GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用

论文摘要

旨在利用GST pull-down技术验证新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）基质（matrix,M）蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDV ZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDV M基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a（+）构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21（DE3）后进行IPTG诱导表达,SDSPAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GST pull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GST pull-down技术证实了NDV M蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDV M蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 胡焱,段志强,嵇辛勤,赵佳福,邓珊珊,李世静,熊建民

关键词: 新城疫病毒,基质蛋白,蛋白,蛋白相互作用

来源: 畜牧兽医学报 2019年01期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 贵州大学动物科学学院,贵阳市花溪区农业局

基金: 国家自然科学基金(31502074,31760732),贵州省科技计划项目(黔科合平台人才[2017]5788号),贵州省农业攻关项目(黔科合支撑[2016]2588号),贵州省科学技术基金(黔科合J字[2015]2054号)

分类号: S852.65

页码: 126-133

总页数: 8

文件大小: 942K

下载量: 324

相关论文文献

• [1].2014—2018年我国5株基因Ⅶ型新城疫病毒的基因组特性[J]. 中国动物检疫 2020(05)
• [2].强、弱毒力新城疫病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立[J]. 中国兽医学报 2017(01)
• [3].新城疫病毒在消化道肿瘤中的研究进展[J]. 现代肿瘤医学 2015(12)
• [4].鸡新城疫并发大肠杆菌病的防治[J]. 农业知识 2017(06)
• [5].重组新城疫病毒对肺癌荷瘤鼠的治疗效果研究[J]. 东北农业大学学报 2018(11)
• [6].重组新城疫病毒疫苗研制现状[J]. 生物技术通讯 2019(02)
• [7].1株鸽Ⅵ型新城疫病毒的分离与鉴定[J]. 养禽与禽病防治 2018(06)
• [8].影响新城疫病毒疫苗效果的因素分析[J]. 中国畜牧兽医文摘 2018(04)
• [9].鸡新城疫病毒的分离和鉴定[J]. 甘肃畜牧兽医 2016(21)
• [10].一株新疆野鸟源新城疫病毒的分离鉴定、F基因克隆及遗传进化分析[J]. 中国畜牧兽医 2017(09)
• [11].鹅源新城疫病毒云南流行株免疫交叉保护试验[J]. 中兽医医药杂志 2013(01)
• [12].鹅源新城疫病毒油乳剂灭活苗的研制[J]. 中国动物检疫 2013(05)
• [13].简述新城疫病毒的实验室检测方法[J]. 兽医导刊 2013(10)
• [14].新城疫病毒在全球的变异研究[J]. 兽医导刊 2012(05)
• [15].1株蛋鸡典型新城疫病毒的分离鉴定[J]. 养殖与饲料 2011(04)
• [16].新城疫病毒分子生物学研究进展[J]. 中国畜禽种业 2009(11)
• [17].基因10型Ⅰ类新城疫病毒的生物学与基因组学特征[J]. 病毒学报 2018(02)
• [18].科技[J]. 中国畜牧业 2017(04)
• [19].鸭新城疫病毒M基因的原核表达与多抗制备[J]. 河南农业科学 2016(01)
• [20].临沂地区商品肉鸡新城疫病毒的分离鉴定及流行性调查[J]. 黑龙江畜牧兽医 2016(06)
• [21].江西遂川地区禽流感和新城疫病毒的监测研究[J]. 安徽农业科学 2015(27)
• [22].新城疫病毒非编码序列的遗传演化趋势[J]. 微生物学报 2014(09)
• [23].鹅源新城疫病毒的分离鉴定及其致病性[J]. 中国兽医学报 2013(07)
• [24].鹅源新城疫病毒云南流行株动物回归试验[J]. 中兽医医药杂志 2012(06)
• [25].影响新城疫病毒抗原性和分子变异的因素分析[J]. 中国家禽 2010(22)
• [26].中国部分地区2008年I类新城疫病毒F基因遗传变异分析[J]. 病毒学报 2009(05)
• [27].鹅源新城疫病毒F基因的原核表达及间接ELISA诊断方法的建立[J]. 中国兽医学报 2008(12)
• [28].新城疫病毒抗肿瘤研究进展[J]. 生物工程学报 2018(09)
• [29].18株中国新城疫病毒F基因变异特性分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2013(03)
• [30].鸭在新城疫病毒传播和流行中的作用[J]. 中国家禽 2011(17)

标签：新城疫病毒论文;  基质蛋白论文;  蛋白论文;  蛋白相互作用论文;