论文摘要
目的构建并鉴定巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠,为研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供动物模型。方法将引进LysM-Cre小鼠与Atg5flox/+小鼠进行杂交、Atg5flox/+小鼠自交,分别获得基因型为Atg5flox/+Cre+/-和Atg5flox/floxCre-/-的子代小鼠;将上述两种基因型的子代小鼠杂交,得到巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠(Atg5flox/floxCre+/-,Atg5-/-)和对照小鼠(Atg5flox/floxCre-/-,Atg5+/+)。提取小鼠鼠尾组织基因组DNA,经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后,在DNA水平判断小鼠基因型;提取小鼠骨髓来源巨噬细胞RNA和蛋白,利用基因测序和Western blot技术检验Atg5基因的敲除效果。结果成功建立巨噬细胞条件性Atg5基因敲除小鼠模型,该小鼠存活并且可育。在基因及蛋白水平上,巨噬细胞Atg5基因敲除成功;且与Atg5+/+小鼠相比,Atg5-/-小鼠自噬基础水平低下(p62明显增多,LC3 II明显减少),对于自噬激活剂雷帕霉素刺激不能恢复到正常基础水平。结论利用Cre/loxp系统,本研究成功构建并鉴定出条件性巨噬细胞Atg5基因敲除小鼠,为在动物水平研究巨噬细胞自噬在肾脏疾病发病机制中的作用提供研究平台。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 黄小荣,黄衍恒,叶霖,杨陈,汤济鑫,安宁,刘建兴,刘华锋
关键词: 巨噬细胞,基因,基因敲除,自噬,基因型鉴定
来源: 中国实验动物学报 2019年06期
年度: 2019
分类: 基础科学,医药卫生科技
专业: 基础医学,泌尿科学
单位: 广东医科大学附属医院肾病研究所湛江市慢性肾脏病防控重点实验室
基金: 国家自然科学基金(81470959,81670654,81700627),广东省科技创新战略专项资金(2018A030313231),湛江市科技发展专项资金竞争性分配项目(2018A01034,2018A01040)~~
分类号: R-332;R692
页码: 770-775
总页数: 6
文件大小: 291K
下载量: 397
相关论文文献
- [1].太平洋鳕ATG5基因的克隆及表达分析[J]. 大连海洋大学学报 2015(05)
- [2].自噬相关基因Atg5与前列腺腺癌发生的相关性分析[J]. 中华男科学杂志 2015(01)
- [3].肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中自噬相关基因ATG5表达降低[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志 2016(02)
- [4].自噬相关基因ATG5在感染和炎症性疾病中的作用[J]. 生理科学进展 2020(05)
- [5].小麦自噬相关因子ATG5的原核表达和抗血清制备[J]. 生物技术通报 2017(07)
- [6].自噬相关基因ATG5沉默增加鼻咽癌裸鼠移植瘤的放射敏感性[J]. 上海医学 2015(02)
- [7].自噬相关基因5(Atg5)标签单核苷酸多态性与帕金森病的相关性研究[J]. 中国实用神经疾病杂志 2010(09)
- [8].抗人Atg5单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 西部医学 2013(03)
- [9].自噬相关基因Atg5的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 生物技术通讯 2009(04)
- [10].人自噬相关蛋白ATG5的原核表达及纯化[J]. 生物技术通讯 2016(02)
- [11].Atg5和Atg7在自身免疫性疾病中的研究进展[J]. 现代临床医学 2019(06)
- [12].胃癌组织中lncRNA-PVT1、Atg5的表达变化及临床意义[J]. 山东医药 2020(10)
- [13].自噬相关基因LC3和ATG5在胃癌中的表达及临床意义[J]. 实用医学杂志 2020(14)
- [14].ATG5和ATG7在糜烂型口腔扁平苔藓中的表达[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版) 2011(06)
- [15].ATG5和ATG7基因多态性与儿童精神发育迟滞的相关性分析[J]. 中国妇幼保健 2020(02)
- [16].加味丹参饮预处理调控自噬相关基因Beclin-1和Atg5表达抗大鼠心肌缺血再灌注损伤[J]. 湖南中医药大学学报 2016(07)
- [17].自噬相关蛋白Atg5在BPA所致肝脏脂质沉积中的作用研究[J]. 重庆医科大学学报 2015(03)
- [18].自噬相关蛋白Atg5和LC3在婴幼儿血管瘤中的表达[J]. 中国美容整形外科杂志 2016(06)
- [19].miR-181a及其靶基因Atg5在胃癌中的表达及临床意义[J]. 胃肠病学和肝病学杂志 2016(03)
- [20].利用慢病毒感染构建稳定敲低Atg5基因的RAW 264.7细胞系[J]. 中国组织工程研究 2021(01)
- [21].过表达Atg5通过上调细胞自噬水平抑制瓣膜间质细胞成骨样分化[J]. 中国细胞生物学学报 2020(03)
- [22].HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者阴虚体质及Atg5基因多态性与聚乙二醇干扰素α治疗应答的关联[J]. 中国中西医结合杂志 2019(11)
- [23].自噬基因Atg5和MAPLC3在急性白血病中的表达及其意义[J]. 实用检验医师杂志 2014(03)
- [24].ATG5和ATG7在糜烂型口腔扁平苔藓中的表达[J]. 河北医药 2012(14)
- [25].ATG5敲低后抑制人肺癌细胞H1299自噬并增强南蛇藤素诱导的细胞凋亡[J]. 基础医学与临床 2017(04)
- [26].上皮性卵巢癌组织中ATG5、Beclin1与P53的表达及相关性研究[J]. 河南医学研究 2015(10)
- [27].自噬相关基因Beclin1和Atg5在宫颈癌中的表达及临床意义[J]. 中国妇幼保健 2020(07)
- [28].EGFR和自噬相关蛋白Atg5、p62在宫颈癌中的表达及意义研究[J]. 河北医药 2020(18)
- [29].自噬相关基因Atg5与PTEN在前列腺腺癌中表达的相关性[J]. 临床与实验病理学杂志 2015(10)
- [30].靶向Atg5的siRNAs促进肝癌细胞HCC-LM3失巢凋亡的实验研究[J]. 现代医药卫生 2017(15)