导读:本文包含了多表位论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:抗原,病毒,佐剂,猪瘟,口蹄疫,免疫,非洲。
多表位论文文献综述
郭晶,李重阳,孟庆玲,乔军,伍晔晖[1]（2019）在《非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究》一文中研究指出非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。(本文来源于《家畜生态学报》期刊2019年06期）
仝晓丹[2]（2019）在《牛传染性鼻气管炎病毒多表位嵌合蛋白表达及免疫原性评价》一文中研究指出牛传染性鼻气管炎是危害全球养牛业发展的一种急性传染病,病原为牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)。IBRV感染牛体后,主要引起严重的呼吸道疾病、母牛的流产及其他神经性系统疾病。潜伏感染的特性给该病的防治及净化造成了极大困难。目前主要通过疫苗接种来防控此病。IBRV疫苗主要有灭活疫苗、弱毒疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、基因缺失疫苗及活载体疫苗,但在一些方面仍存在诸多缺陷。因此,研发更有效的疫苗是防控IBR中最重要的问题。与传统的基因工程亚单位疫苗相比,多表位疫苗可克服MHC类分子的限制使其得到高效提呈,且能有效应对病原微生物的变异等,具有很好的应用前景。本研究首先将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD相关抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2以GGGGS或AAYAAY为接头进行串联连接,用DNASTAR Protean软件分析其抗原性以选择最佳连接组合,化学合成嵌合蛋白基因序列。构建pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白。纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂等体积乳化后经后腿肌肉注射免疫中国白兔,共免疫3次,每次间隔3周。间接ELISA方法检测血清中的抗体水平。结果显示pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒在大肠杆菌中均以包涵体形式大量表达,且以AAYAAY为接头连接的重组蛋白诱导的抗体水平显着高于以GGGGS为接头连接的重组蛋白(21天时P=0.0113;42和63天时P<0.0001)。以AAYAAY接头连接的P2-gB/gC/gD序列为基础,构建pET-28a-P2-gB/gC/gD-BoIL-6、pET-28a-P2-gD-BoIL-6和pET-28a-BoIL-6重组质粒。同时提取中国白兔脾脏中的RNA,扩增兔IL-6基因,构建pET-28a-P2-gB/gC/gD-RaIL-6重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中表达重组蛋白并纯化,进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果显示pET-28a-P2-gB/gC/gD-BoIL-6、pET-28a-P2-gD-BoIL-6、pET-28a-BoIL-6和pET-28a-P2-gB/gC/gD-RaIL-6质粒在E.coli BL21(DE3)中均以包涵体的形式表达,纯化后的产物能与抗His标签单抗发生特异性反应。将纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂乳化后免疫中国白兔,同时设置IBRV-BVDV二联灭活苗组和ISA206佐剂对照组。每隔3周免疫1次,共3次,在首免前及每次免疫后3周采血,分离血清,测定抗体水平、中和抗体效价及细胞因子IL-4和IFN-γ水平。3免后3周用IBRV鼻腔攻毒,在0、1、3、5及第7 d时采集鼻拭子并测定体温,建立实时定量方法检测鼻拭子中病毒的拷贝数。7 d后安乐死1只家兔,取肺脏和气管制作病理学组织切片并测定肺脏中病毒拷贝数。