium-dependentrelaxationresponse.Results:Lovastatincaninhibittheincreaseofthenf-kappaBP65expressioninvasculartissue,canmaketheelevatedlevelsofnitricoxide,malondialdehydecontentdecreased,comparedwiththeHTLinjurygrouphavesignificantdifference.ConclusionsLovastatinonendothelialdysfunctioninratswithasignificantprotectiveeffect.
【Keywords】Lovastatin;HTL;Endothelium-dependentrelaxing
研究表明，引起动脉粥样硬化的独立危险因素之一是高同型半胱氨酸(Hyperhomocysteinemia,HHcy)血症[1],而HHcy血症导致血管损伤主要与同型半胱氨酸硫内酯（HomocysteineThiolactone，HTL）有关[2]。临床实验表明，他汀类药物可延缓动脉粥样硬化、降低冠状动脉粥样硬化性心脏病临床事件发生率及死亡率[3]。洛伐他汀(Lovastain)是目前常用的治疗高胆固醇血症的他汀类药物，但有关对HTL引起的血管内皮损伤的保护作用鲜见报道。本试验以外源性HTL诱导的在体大鼠的血管损伤为模型，考察洛伐他汀对HTL引起的血管内皮损伤的保护作用及机制。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1实验动物雄性SpragueDawley大鼠，体重180±20g。
1.1.2主要试剂同型半胱氨酸硫内酯（HTL）、洛伐他汀、N-乙酰半胱氨酸（NAC）、超氧化物歧化酶（SOD）、乙酰胆碱（ACh）、苯肾上腺素（Phe）、硝普钠（SNP）；NF-κBp65激活-核转运检测试剂盒、血脂测试盒；丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px），购自南京建成生物工程公司。
1.2方法
1.2.1动物分组与模型制备大鼠随机分组，分笼喂养，每组10只，分为：①0.1ml?kg-1?d-1生理盐水正常对照组；②40mg?kg-1?d-1洛伐他汀对照组；③50mg?kg-1?d-1HTL损伤组；④50mg?kg-1?d-1HTL+10mg?kg-1?d-1洛伐他汀低剂量治疗组：⑤50mg?kg-1?d-1HTL+40mg?kg-1?d-1洛伐他汀高剂量治疗组；⑥50mg?kg-1?d-1HTL+200mg?kg-1?d-1NAC治疗组⑦50mg?kg-1?d-1HTL+0.1ml?kg-1?d-1阿拉伯树胶（10%）洛伐他汀溶媒对照组，共7组，分别灌胃，连续8周，一周测定体重一次，不限饮水，正常补充饲料，术前禁食12小时。
1.2.2血清标本采集及处理灌胃8周的大鼠禁食12h，经戊巴比妥钠（3%）麻醉，从颈总动脉插管采集全血，于4℃静置1小时，3000rpm离心10分钟，取上血清测定SOD活性，NO、MDA、TC、TG含量。
1.2.3大鼠血管环的制备及血管内皮依赖性舒张功能的检测迅速对经麻醉于颈总动脉放血处死后的大鼠开胸，取出一段胸主动脉，放置预冷充氧的K-H溶液中，冲洗残血剪成血管环，悬挂于含K-H溶液的浴槽中，通过生物信号采集系统将张力换能器转换血管环的收缩与舒张的张力，进行记录和数据处理。实验前检测血管环内皮功能完整后，再将各组药物分别加入浴槽中，检测乙酰胆碱（0.01～3?mol?L-1）引起的EDR反应和硝普钠（0.01～0.3?mol?L-1）引起的非内皮依赖性舒张反应。
1.2.4血管组织中NF-κBp65表达的检测大鼠处死后，取主动脉置于10%甲醛液中经固定、脱水、透明、石蜡包埋等程序后制备石蜡切片，按试剂盒说明书要求操作，检测NF-κBP65表达。
1.3统计学方法
血管环的舒张百分率（%）用不同浓度的ACh或SNP引起的血管环舒张值与1?mol?L-1的Phe引起的收缩值之比的百分数来表示，ACh3?mol?L-1或SNP0.3?mol?L-1引起的舒张百分率记为最大舒张百分率（Emax），达到最大舒张百分率的50%时所需的ACh浓度记为半数有效量（EC50）。实验数据统计采用SPSS12.0软件，计量资料以均数±标准差表示（x-±s）表示，组间比较用ANOVA及Newman-Student多重比较t检验分析。
