郑瑞军门九章纪新华（山西省中医药研究院山西太原030012）
【中图分类号】R917【文献标识码】B【文章编号】1672-5085(2009)32-0080-03
【摘要】目的测定芪句颗粒中黄芪甲苷的含量。方法采用薄层反射式线性扫描法测定黄芪甲苷的含量。结果黄芪甲苷在0.504ug～2.52ug范围内，点样量与峰面积积分值呈良好的线性关系，回归方程为：A=366.35C+313.3.32，r=0.9993，平均回收率为99.18%，RSD%为1.84%。结论方法可靠，结果稳定，重现性好，可作为芪句颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。
【关键词】薄层扫描法芪句颗粒黄芪甲苷
DeterminationofAatragalosideinQiJuGranulesbyTLC-scanning
Zhengruijun，Menjiuzhang，Jixinhua
(ShsnxiAcademyoftraditionalChineseMedicine，Taiyuan，Shanxi030012，China)
Abstract:objiective:ToestablishamethodfordeterminationofastagalosideinQijuGranules.Method:reflactionwavelengthTLC-scanningwasused.Results:Agoodlinearitywasshownattheconcentrationof0.504ugto2.52ugofastragaloside(r=0.9993),theaveragerecoverywas98.66%andtheRSD%was1.35%.Conclusion:Themethodisreliable.TheresultsarestablewithagoodrepeatabilityandcanbeusedfordeterminationofastragalosideinQIJUGranules.
Keywords:QIJUGranules;Aatragaloside;TLC-scanning
芪句颗粒是由黄芪、玄参等六味中药提取物混合制备的颗粒剂，具有调节人体阴阳平衡，增强机体免疫的功能。
1实验部分
1.1仪器与试药
薄层扫描仪；手动点样器；CATS4工作站；电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品鉴定所提供(批号：0251-200812)，供含量测定用，水为双蒸水，其余试剂为分析纯。
1.2薄层色谱条件及扫描条件
吸附剂：硅胶G；展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(12:6:2)(10℃以下放置过夜)的下层溶液；显色方法：喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰。照薄层色谱法(《中国药典》2005版附录VIB薄层扫描法)单波长扫描，λ=520nm;扫描方式:反射式线性扫描：狭缝：6.00×0.45;扫描速度=20mm/s。在此条件下，黄芪甲苷及供试品色谱图峰型较好，而阴性无干扰。
2方法与结果
2.1对照品溶液的制备
精密称取2.52mg黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解，定容于5mL量瓶中，得到浓度为0.504mg/mL的对照品溶液。
2.2检测波长的选择
精密吸取黄芪甲苷对照溶液2uL，点于硅胶G薄层板上，按上述薄层条件，展开，取出，晾干，显色。用薄层扫描仪进行最大吸收波长的扫描，波长范围为200～800nm，根据测定结果，最大吸收波长为510nm。
2.3供试品溶液的制备
提取方式及时间考察：精密称取本品(批号：120809)2～3g，加甲醇适量，分别超声处理和索氏提取不同时间，放冷后滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，过滤，滤液用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用1%NaOH溶液洗涤2次，每次20mL，弃去碱液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗涤2次20mL，弃去水层，正丁醇蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液。
以上结果表明，超声处理30min和索氏提取4h，含量已经提取完全，而且索氏提取的含量明显大于超声处理，故确定本品的制备方法为：取本品适量，研细，精密称取3g，置索氏提取器中，加甲醇适量，浸泡过夜，再加适量甲醇，索氏提取4h，放冷后滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，过滤，滤液用水饱和正丁醇振摇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用1%NaOH溶液洗涤2次，每次20mL，弃去碱液，正丁醇液再用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20mL，弃去水层，正丁醇蒸干，残渣加甲醇lmL使溶解，作为供试品溶液。
2.4标准曲线及线性范围
精密吸取黄芪甲苷对照品溶液1，2，3，4，5uL，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件测定。以黄芪甲苷上样量(ug)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为：A=366.35C+313.3.32，r=0.9993，线性范围为0.504ug～2.52ug。
2.5稳定性试验
精密吸取供试品溶液4uL，点于硅胶G薄层板上，按上述条件展开，显色，室温下放置，每隔30min测定一次，记录斑点的峰面积，测定120min，结果表明：黄芪甲苷斑点在120min内稳定，RSD为0.87%，结果见表。
2.6精密度试验
同板精密度：精密吸取供试品溶液4uL各5份，分别点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件展开，显色，测定斑点峰面积积分值，RSD为1.1%。异板精密度：精密吸取批号为120809的同一份供试品溶液，分别点于5块薄层板上，点样量均为4uL，并同板随行外标两点对照品溶液，依法测定样品溶液在每块板上的峰面积，RSD为1.4%。仪器精密度：对同一斑点连续进行5次扫描，测得斑点峰面积积分值，RSD为1.0%，
2.7重复性试验
取批号为120809的样品5份，分别按样品测定项下的方法提取，点样，展开，扫描测定，按外标二点法计算含量，
2.8回收率试验
取以知含量的样品(批号120809，含量为0.4l1mg/g)5份，每份约0.3g，分别精密加入一定量的黄芪甲苷，按样品测定项下，提取、测定，计算回收率。6次测定的平均回收率为99.18%，RSD为1.84%。
2.9空白干扰试验
按处方工艺制备不含黄芪的阴性样品并按供试品制备方法制备成阴性样品溶液，与供试品溶液、对照品溶液点于同一薄层板上，按上述方法进行展开、显色、扫描。结果阴性样品在黄芪甲苷对照品相应的色谱位置无吸收，表明其他成分对黄芪甲苷的测定无干扰。
2.10样品测定
精密吸取供试品溶液4uL，对照品溶液2uL、4uL，交叉点于同一硅胶G薄层板上，按上述条件测定3批样品含量。
经过整个方法学考察及三批样品的测定结果，三批样品以黄芪甲苷计含量在0.40298～4.1245mg/g范围内，考虑到药材来源，批次制备等其他因素的影响，芪句颗粒含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计每克不少于0.3mg。
3讨论
本品为多种中药提取物组成的颗粒剂，文献报道黄芪甲苷的含量测定方法主要有比色法、薄层扫描法[1]、高效液相色谱法，但因薄层扫描法灵敏、简便、准确、成本低而最为常用，中国药典也采用此法，本实验参考中国药典黄芪药材项下方法[2]，采用甲醇水浴回流提取，经水饱和正丁醇萃取纯化，氨试液碱化，再通过大孔吸附树脂柱进一步纯化精致，结果黄芪甲苷的斑点清晰，分离度好，无干扰。
研究过程中对色谱条件、扫描条件等进行了实验筛选，结果表明扫描条件选择锯齿扫瞄，零点设定，以锯齿扫瞄斑点两边为零可降低背景干扰对实验结果的影响。此方法测定结果可靠，快速方便，重现性好，可作为芪句颗粒中黄芪甲苷含量测定。
参考文献
[1]陈发奎.常用中药有效成分含量测定.北京:人民卫生出版社,1997:621-622.
[2]国家药典委员会.中国药典Ⅰ部.北京:化学工业出版社,2000:249-250.
课题来源：本课题为导师门九章教授太原市2009年科技明星专项项目“过敏性紫癜肾炎新型制剂——芪句颗粒的开发研究”中的“芪句颗粒制备工艺及质量标准研究”部分。编号：09121015。