在攻毒后30 d,注射地塞米松(0.1 mg/kg),连续注射5 d,在0、1、3、5及第7 d时采集鼻拭子并测定体温,7 d后安乐死实验兔,取肺脏和气管制作病理切片,观察病理学变化,并测定鼻拭子和肺脏中病毒的拷贝数。在免疫后21 d、42d和63 d时,P2-gB/gC/gD-BoIL-6诱导产生的抗体水平显着高于其他重组蛋白组(P<0.05),而低于IBRV-BVDV二联灭活苗组(P<0.001)。在42 d和63 d时P2-gB/gC/gD-BoIL-6诱导的中和抗体效价显着高于其他重组蛋白组(P<0.05),与IBRV-BVDV二联灭活苗组无明显差异。与其他组相比,P2-gB/gC/gD-BoIL-6可有效诱导IL-4和IFN-γ的产生,表明其可同时诱导Th1和Th2型免疫应答。在1、3和5 d时均可在鼻拭子中检测到病毒,其中P2-gB/gC/gD-BoIL-6鼻拭子中的病毒拷贝数均低于其他重组蛋白组,攻毒后第1 d与P2-gB/gC/gD-RaIL-6组无显着差异,在第3 d和第5 d差异显着;但是与其他组在第1、3和5 d差异均显着(P<0.05),与IBRV-BVDV二联灭活苗组排毒滴度差异不显着。此外,在攻毒后7 d,P2-gB/gC/gD-BoIL-6免疫组,肺脏中的病毒拷贝数显着低于其他重组蛋白免疫组(P<0.05),但与IBRV-BVDV二联灭活苗组差异不显着。病理切片结果显示,P2-gB/gC/gD-BoIL-6组肺脏有少量炎性细胞浸润,气管未见明显病理变化,IBRV-BVDV二联灭活苗组肺脏和气管未见明显病理变化。注射地塞米松再激活IBRV后,实验组体温之间无明显差异;P2-gB/gC/gD-BoIL-6组鼻拭子中的病毒拷贝数显着低于其他重组蛋白组,但在第1 d和第5 d时,与P2-gB/gC/gD-RaIL-6组及IBRV-BVDV二联灭活苗组病毒拷贝数差异不显着。肺脏中病毒拷贝数均显着低于其他重组蛋白组(P<0.05)。病理切片结果显示,P2-gB/gC/gD-BoIL-6组肺脏有少量炎性细胞浸润,气管未见明显的病理变化;IBRV-BVDV二联灭活苗组肺脏可见淋巴组织增生,气管壁未见明显病理变化。实验表明,相比于柔性接头GGGGS,刚性接头AAYAAY更适合于牛传染性鼻气管炎病毒多表位序列的连接,以AAYAAY为接头连接的重组嵌合蛋白具有更好的免疫原性。同时,分子佐剂牛IL-6可有效提高牛传染性鼻气管炎病毒多表位嵌合蛋白的免疫原性,促进中和抗体的产生及提高免疫保护效果。通过本实验可以为高效IBRV基因工程亚单位疫苗的研发提供前期实验基础。(本文来源于《黑龙江八一农垦大学》期刊2019-06-01）
赖荣光[3]（2019）在《检定高压电能表的多表位误差计的设计》一文中研究指出本文介绍了一种多表位电能误差计的工作原理、软硬件设计、误差计算方法和实例,以标准表的脉冲输出作为多表位误差计的同源输入,扩展多表位检表。应用表明,该设计方案结构简单、准确度高,支持多个被检表的并行检定,提高生产效率,其精度满足高压电能表的整体检定要求。(本文来源于《电子技术与软件工程》期刊2019年10期）
雷垚[4]（2019）在《基于不同分子内佐剂的A型、O型口蹄疫病毒二价多表位免疫原的初步研究》一文中研究指出口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)感染猪、牛、羊等偶蹄动物引起的一种急性、热性和高传染性动物疫病,可造成严重的经济损失。目前口蹄疫灭活疫苗仍是预防和控制口蹄疫的主要手段,但是鉴于灭活疫苗在生产中存在的安全隐患,研制新型安全有效的口蹄疫亚单位疫苗刻不容缓。在FMD表位疫苗研究领域,如何将FMDV中和表位更加有效的呈递给免疫系统,从而更加高效的激发抵抗FMD感染的免疫应答,是目前表位疫苗研究的主要方向。本研究选取了叁种FMD多表位抗原的分子内佐剂,分别是:乙肝核心抗原(Hepatitis B core antigen,HBcAg),结核分枝杆菌热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)的羧基端肽结合区(mHSP70C)以及肝素结合血凝素蛋白(heparin-binding hemagglutinin adhesin,HBHA)。