Klebsiella sp. 2e对粗甘油不同杂质耐受性及转化1,3-丙二醇关键酶研究

Klebsiella sp. 2e对粗甘油不同杂质耐受性及转化1,3-丙二醇关键酶研究

论文摘要

本研究以一株筛选出的粗甘油耐受型菌株Klebsiella sp.2e为研究对象,通过对细菌各种生理生化指标进行检测,及对KCl、K2SO4、甲醇、油酸四种杂质发酵液与粗甘油和纯甘油发酵液中菌株生长量、甘油消耗量和1,3-丙二醇的产率检测,确定不同杂质及其不同浓度参数对菌株生长发酵合成1,3-丙二醇的影响,了解反应发生过程与趋势;同时,结合甘油转化过程中三种关键酶:即甘油脱氢酶(GDH)、甘油脱水酶(GDHt)及1,3-丙二醇氧化酶(PDOR)的活性分析,探究不同杂质对酶活性的影响,进一步探究Klebsiella sp.2e对粗甘油的耐受性特点。结果表明:1.用不同分离筛选培养基培养测定Klebsiella sp.2e菌株生长量时,低浓度的KCl杂质对菌株生长发酵没有影响,KC1与培养基质液比高于5%时会对菌株生长有抑制作用,可见过量的无机盐离子会影响细菌外的渗透压从而影响其生长繁殖;低于10 g/L的甲醇溶液对菌株生长没有影响,与在纯甘油发酵液中生长情况一致;而K2SO4、油酸即使是少量也会抑制菌株的生长,证明-SO4O42-与有机酸对Klebsiella sp.2e的生长影响较大,在发酵前可对粗甘油进行抽样检测,以预处理去除-SO42-与有机酸。2.在用不同的分离筛选培养基发酵培养Klebsiella sp.2e的过程中,发酵液中甘油消耗量与1,3-丙二醇生成量成正比,甘油转化效率与菌株生长量有关,浓度低于5%的KCl杂质能促进菌株发酵生产1,3-丙二醇,高于这个值则开始出现抑制作用;低于10g/L的甲醇杂质对菌株的发酵作用没有影响,1,3-丙二醇产率接近纯甘油发酵产率;在纯甘油培养基中甘油转化1,3-PDO转化率高达46.4%,超过一般甘油转化菌株,而在粗甘油培养基中转化率在36 h后仅为36.8%,可见粗甘油中的一些杂质虽然可以促进菌株生长,但却抑制了甘油反应转化成1,3-丙二醇。3.在酶活性分析中,甘油脱氢酶(GDH)、甘油脱水酶(GDHt)及1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)在对数期活性较大,一般高于稳定期与衰退期,此时菌株活性最大,反应时碳源主要流向还原途径,使发酵前期能保持较高的3-羟基丙醛浓度,较少的乙酸等反应副产物,促进甘油转化生成1,3-丙二醇。但在发酵后期会生成一些性质相似的中间产物的代谢酶,导致酶活性测定值会增高,而实际上三种甘油转化酶的酶活性降低。4.利用Klebsiella sp.2e直接发酵粗甘油废料,该废料是以光皮树油为原料生产生物柴油时产生的副产物,36h后1,3-丙二醇产率接近于添加同等质量纯甘油的发酵液,菌株Klebsiella sp.2e对粗甘油有良好的耐受性。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 缩略词表
  • 第1章 绪论
  •   1.1 1,3-丙二醇与PTT
  •     1.1.1 1,3-丙二醇概况
  •     1.1.2 PTT的发展前景
  •   1.2 1,3-丙二醇生产方法
  •     1.2.1 1,3-丙二醇化学合成工艺
  •     1.2.2 1,3-丙二醇生物法合成工艺
  •   1.3 甘油转化1,3-丙二醇研究
  •     1.3.1 甘油转化1,3-丙二醇的优势菌种
  •     1.3.2 克雷伯氏菌发酵生产1,3-丙二醇
  •     1.3.3 甘油转化1,3-丙二醇关键酶
  •     1.3.4 甘油转化1,3-丙二醇代谢分析
  •   1.4 微生物对粗甘油的耐受性研究现状
  •   1.5 关键基因的筛选与鉴定
  •   1.6 本研究目的与意义
  • 第2章 不同条件下Klebsiella sp.2e菌株生长情况
  •   2.1 实验材料与仪器
  •     2.1.1 材料与试剂
  •     2.1.2 实验仪器
  •   2.2 实验方法
  •     2.2.1 菌株培养
  •     2.2.2 Klebsiella sp. 2e发酵培养时间的确定
  •     2.2.3 测定Klebsiella sp. 2e在不同杂质培养下的生长曲线
  •   2.3 实验结果与讨论
  •     2.3.1 细菌在不同培养条件下生长情况分析
  •     2.3.2 Klebsiella sp. 2e在不同杂质培养条件下生长情况分析
  •   2.4 小结
  • 第3章 不同杂质条件培养下甘油消耗量及1,3-丙二醇生成量
  •   3.1 实验材料与仪器
  •     3.1.1 材料与试剂
  •     3.1.2 实验仪器
  •   3.2 实验方法
  •     3.2.1 菌株培养
  •     3.2.2 发酵液中甘油含量测定
  •     3.2.3 发酵液中1,3-丙二醇含量的测定
  •   3.3 结果与讨论
  •     3.3.1 不同杂质发酵液中甘油含量测定结果
  •     3.3.2 发酵液中1,3-丙二醇含量的测定曲线
  •   3.4 小结
  • 第4章 探究不同杂质对Klebsiella sp. 2e酶活性的影响
  •   4.1 实验材料与仪器
  •     4.1.1 材料与试剂
  •     4.1.2 实验仪器
  •   4.2 实验方法
  •     4.2.1 菌株培养
  •     4.2.2 蛋白质含量标准曲线测定
  •     4.2.3 酶液提取
  •     4.2.4 酶活性测定
  •   4.3 实验结果与讨论
  •     4.3.1 BCA蛋白质标准曲线
  •     4.3.2 酶活力测定曲线
  •     4.3.3 1,3-丙二醇氧化还原酶活性测定
  •   4.4 小结
  • 第5章 结论与展望
  •   5.1 结论
  •   5.2 创新点
  •   5.3 未来与展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间的主要学术成果
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 章旖旎

    导师: 曾柏全,张良波

    关键词: 粗甘油,酶活性,丙二醇,耐受性

    来源: 中南林业科技大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

    专业: 生物学,一般化学工业

    单位: 中南林业科技大学

    分类号: TQ923

    总页数: 66

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