miRNA-34a基因敲除DBA1/J小鼠的建立

论文摘要

目的:利用CRISPR/Cas9技术,构建全基因组微小RNA-34a（microRNA-34a,miR-34a）基因敲除DBA1/J小鼠,并进行繁殖、鉴定。方法:根据CRISPR/Cas9原理,构建出miR-34a-/+DBA1/J鼠为F0代小鼠;将其与DBA1/J野生型小鼠进行杂交,通过PCR鉴定筛选出基因型为miR-34a-/+的F1小鼠;筛选miR-34a-/-的F2代小鼠,分析其生长特性、繁殖能力;通过流式细胞术检测小鼠体内免疫器官和外周血中T、B淋巴细胞比例。结果:获得2只F0代小鼠,4只F1代小鼠,5只F2代小鼠;与DBA1/J小鼠比较,miR-34a-/-DBA1/J小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群比例没有显著变化（P> 0. 05）,但B淋巴细胞比例明显增加（P <0. 05）;未发现miR-34a-/-DBA1/J小鼠的体重、繁殖能力有明显的改变（P> 0. 05）。结论:通过CRISPR/Cas9技术成功敲除miR-34a基因并繁殖获得目的小鼠。

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 miR-34a基因敲除DBA1/J小鼠的构建

1.2.1 CRISPR/Cas9靶向位点的设计及Cas9 mR-NA和sgRNA的制备

1.2.2 sgRNA和Cas9 mRNA显微注射入小鼠受精卵

1.2.3 miR-34a基因敲除小鼠的饲养、繁殖

1.2.4 miR-34a基因敲除小鼠鉴定

1.2.5 miR-34a基因敲除小鼠基因测序鉴定

1.2.6 流式细胞术分析miR-34a基因敲除鼠体内T、B淋巴细胞比例

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 构建的F0代小鼠鉴定结果

2.2 F1代小鼠鉴定与繁育情况

2.3 F2代小鼠鉴定与繁育情况

2.4 F2代小鼠测序、miR-34a表达与繁育情况

2.5 miR-34a基因敲除鼠T、B淋巴细胞比例

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 邱莎丽,刘雪,汪竹涛,王蓉,晁天柱,王晶哲,潘子辉,梁银明,王荟,刘霞,邵启祥

关键词: 基因敲除,繁殖,鉴定

来源: 江苏大学学报(医学版) 2019年06期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 基础医学

单位: 江苏大学医学院,新乡医学院免疫遗传工程实验室

基金: 国家自然科学基金资助项目(31400773),江苏省大学生创新创业训练计划项目(201910299156Y,201710299063Y,201810299089Y)

分类号: R-332

DOI: 10.13312/j.issn.1671-7783.y190129

页码: 461-466

总页数: 6

文件大小: 3117K

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