另外选取A型和O型FMDV代表性毒株VP1上的B细胞表位(VP1 134-161aa,200-213aa)或非结构蛋白3A上的T细胞表位(3A 21-35aa)的编码基因进行串联,并插入到截短型HBcAg的主要免疫原区(major immunogenic region,MIR)进行合成。在原核表达系统中获得不同的重组抗原rHBc/AO和rHBc/AOT,经过亲和层析纯化以及尿素梯度透析复性等程序后使其在体外高效自组装成携带有FMDV抗原表位的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。此外,笔者将A型和O型FMD二价多表位基因AO和HAO分别与mHSP70C以及HBHA的编码基因进行融合,以及HAO和HBHA单独构建至原核表达载体pET-28a,在原核系统中成功表达和纯化了重组蛋白AOHSP,HAO,HBHA以及HAO-HBHA。笔者将得到的rHBc/AO和rHBc/AOT VLPs以及融合抗原AO-HSP、HAO-HBHA等在小鼠模型中进行了免疫效果评价。rHBc/AO和rHBc/AOT VLPs均能刺激机体产生A型和O型FMDV特异性中和抗体;在细胞免疫应答方面,两者均能显着刺激机体产生Th1型细胞免疫应答,而灭活疫苗更倾向于刺激产生Th2型细胞免疫应答。与rHBc/AO VLPs相比,rHBc/AOT VLPs能够产生更高水平的Th2型细胞免疫应答。此外,HAO-HBHA免疫组的抗体水平以及脾淋巴细胞增殖水平明显高于HAO+HBHA混合免疫组,HAO以及HAO+206佐剂组。绵羊免疫结果显示,HAOHBHA免疫组能产生同灭活疫苗组同等的FMDV特异性抗体水平。由此可得出结论,在HBc分子MIR区插入多种血清型FMDV的抗原表位以提高该类VLPs疫苗广谱性的优势性;另外mHSP70C以及HBHA在增强FMDV表位免疫原性方面同样具有优势,特别是HBHA在提高FMDV特异性抗体水平以及细胞免疫应答方面有良好的应用前景。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
张富东[5]（2019）在《口蹄疫多表位靶向疫苗的构建及黏膜免疫效果》一文中研究指出口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)引起的急性、热性、高度接触性传染病,主要侵害猪、牛、羊等家畜和其它野生偶蹄动物。临床特征是在口腔黏膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱性疹。世界动物卫生组织(OIE)将FMD列为动物A类烈性传染病,严重危害畜牧业的健康发展以及相关产品的对外贸易,对国家的政治、经济具有深远的影响。黏膜作为机体与外界连通的门户,对于FMDV的侵入有很大的助力作用。微皱褶细胞(Microfold cell,简称M细胞)是黏膜免疫反应中摄取抗原的第一个细胞,是黏膜相关淋巴组织的初始效应位点。摄取抗原是诱导免疫反应最关键的一步。所以M细胞在病原微生物从呼吸道入侵和黏膜免疫呈递抗原中均发挥重要的作用。本研究成功构建了两株重组乳酸乳球菌,分别命名为NZ9000/pNZ8148-TB1和NZ9000/pNZ8148-TB1-Co1。利用乳酸乳球菌表达(NICE)系统表达目的蛋白TB1和TB1-Co1,研究重组乳酸乳球菌的免疫效果以及靶向M细胞的可行性,为口蹄疫新型疫苗的研发和口蹄疫的防治提供新途径。本研究的主要内容如下:1.TB1和TB1-Co1的合成及其生物信息学分析:根据乳酸乳球菌密码子的偏好性对多表位TB1和TB1-Co1的编码基因进行优化合成,连接到克隆载体pUC57上。通过生物信息学得到多表位TB1和TB1-Co1具有作为良好抗原的潜力,对进一步的研究打下理论基础。2.目的蛋白在乳酸乳球菌中的表达及鉴定:将目的基因片段TB1和TB1-Co1连接到表达载体pNZ8148上,得到重组质粒pNZ8148-TB1和pNZ8148-TB1-Co1,电转化到乳酸乳球菌NZ9000中,通过质粒提取、双酶切鉴定、测序分析筛选出阳性重组乳酸乳球菌,得到重组菌NZ9000/pNZ8148-TB1和NZ9000/pNZ8148-TB1-Co1。使用诱导剂nisin诱导目的蛋白表达,并对表达条件进行优化。