2.结果
2.1洛伐他汀对HTL所致在体大鼠胸主动脉EDR损伤作用的影响
洛伐他汀对HTL所致在体大鼠胸主动脉EDR损伤的影响如图1所示。
图1各处理因素对在体大鼠血管环ACh诱导EDR的影响
（##P<0.01vs正常对照组，**P<0.01vsHTL损伤组）
从图中显示，HTL损伤组使血管环EDR明显降低，Emax下降，比较正常对照组，差异显著（P＜0.01）。高剂量、低剂量洛伐他汀治疗组对HTL所致大鼠胸主动脉EDR的损伤均具有明显的保护作用，比较HTL损伤组，差异显著（P＜0.01）。
2.2HTL和洛伐他汀对大鼠血清生化参数的影响
如表所示，HTL损伤组血清中，SOD活性及NO含量明显降低，对比正常组，有显著性差异（P<0.01）；高剂量、低剂量洛伐他汀治疗组及NAC治疗组SOD活性及NO含量，比较HTL损伤组，均有显著性差异（P<0.05），而对比正常对照组，无显著性差异（P>0.05）。HTL引起血清MDA含量显著增加，与正常对照组比较有显著性差异（P<0.01），高剂量、低剂量洛伐他汀治疗组、NAC治疗组均能显著拮抗HTL引起血清MDA含量升高的作用，对比HTL损伤组，差异显著（P<0.05），对比正常对照组，无显著性差异（P>0.05）。HTL、洛伐他汀及其他试剂对在体大鼠血清TC、TG无显著性差异（P>0.05）。
2.3各种处理因素对大鼠血管环非内皮依赖性舒张反应的影响
待血管环与各处理因素共孵90min后，分别检测SNP(0.3?mol/L)引起的非内皮依赖性舒张反应，测得各组舒张百分率分别为：HTL损伤组92.88%±1.14；洛伐他汀低剂量治疗组93.48%±0.09；洛伐他汀高剂量治疗组94.53%±1.98；NAC治疗组93.54%±1.81；洛伐他汀溶媒对照组93.51%±1.65；洛伐他汀对照组94.31%±1.37。同正常对照组的舒张百分率（95.85%±0.87）比较，均无显著性差异（P＞0.05）。表明各种处理因素均不影响离体血管环的非内皮依赖性舒张反应。
2.4洛伐他汀对大鼠血管组织中NF-κBP65表达的影响
洛伐他汀对在体大鼠血管组织中NF-κBP65表达的影响如图2所示。
图2各组在体大鼠血管内皮NF-κBP65表达
A:正常对照组；B:HTL损伤组；C:HTL+Lov溶媒对照组；D:Lov对照组；E:低剂量Lov治疗组；F:高剂量Lov治疗组；G:NAC对照组
从图2中可以看出，HTL损伤组对比正常组，大鼠血管内皮层红色荧光显著增强，表明HTL能增强血管内皮细胞NF-κBP65的表达。洛伐他汀溶媒对HTL的作用几乎无影响，但高、低剂量洛伐他汀治疗组、NAC治疗组却能明显减弱HTL的作用。
3.讨论
实验中发现，HTL（50mg?kg-1）能明显抑制大鼠血管内皮依赖性舒张反应，但对SNP诱导的血管非内皮依赖性舒张反应却无明显影响，说明该浓度的HTL主要损伤血管内皮，而对血管平滑肌无明显作用。不同浓度的洛伐他汀（10，40mg?kg-1）表现出呈浓度依赖性减轻HTL对血管EDR的损伤，NAC也能减轻HTL对血管EDR的损伤作用。HTL在抑制血管EDR的同时，使血清中NO的含量也降低了，说明HTL可能通过干扰NO的合成或释放，抑制了血管的EDR反应。而高剂量、低剂量的洛伐他汀可拮抗HTL对EDR抑制，同时也维持了血清中NO的含量，说明洛伐他汀可能通过促进NO的合成或释放，来拮抗HTL对EDR的损伤作用[4]。HTL导致大鼠血清中NO水平降低、MDA浓度增加以及SOD活性降低，而洛伐他汀能显著改善HTL所致NO浓度的降低及MDA水平的升高，保护SOD的活性，说明洛伐他汀的保护作用可能与抑制HTL触发的氧化应激反应有关[5]。
此外，实验中HTL损伤组大鼠血管组织内皮NF-κBP65的表达显著增加，表明NF-κB的活性增强在HTL所致血管损伤机制中发挥了重要作用，这与HarkerL.A等的研究结果基本一致[6]。
洛伐他汀可通过增加SOD活性及降低MDA生成而发挥抗氧化作用，洛伐他汀对HTL引起的大鼠血管内皮功能的损伤有显著保护作用，而此保护作用不依赖其降血脂作用。
【参考文献】
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