李学坤[1]2003年在《神经干细胞的分离培养及其在老年神经退行性病中的作用研究》文中指出传统观点认为成体哺乳动物脑内因疾病或损伤丢失的神经细胞无法再生,这意味着成体脑内的神经细胞只能是逐渐减少,而不能被更新。这使人们感到神经系统疾患特别是老年神经退行性病的治疗前景黯淡。近年来,研究人员在胚胎和成年神经组织中发现了一类终末未分化细胞,它们终生保有自我更新能力,并具有多分化潜能,被称为“神经干细胞或神经前体细胞”。脑内神经干细胞产生新的神经细胞的过程称为神经发生。成年哺乳动物脑内至少存在两个具有神经发生能力的区域:侧脑室的脑室下区和海马齿状回的颗粒下区。已经证实,成体脑内的神经发生受到包括生理活动和病理性损伤在内的多种因素的调节,而且新生神经细胞能够与脑内已有的神经回路进行整合,参与脑功能的修复和重建,这为该类疾病的治疗带来了希望和转机。为此,神经干细胞的研究吸引了大批科学家的关注和参与。 阿尔兹海默病(Alzheimer's disease,AD)和帕金森病(Parkinson's disease,PD)是两种严重且常见的老年中枢神经系统疾患。AD的病理变化主要是β淀粉样蛋白(Aβ)沉积造成的老年斑、神经纤维缠结、突触丢失和神经元死亡。而多种因素引起的脑内多巴胺能神经元变性、死亡则是PD的主要发病机制。 Aβ在AD的发生发展过程中具有关键作用,它导致脑内特别是海马区的神经细胞大量变性死亡,造成认知功能明显下降。研究发现,老龄化大脑的神经发生受到抑制,神经前体细胞的增殖降低,但不清楚AD中Aβ的沉积对神经干细胞的增殖产生怎样的影响。另一方面,PD适合于神经干细胞移植治疗主要基于以下叁方面的原因:变性的黑质多巴胺能神经元位置局限;主要投射区纹状体解剖部位明确;有确切可靠的动物模型。国外多家实验室已经进行了有关研究,国内的研究相对滞后,而且移植的效果还需综合深入的评价。基于上述原因,我们设计了本实验,在神经干细胞水平探讨脑功能的修复。
李英博[2]2005年在《人参总皂苷对人胚神经干细胞增殖、诱导分化的研究及其在帕金森小鼠中的应用》文中进行了进一步梳理研究背景与目的:神经干细胞(neural stem cells,NSC)的发现是神经生物学领域的最大突破。NSC 不仅对中枢神经系统发育成熟后不可能再生的理论提出了挑战,也为神经系统损伤和退行性病变的治疗带来了新的希望。NSC 的分离、培养、纯化、鉴定以及扩增和诱导分化是研究神经系统再生和临床治疗的前提。本课题旨在获得人胚胎 NSC,并通过培养了解其生物学特性,为深入研究其增殖、分化奠定基础。方法: 1.从人胚胎大脑皮层中分离、培养、纯化原代人胚胎 NSC,经体外反复传代培养以获得能在体外长期生存的 NSC。2.NSC 的鉴定:①单细胞克隆实验检测其自我更新能力;②免疫细胞化学检测 NSC 特征性标志 nestin 表达;③NSE、GFAP 免疫细胞化学检测其多向分化能力。3.用细胞计数法检测不同种植密度对 NSC 的增生的影响,研究其生长特点并绘制生长曲线。4.经体外长期传代培养、扩增和冷冻复苏后观察其增殖能力和生物学特性的稳定性。
孟晓婷[3]2007年在《转hbFGF羊膜上皮细胞与神经干细胞共移植治疗脊髓损伤的研究》文中认为神经干细胞(NSCs)的应用为脊髓损伤(SCI)治疗带来新的希望,而细胞移植效果与损伤脊髓微环境密切相关。羊膜上皮细胞(AECs)与神经组织细胞具有相似性,可分泌多种神经营养因子(NTFs),其中脑源性NTFs(BDNF)与神经营养素-3(NT-3)是促进神经元存活与分化的主要NTFs。碱性成纤维细胞因子(bFGF)可提高AECs分泌的BDNF、NT3活性,叁者的协同作用具有级联放大效应。本研究将分子生物学技术与组织学技术相结合,根据AECs分泌多种细胞因子的特性,利用转基因技术将人bFGF(hbFGF)基因通过携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的逆转录病毒导入大鼠AECs中,改善移植后NSCs的微环境,与NSCs共移植治疗大鼠SCI。应用行为学方法与神经电生理方法检测损伤脊髓功能的恢复;应用组织学技术观察宿主神经元的存活与移植NSCs的分化以及轴突生长、突触形成等。结果表明,转hbFGF的AECs与NSCs共移植明显促进了SCI大鼠后肢功能的恢复:首先AECs与NSCs共同充填损伤后形成的组织空洞,充当细胞桥;其次AECs本身所分泌的NTFs如BDNF、NT-3促进了宿主神经元的存活与突触形成;更重要的是导入的外源基因bFGF增强了AECs的神经营养作用,明显促进了移植NSCs的分化存活,补充了新生神经元,并能促进其轴突生长,重建神经环路,促进损伤脊髓的功能恢复。
参考文献:
[1]. 神经干细胞的分离培养及其在老年神经退行性病中的作用研究[D]. 李学坤. 中国协和医科大学. 2003
[2]. 人参总皂苷对人胚神经干细胞增殖、诱导分化的研究及其在帕金森小鼠中的应用[D]. 李英博. 重庆医科大学. 2005
[3]. 转hbFGF羊膜上皮细胞与神经干细胞共移植治疗脊髓损伤的研究[D]. 孟晓婷. 吉林大学. 2007