Western blot检测可见目的条带,表明目的蛋白在乳酸乳球菌NZ9000中得到表达。3.重组乳酸乳球菌(NZ9000/pNZ8148-TB1和NZ9000/pNZ8148-TB1-Co1)黏膜免疫效果分析:用重组乳酸乳球菌经灌胃免疫小鼠,进行免疫原性分析,其中PBS作为空白对照,NZ9000/pNZ8148作为空载体对照,灭活苗作为阳性对照组。结果显示,实验组肠道黏液中sIgA水平明显高于阴性对照组和空载体对照组,但血清内特异性IgG抗体效价比较低;实验组小鼠淋巴细胞中CD4~+细胞和CD8~+细胞的比值高于阴性对照组;小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后增殖明显;细胞因子检测结果表明,与阴性对照组相比,实验组的IL-2、IL-4、IL-5、IL-10和IFN-γ的量都有不同程度的增高,以上结果表明,重组乳酸乳球菌作为口服活载体疫苗可以诱导小鼠产生FMDV特异性体液免疫应答和细胞免疫应答。4.靶向实验:用诱导的重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8148-TB1-Co1和NZ9000/pNZ8148-TB1接种小鼠,获取小鼠小肠组织做成石蜡切片,经荧光染色后用激光共聚焦显微镜观察。结果表明,前者的红色荧光和绿色荧光的结合较多。这表明Co1对M细胞具有靶向作用,可增强机体的免疫应答。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2019-05-01）
韩海安,程昱舒[6]（2019）在《多表位直流电能表自动检定装置的研制》一文中研究指出为满足日益增长的分布式直流电源、直流负荷及直流电能检定的需求,本文研制了一种多表位直流电能表自动检定装置。文中讲述了检定原理、硬件设计和软件设计,并对检定装置进行了重复性试验、稳定性试验和测量不确定度评定。试验结果表明,该检定装置量值稳定、精度高,检定结果符合国家相关检定规程要求,具有广泛的应用前景。(本文来源于《电气技术》期刊2019年02期）
王月鹏[7]（2019）在《HIV-1多表位疫苗MEP1的表位保守性及佐剂比较研究》一文中研究指出艾滋病一直是困扰全球人类生命安全的重大传染性疾病。虽然高效抗逆转录病毒疗法(HARRT)极大程度上控制了HIV感染者的疾病进程,但依然无法阻断艾滋病毒的传播和感染,HIV治疗型疫苗可以有效降低艾滋病的传播速率和减缓患者的疾病进程。目前为止,世界范围内依然没有针对HIV的有效疫苗,为了实现中国HIV-1疫苗从0到1的跨步,本课题组针对中国人群优势MHC限制性和中国HIV-1流行趋势研发的多表位蛋白疫苗MEP1,包含9个CTL表位和1个Th表位富集区,并获得了国家专利授权。前期研究中表明MEP1蛋白在BALB/c小鼠模型中具有较好免疫原性,并且其诱导的免疫反应和中国人群的MHC限制性显着相关。如今中国HIV-1流行病毒株出现新的变化趋势,中国HIV流行株的表位保守性可能出现变化,需要分析这些变化对MEP1诱导的免疫反应的影响,同时探索不同佐剂于MEP1蛋白联合免疫诱导的免疫反应差异,优化MEP1的疫苗方案,本课题针对这两个问题开展了研究。1、中国HIV-1流行株变化趋势对多表位蛋白MEP1免疫作用的影响(1)MEP1所包含的CTL表位的保守性分析及其MHC限制性评价。以2014-2017年中国HIV-1流行株的数据为研究对象,通过数据库分析,分析MEP1所包含的9个CTL表位的保守性变化情况,并分析每个表位在不同HIV-1病毒亚型中的保守性差异,利用在线软件分析突变表位的MHC限制性和TAP亲和力。MEP1所涉及的9个CTL表位的保守性较好,氨基酸残基的突变多为同型氨基酸突变,不影响表位的MHC限制性评价和TAP亲和,保守性基本不受2014至2017年的年份变化的影响。P2、P3、P4、P6、P7、P8存在亚型偏倚型突变,表现为在不同HIV病毒亚型内表位的氨基酸突变呈现不同趋势,氨基酸残基的突变以同型氨基酸突变为主,非同型氨基酸残基突变几率极小,9个表位均具有较好的在保守性。(2)转基因HLA-A11/DR1小鼠体内免疫研究验证突位点对HLA-A11限制性CTL表位的影响。将MEP1蛋白免疫人转基因HLA-A11/DR1小鼠,以不同突变位点的表位体外刺激免疫小鼠脾细胞,通过比较不同表位的反应强度,观察突变位点对A11限制性表位的影响模型。