导读:本文包含了重组酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:弧菌,核酸,荧光,宏基,基因,吸虫,病毒。
重组酶论文文献综述
葛以跃,苏璇,张倩,陈银,赵康辰[1]（2019）在《CRISPR-Cas13a结合重组酶介导的扩增快速检测副溶血性弧菌方法的建立》一文中研究指出目的将重组酶介导的扩增(RAA)技术与成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(CRISPR-Cas13a)检测系统相结合,建立一种快速、灵敏、特异的副溶血性弧菌检测方法(RAA-Cas13a)。方法样本DNA经RAA扩增后,产物采用CRISPR-Cas13a检测系统进行检测,比较CRISPR-Cas13a与琼脂糖凝胶电泳对RAA产物的检测敏感性。对方法进行灵敏度与特异度测试,通过临床样本检测比较建立的方法与real-time PCR法的一致性。结果CRISPR-Cas13a对RAA产物的检测敏感性高于琼脂糖凝胶电泳法;建立的RAA-Cas13a方法检测副溶血性弧菌的灵敏度为10拷贝DNA分子/反应,与其他病原体之间无交叉反应,与real-time PCR对临床样本的检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05),二者的检测一致性较高(kappa=0.934)。结论建立的RAA-Cas13a方法具有快速简单、灵敏特异等优点,为副溶血性弧菌的快速检测提供了新的工具。(本文来源于《现代预防医学》期刊2019年20期）
庄濠宇,李伟,李窕妍,张峥嵘,温尔英[2]（2019）在《利用添加扩增内标的重组酶聚合酶法检测霍乱弧菌》一文中研究指出本文根据霍乱弧菌的ompW基因的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,构建添加β-action基因为扩增内标的霍乱弧菌RPA-IAC检测方法。从扩增中可得到280 bp的目标基因片段和337 bp的扩增内标片段,该方法特异性良好,检测限与普通PCR一致,灵敏度均可达到0.1 ng/μL。该方法应用测试效果与传统培养方法相当,恒温37℃,40 min即可完成反应,检测效率高,适用于基层及现场检测。(本文来源于《检验检疫学刊》期刊2019年05期）
张强,丁昕,吴小珉,刘燕红,刘剑峰[3]（2019）在《重组酶介导的华支睾吸虫特异性核酸等温扩增方法的建立及初步评价》一文中研究指出目的建立一种可用于华支睾吸虫检测的重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA)。方法以华支睾吸虫18S r RNA基因序列作为靶序列,设计、合成、筛选特异性引物和探针,建立快速检测华支睾吸虫的荧光RAA检测方法。分别以含不同拷贝数DNA片段的重组质粒和不同浓度华支睾吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测敏感性;分别以似蚓蛔线虫、细粒棘球绦虫、日本血吸虫、十二指肠钩虫、曼氏血吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测特异性;通过抽提含华支睾吸虫虫卵的粪便及含囊蚴的淡水鱼肉样本DNA并进行荧光RAA扩增,初步评价其检测现场样本的能力。结果成功建立了华支睾吸虫检测荧光RAA法,其可在39℃20 min内实现对华支睾吸虫DNA的特异性扩增。以含不同拷贝数DNA片段的重组质粒为模板,该方法最低检出限为10拷贝/μL;以不同浓度华支睾吸虫基因组DNA为模板,该方法最低检出限为3 pg/μL;以似蚓蛔线虫、细粒棘球绦虫、日本血吸虫、十二指肠钩蚴及曼氏血吸虫基因组DNA为模板,检测结果均为阴性。该方法可成功检出感染华支睾吸虫的人体、大鼠粪便样本以及麦穗鱼样本,具备较好的现场样本检测能力。结论成功建立了一种简便、快速、敏感、特异的可用于华支睾吸虫检测的RAA法。(本文来源于《中国血吸虫病防治杂志》期刊2019年05期）
