导读:本文包含了乳腺暂态表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乳腺,天蚕,卵泡,基因,长效,山羊,乙型肝炎。
乳腺暂态表达论文文献综述
王铁东,李小平,逄大欣,欧阳红生[1]（2009）在《抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达》一文中研究指出根据已发表的天蚕素B的cDNA序列化学合成4条引物,以重迭延伸PCR的方法合成了真核细胞偏爱密码子编码的抗菌肽天蚕素B基因,将其克隆于pMD18-T载体,DNA序列分析证实合成的抗菌肽基因的碱基序列与设计的序列完全一致。利用山羊-β酪蛋白基因5′侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRES1-neo,构建抗菌肽天蚕素B的乳腺组织特异性表达载体pbCP-cpin,将该载体溶于生理盐水,注入处于泌乳期的成年母山羊乳腺组织进行暂时表达。通过对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌试验确定了抗菌肽天蚕素B基因在山羊乳腺中的表达和抗菌活性。本试验建立了抗菌肽天蚕素B的乳腺瞬时表达系统,为验证各调控元件以及抗菌肽基因在转基因动物乳汁中分泌表达的有效性和可行性提供了一个快速检测系统。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2009年08期）
严正杰,杨欢利,孙雪萍,赵西彪,丁家桐[2]（2008）在《山羊FSH及其长效类似物基因在小鼠乳腺中的暂态表达》一文中研究指出应用山羊促卵泡素长效类似物基因构建其乳腺暂态表达载体pcDNAFSH-βCTP、pcDNAFSH-βCTP-α及构建报告基因pcDNAEGFP,测序后通过脂质体转染至怀孕末期的小鼠乳腺组织。结果表明,构建的乳腺暂态表达载体在小鼠乳腺中获得了表达,表达量分别为pcDNAFSHα,β(7.933±2.074)IU/L,pcDNAFSHα,-βCTP(9.311±2.995)IU/L,pcDNAFSH-βCTP-α(11.059±4.107)IU/L。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2008年07期）
孙雪萍[3]（2006）在《山羊促卵泡素及其长效类似物乳腺暂态表达研究》一文中研究指出FSH在动物生殖过程中起重要作用,FSH药物制剂已广泛应用于提高家畜的繁殖力。目前FSH制品大多是从牲畜的垂体提取,混有LH且易造成病原感染。国内外学者已经克隆出多种动物的FSH基因,并在哺乳动物细胞表达系统中进行了体外表达,但表达量很低。采用哺乳动物的乳腺作为反应器,可有效提高外源目的基因的表达量。本研究就是在此基础上,构建以山羊FSH及其长效类似物乳腺暂态表达载体,通过乳腺暂态表达,检测载体构建的合理性和有效性,为一步研究转基因动物打下基础,促进转基因动物技术的应用和发展。设计含相应酶切位点的特异性引物,以pVITRO-FSHβ-CTP-α为模板,通过两次PCR扩增反应分别获得含特异性酶切位点的FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α;将FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α和载体pcDNA经限制性内切酶酶切,再进行连接和转化,从而成功构建了乳腺暂态表达载体pcDNA-FSHβ-CTP以及pcDNA- FSHβ-CTP-α。通过酶切鉴定FSHβ-CTP、FSHβ-CTP-α序列正确。对载体pEGFP-N1进行双酶切,获得荧光蛋白基因EGFP作为报告基因,再将EGFP亚克隆至pcDNA,获得pcDNA-EGFP。将载体pcDNA-FSHα,β、pcDNA-FSHα,β-CTP、pcDNA -FSHβ-CTP-α以及pcDNA-EGFP采用两种不同的转染试剂转染至怀孕末期小鼠乳腺组织,小鼠分娩后12天内收集乳汁。放免检测乳汁当中FSH的表达量,以及表达持续的时间,同时制作乳腺组织细胞涂片,观察表达载体的转染效果。综合比较采用不同的转染试剂、不同的转染途径所获得的乳腺暂态表达效果。结果表明脂质体的转染效果优于阳离子聚合物,单链长效pcDNA- FSHβ-CTP-α表达效果优于共转染的pcDNA-FSHα,β、pcDNA-FSHα,β-CTP,整个暂态表达周期中,在第6～9天出现峰值。本次实验为优化乳腺表达系统提供参考,也为转基因动物的生产以及FSH制剂的人工合成奠定了分子基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2006-05-01）
李国才,张泉,黄永生,薛方明,陈兵[4]（2005）在《人溶菌酶cDNA在COS-1细胞及小鼠乳腺的暂态表达》一文中研究指出目的研究自行克隆的1.5kb hLYZ双链cDNA的表达特性。方法将此cDNA亚克隆入真核表达载体pcDNA3及乳腺特异表达载体p205C3,重组载体pcDNA3LYZ转染COS-1细胞,用间接免疫荧光法检测转染细胞中hLYZcDNA的表达;重组载体p205C3LYZ注射哺乳期小鼠,用微球菌溶解试验和斑点杂交试验检测hLYZ cDNA在小鼠体内的表达。结果hLYZ cDNA在转染的COS-1细胞中得到了正确表达;小鼠体内表达并分泌到乳汁中的hLYZ达87μg/ml,且目的基因的表达具有较好的组织特异性。结论hLYZ cDNA可在COS-1细胞中有效表达,基因构件p205C3LYZ可以用于动物乳腺生物反应器研制。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2005年05期）