结果表明不同氨基酸突变的A11限制性表位仍可产生特异性细胞免疫应答,说明MEP1依然适用于如今的中国HIV-1流行株的变化情况,多表位蛋白MEP1具有一定应对HIV-1病毒表位突变的能力。2、不同佐剂联合多表位蛋白MEP1免疫BALB/c小鼠的比较研究(1)多表位蛋白MEP1联合不同佐剂的免疫应答特征评价。将表达纯化的MEP1蛋白,采取前期研究确定的叁次免疫策略,进行BALB/c小鼠体内免疫研究。通过体液免疫应答和细胞免疫应答检测比较MF59和铝佐剂两种候选疫苗佐剂对MEP1诱导的免疫反应的差异。MF59和铝佐剂均能增强MEP1诱导的体液和细胞免疫应答,其中MF59促进MEP1诱导Th1/Th2均衡的细胞免疫应答,铝佐剂促进MEP1诱导Th1偏倚型的细胞免疫应答。(2)多表位蛋白MEP1联合不同佐剂在早期免疫中的免疫应答特征评价。过体液免疫应答和细胞免疫应答检测比较MF59和铝佐剂四种候选疫苗佐剂对MEP1诱导的免疫反应的差异。MF59和铝佐剂可促进MEP1诱导更强的免疫应答,铝佐剂能促进MEP1蛋白在早期免疫中更快产生较高水平的免疫应答,确定了以铝佐剂与MEP1蛋白的免疫策略。3、结论HIV-1多表位蛋白疫苗MEP1具有良好的免疫原性,其所涉及的9个CTL表位均具有较好的保守性,P2、P3、P4、P6、P7和P8存在亚型偏倚型突变,绝大多数突变不影响表位的MHC限制性评价,MEP1依然适用于如今的中国HIV-1流行株的变化情况。铝佐剂更适合作为MEP1免疫策略的选择,铝佐剂可显着增强MEP1诱导的免疫应答,特别在早期免疫应答中,铝佐剂可使MEP1即可诱导出较强的体液和细胞免疫。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2019-02-01）
高健,赵鼎[8]（2019）在《结核分枝杆菌多表位诊断抗原的制备》一文中研究指出将结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)多个B细胞预测表位串联表达(命名为B102),并初步评价其作为诊断抗原的血清学诊断价值。将MtbPstS1、ESAT6、CFP10、Ag85B、Ag85A及PPE54等6个蛋白的11个B细胞预测表位串联,加入合适的连接臂后全基因合成;将多表位片段插入带有TRX标签的表达质粒中,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并利用Ni~(2+)-Chelating亲和层析和DEAE阴离子交换层析纯化目的蛋白;利用Western blotting (WB)技术对目的蛋白抗原性进行鉴定,并建立Mtb抗体检测竞争法ELISA技术,初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。目的蛋白以包涵体形式存在,其表达量约占菌体总蛋白的31.25%,经纯化及复性后蛋白B102可溶性存在,浓度为3.124mg/mL,纯度为96.71%;WB实验表明目的蛋白能与Mtb阳性血清相应抗体发生反应。对60份Mtb阳性血清及60份Mtb阴性血清进行检测得出其灵敏度为90.00%,特异性为93.33%,阳性预测值为93.10%,阴性预测值为90.32%,符合率为91.67%,McNemer检验的结果提示与"金标准"诊断结果无差异,Kappa=0.833,提示两种方法诊断结果一致性优异。原核表达与层析纯化可以获取抗原性优异的Mtb多表位诊断抗原,作为诊断抗原可以应用于Mtb的血清学检测中。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年04期）
郭晶,孟庆玲,乔军,李重阳,伍晔晖[9]（2018）在《ASFV多表位融合基因MeP72基因的克隆、表达及其间接ELISA检测方法建立》一文中研究指出[目的]建立以重组多表位融合蛋白re MeP72为包被抗原的ASFV间接ELISA检测方法。[方法]预测分析ASFV结构蛋白P72的优势抗原表位,串连优势抗原表位并优化稀有密码子以合成多表位融合抗原基因MeP72。在毕赤酵母表达系统中诱导表达,分析重组融合蛋白的反应原性。用re MeP72做包被抗原,建立ASFV的ELISA间接检测方法。[结果]成功构建了402 bp的MeP72基因片段。SDS-PAGE和Western Blotting分析该蛋白在14 k Da有条带,证明其反应原性良好。经ELISA反应条件优化,建立的ELISA方法与猪的其他病原的阳性血清不发生交叉反应,且可检测到稀释倍数为1∶512 ASFV阳性血清,证明其特异性和敏感性良好。[结论]建立了抗原包被浓度为15μg/mL,一抗、二抗稀释倍数分别为1∶200、1∶5 000倍的特异性和敏感性良好的re MeP72-ELISA检测方法。(本文来源于《生物技术》期刊2018年06期）
戚应杰,石玉如,刘婷,岳莉,赵长城[10]（2018）在《抗结核分枝杆菌多表位融合抗原IgG抗体检测最佳临界值的建立和初步应用》一文中研究指出目的建立抗结核分枝杆菌多表位融合抗原IgG抗体(MTB-Ab)检测的最佳临界值,评价该项目对肺结核的诊断性能。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测62例活动性肺结核患者、58例非活动性肺结核患者和168名体检健康者(正常对照组)血清MTB-Ab,采用受试者工作特征(ROC)曲线确定最佳临界值并将其设为Cut-off值指数(COI),分别评价试剂盒推荐的Cut-off值和最佳COI值对肺结核和活动性肺结核的诊断性能。结果以正常对照组为对照,MTB-Ab诊断肺结核的最佳COI值(COI_1)为0.90,此时敏感性为92.5%,显着高于试剂盒Cut-off值(0.18)的敏感性(86.7%)(P<0.05)。试剂盒Cut-off值与COI_1诊断肺结核的特异性、约登指数、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测值和阴性预测值差异均无统计学意义(P>0.05)。以非活动性肺结核组为对照,MTB-Ab诊断活动性肺结核的最佳COI值(COI_2)为3.65,其敏感性、特异性、约登指数、阳性似然比、阳性预测值、阴性预测值均低于COI_1(P<0.05),而阴性似然比高于COI_1(P<0.05)。结论以正常对照者为对照得出的最佳COI值(COI_1)作为判断限,可以提高MTB-Ab诊断肺结核的敏感性。以非活动性肺结核患者为对照得出的最佳COI值(COI_2)作为判断限,MTB-Ab鉴别诊断活动性与非活动性肺结核的性能均明显下降。(本文来源于《检验医学》期刊2018年10期）
多表位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
牛传染性鼻气管炎是危害全球养牛业发展的一种急性传染病,病原为牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)。IBRV感染牛体后,主要引起严重的呼吸道疾病、母牛的流产及其他神经性系统疾病。潜伏感染的特性给该病的防治及净化造成了极大困难。目前主要通过疫苗接种来防控此病。IBRV疫苗主要有灭活疫苗、弱毒疫苗、DNA疫苗、亚单位疫苗、基因缺失疫苗及活载体疫苗,但在一些方面仍存在诸多缺陷。因此,研发更有效的疫苗是防控IBR中最重要的问题。与传统的基因工程亚单位疫苗相比,多表位疫苗可克服MHC类分子的限制使其得到高效提呈,且能有效应对病原微生物的变异等,具有很好的应用前景。本研究首先将已鉴定出的IBRV的gB、gC和gD相关抗原表位及破伤风毒素通用T细胞表位P2以GGGGS或AAYAAY为接头进行串联连接,用DNASTAR Protean软件分析其抗原性以选择最佳连接组合,化学合成嵌合蛋白基因序列。构建pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒,转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白。纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂等体积乳化后经后腿肌肉注射免疫中国白兔,共免疫3次,每次间隔3周。间接ELISA方法检测血清中的抗体水平。结果显示pET-28a-P2-gB/gC/gD重组质粒在大肠杆菌中均以包涵体形式大量表达,且以AAYAAY为接头连接的重组蛋白诱导的抗体水平显着高于以GGGGS为接头连接的重组蛋白(21天时P=0.0113;42和63天时P<0.0001)。