王铁东[5]（2005）在《抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究》一文中研究指出抗菌肽广泛存在于自然界生物体内,具有抗细菌、抗真菌、抗原生生物、抗病毒、抗肿瘤细胞等生物活性。由于天然抗菌肽的获取比较困难,且抗菌肽对细菌具有杀伤作用,采用常规的大肠杆菌表达体系很难实现表达。本研究根据抗菌肽的生物学特性和乳腺表达的特异性,通过建立乳腺表达系统,探索抗菌肽在反刍动物乳腺组织中的表达,明确其在乳汁中的抗菌活性,为下一步实现其在乳腺中的稳定表达及反刍动物细菌性乳腺炎的预防奠定基础。本试验首先根据已发表的天蚕素B 和牛气管抗菌肽的cDNA 序列和氨基酸序列,依据真核细胞偏爱的密码子对抗菌肽编码序列进行优化,在序列两端引入适当的酶切位点,通过重迭延伸PCR 法扩增获得这两种抗菌肽的全基因,分别将它们连接在pMD18-T 载体上,测序证明了合成的正确性。利用山羊β-酪蛋白基因5ˊ侧翼调控序列和真核基因表达载体pIRESneo,分别构建了天蚕素B 和牛气管抗菌肽的乳腺组织特异性表达载体及二者的双表达载体,将所构建的抗菌肽表达载体以生理盐水溶液形式,直接注射处于泌乳期的健康山羊乳腺小叶,注射后不同时间收集乳汁,通过Tricine-SDS-PAGE 电泳鉴定其表达,以薄层琼脂板孔穴扩散法检测表达产物抗菌活性。结果显示,乳腺组织特异性表达载体能够有效地指导天蚕素B 和牛气管抗菌肽在乳腺中的表达,表达产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有明显的抑制作用,对链球菌的抑制效果不明显,表达呈暂态性,可持续3-5 天,乳汁中抗菌肽对高温具有一定耐受性,对酸碱具有较强的抗性,反复冻融可降低抗菌肽的活性。(本文来源于《吉林大学》期刊2005-04-01）
成勇,徐少甫,劳为德,成国祥,张旭晨[6]（1998）在《牛αs1酪蛋白/HBsAg基因在山羊乳腺中暂态表达》一文中研究指出采用显微外科的方法将牛αｓ１酪蛋白基因和人乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因组成的融合基因（λ２０７）与介导蛋白一起导入产前、产后山羊乳腺，或经人工诱导泌乳处理的成年母山羊乳腺，产生乳腺转基因山羊．ＰＣＲ基因扩增检测２只乳腺转基因后的小母羊，在基因导入后的６ｄ和２９ｄ分别在乳腺等组织中存在外源基因．经酶联免疫ＥＬＩＳＡ检测，１２只不同生理状态下乳腺转基因母山羊在其泌乳的第１１９天的乳汁中存在表达产物———重组人乙型肝炎表面抗原（ｒＨＢｓＡｇ），表达率为１００％；在第１２天的乳汁中１２只羊平均表达量为３．８０８μｇ·Ｌ－１，与同一基因构件经胚胎显微注射所产生的转基因山羊乳汁中的表达水平（３．５１７μｇ·Ｌ－１）基本一致．(本文来源于《扬州大学学报(自然科学版)》期刊1998年03期）
劳维德,于雷[7]（1995）在《活体注射导入的人生长激素融合基因在小鼠乳腺中的暂态表达》一文中研究指出以牛ａｓｌ－酪蛋白基因的５’端及上游区３．４ｋｂ和３’端及下游区３．５ｋｂ作为调控元件，以人生长激素基因作为报告基因构建了融合基因，通过乳腺、心脏注射到小鼠体内，利用放射免疫分析方法（ＲＩＡ）在泌乳期小鼠的乳汁中检测到了表达的人生长激素，表明融合基因的构建是正确的。并由此建立了通过靶组织注射结合心脏注射对融合基因的构建进行考察的快速简便方法。其中通过心脏注射而于乳腺获得特异性表达的实验结果尚未见报道。(本文来源于《Developmental & Reproductive Biology》期刊1995年02期）
乳腺暂态表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
应用山羊促卵泡素长效类似物基因构建其乳腺暂态表达载体pcDNAFSH-βCTP、pcDNAFSH-βCTP-α及构建报告基因pcDNAEGFP,测序后通过脂质体转染至怀孕末期的小鼠乳腺组织。结果表明,构建的乳腺暂态表达载体在小鼠乳腺中获得了表达,表达量分别为pcDNAFSHα,β(7.933±2.074)IU/L,pcDNAFSHα,-βCTP(9.311±2.995)IU/L,pcDNAFSH-βCTP-α(11.059±4.107)IU/L。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乳腺暂态表达论文参考文献
[1].王铁东,李小平,逄大欣,欧阳红生.抗菌肽天蚕素B基因的克隆及其在山羊乳腺中的暂态表达[J].中国兽医学报.2009
[2].严正杰,杨欢利,孙雪萍,赵西彪,丁家桐.山羊FSH及其长效类似物基因在小鼠乳腺中的暂态表达[J].中国兽医学报.2008
[3].孙雪萍.山羊促卵泡素及其长效类似物乳腺暂态表达研究[D].扬州大学.2006
[4].李国才,张泉,黄永生,薛方明,陈兵.人溶菌酶cDNA在COS-1细胞及小鼠乳腺的暂态表达[J].中国生物制品学杂志.2005
[5].王铁东.抗菌肽乳腺组织特异性暂态表达及特性研究[D].吉林大学.2005
[6].成勇,徐少甫,劳为德,成国祥,张旭晨.牛αs1酪蛋白/HBsAg基因在山羊乳腺中暂态表达[J].扬州大学学报(自然科学版).1998
[7].劳维德,于雷.活体注射导入的人生长激素融合基因在小鼠乳腺中的暂态表达[J].Developmental&ReproductiveBiology.1995
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