以AAYAAY接头连接的P2-gB/gC/gD序列为基础,构建pET-28a-P2-gB/gC/gD-BoIL-6、pET-28a-P2-gD-BoIL-6和pET-28a-BoIL-6重组质粒。同时提取中国白兔脾脏中的RNA,扩增兔IL-6基因,构建pET-28a-P2-gB/gC/gD-RaIL-6重组质粒。将鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中表达重组蛋白并纯化,进行SDS-PAGE和Western blot检测。结果显示pET-28a-P2-gB/gC/gD-BoIL-6、pET-28a-P2-gD-BoIL-6、pET-28a-BoIL-6和pET-28a-P2-gB/gC/gD-RaIL-6质粒在E.coli BL21(DE3)中均以包涵体的形式表达,纯化后的产物能与抗His标签单抗发生特异性反应。将纯化后的重组蛋白与ISA206佐剂乳化后免疫中国白兔,同时设置IBRV-BVDV二联灭活苗组和ISA206佐剂对照组。每隔3周免疫1次,共3次,在首免前及每次免疫后3周采血,分离血清,测定抗体水平、中和抗体效价及细胞因子IL-4和IFN-γ水平。3免后3周用IBRV鼻腔攻毒,在0、1、3、5及第7 d时采集鼻拭子并测定体温,建立实时定量方法检测鼻拭子中病毒的拷贝数。7 d后安乐死1只家兔,取肺脏和气管制作病理学组织切片并测定肺脏中病毒拷贝数。在攻毒后30 d,注射地塞米松(0.1 mg/kg),连续注射5 d,在0、1、3、5及第7 d时采集鼻拭子并测定体温,7 d后安乐死实验兔,取肺脏和气管制作病理切片,观察病理学变化,并测定鼻拭子和肺脏中病毒的拷贝数。在免疫后21 d、42d和63 d时,P2-gB/gC/gD-BoIL-6诱导产生的抗体水平显着高于其他重组蛋白组(P<0.05),而低于IBRV-BVDV二联灭活苗组(P<0.001)。在42 d和63 d时P2-gB/gC/gD-BoIL-6诱导的中和抗体效价显着高于其他重组蛋白组(P<0.05),与IBRV-BVDV二联灭活苗组无明显差异。与其他组相比,P2-gB/gC/gD-BoIL-6可有效诱导IL-4和IFN-γ的产生,表明其可同时诱导Th1和Th2型免疫应答。在1、3和5 d时均可在鼻拭子中检测到病毒,其中P2-gB/gC/gD-BoIL-6鼻拭子中的病毒拷贝数均低于其他重组蛋白组,攻毒后第1 d与P2-gB/gC/gD-RaIL-6组无显着差异,在第3 d和第5 d差异显着;但是与其他组在第1、3和5 d差异均显着(P<0.05),与IBRV-BVDV二联灭活苗组排毒滴度差异不显着。此外,在攻毒后7 d,P2-gB/gC/gD-BoIL-6免疫组,肺脏中的病毒拷贝数显着低于其他重组蛋白免疫组(P<0.05),但与IBRV-BVDV二联灭活苗组差异不显着。病理切片结果显示,P2-gB/gC/gD-BoIL-6组肺脏有少量炎性细胞浸润,气管未见明显病理变化,IBRV-BVDV二联灭活苗组肺脏和气管未见明显病理变化。注射地塞米松再激活IBRV后,实验组体温之间无明显差异;P2-gB/gC/gD-BoIL-6组鼻拭子中的病毒拷贝数显着低于其他重组蛋白组,但在第1 d和第5 d时,与P2-gB/gC/gD-RaIL-6组及IBRV-BVDV二联灭活苗组病毒拷贝数差异不显着。肺脏中病毒拷贝数均显着低于其他重组蛋白组(P<0.05)。病理切片结果显示,P2-gB/gC/gD-BoIL-6组肺脏有少量炎性细胞浸润,气管未见明显的病理变化;IBRV-BVDV二联灭活苗组肺脏可见淋巴组织增生,气管壁未见明显病理变化。实验表明,相比于柔性接头GGGGS,刚性接头AAYAAY更适合于牛传染性鼻气管炎病毒多表位序列的连接,以AAYAAY为接头连接的重组嵌合蛋白具有更好的免疫原性。同时,分子佐剂牛IL-6可有效提高牛传染性鼻气管炎病毒多表位嵌合蛋白的免疫原性,促进中和抗体的产生及提高免疫保护效果。通过本实验可以为高效IBRV基因工程亚单位疫苗的研发提供前期实验基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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