梁君妮,尹伟力,谢爽,刘宁,段效辉[4]（2019）在《重组酶聚合酶扩增技术快速检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立》一文中研究指出为建立鲤春病毒血症病毒(SVCV)的快速检测方法,本研究根据SVCV的G基因保守序列设计特异性引物,通过条件优化初步建立了基于重组酶聚合酶扩增技术(RPA)的SVCV检测方法。该RPA方法最优扩增温度为30℃,恒温反应20 min内即可完成。特异性试验结果显示,该方法与其它常见鱼类感染病毒无交叉反应;敏感性试验结果显示,该方法对SVCV质粒标准品的最低检出限为89.2拷贝/μL,高于传统的RT-PCR方法;利用已建立的RPA方法和RT-PCR方法对市场购买的80份临床样品进行检测,结果显示,RPA方法与RT-PCR方法检测结果一致,且RPA方法能够有效检出RT-PCR方法的弱阳性样品,表明RPA方法可以用于临床检测。本研究建立的检测SVCV的RPA方法具有快速、简便、特异性强、灵敏度高的特点,适合基层实验室及现地检测。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年10期）
熊科,崔晓亭,王小艺,赵峙尧,柳佳芸[5]（2019）在《基于宏基因策略的新颖木聚糖酶基因cbxynA克隆及其重组酶酶学性质》一文中研究指出研究构建了库容量约为1.3×104个克隆子且外源片段的总长为30 Mb的土壤宏基因组文库。基于功能策略,从文库中筛选到分解木聚糖底物的阳性克隆子。该克隆经序列分析发现一个822 bp的潜在的编码木聚糖酶基因(cbxynA)的开放阅读框,其编码的氨基酸序列与来自古细菌属编码的木聚糖酶的相似度最高仅为45%,说明该序列为一条未知的新序列。cbxynA在大肠杆菌中的重组表达产物的分子质量为29 ku,与预测结果一致。对其原核表达条件进行优化,结果表明:质粒在培养5 h后加入0.7 mmol/L IPTG,23℃下诱导25 h后表达,木聚糖酶活力为52 U/mL,较初始值提高4.3倍。而重组酶(CBXYNA)最适pH和最适温度分别为5.2和55℃。金属离子Na+、K+、Li+、Ca2+能提高该酶的酶活,而另外一些金属离子如Mg2+、Mn2+、Zn2+、Fe3+、Al3+、Cu2+能抑制其活性。该酶以水溶性玉米芯木聚糖、燕麦木聚糖、水不溶性木聚糖为底物时,其相对酶活力分别为162%,139%,74%。(本文来源于《中国食品学报》期刊2019年09期）
倪碧娴,吴小珉,刘燕红,徐祥珍,应清界[6]（2019）在《重组酶介导的隐孢子虫属特异性等温核酸扩增方法的建立及评价》一文中研究指出目的建立一种可用于隐孢子虫检测的重组酶介导的等温核酸扩增(RAA)方法,并对其检测敏感性和特异性进行评价。方法以隐孢子虫属特异性18S rRNA核酸序列作为检测靶标,采用Amplfix软件设计、合成引物及荧光检测探针,构建并优化RAA荧光反应体系;分别以不同拷贝数的含18S rRNA靶序列的重组质粒、不同浓度隐孢子虫卵囊基因组DNA及不同数量隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行RAA荧光法检测,以评价其敏感性;分别以隐孢子虫卵囊、蓝氏贾第鞭毛虫包囊、日本血吸虫虫卵、似蚓蛔线虫虫卵、华支睾吸虫虫卵、沙门氏菌、志贺氏菌基因组DNA为模板进行RAA荧光法检测,以评价其特异性。结果成功建立了隐孢子虫检测RAA法,该方法可在39℃、20 min内得到隐孢子虫属18S rRNA基因片段的有效扩增。以不同拷贝数的含18S rRNA靶序列的重组质粒、不同浓度隐孢子虫卵囊基因组DNA及不同数量隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,该方法最低检出限分别为102拷贝/μL、1 pg/μL和1个/50μL;以蓝氏贾第鞭毛虫包囊、日本血吸虫虫卵、似蚓蛔线虫虫卵、华支睾吸虫虫卵、沙门氏菌、志贺氏菌基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。结论成功建立了一种可用于检测隐孢子虫卵囊DNA的RAA法,该方法操作简便、反应快速,敏感性和特异性均较好。(本文来源于《中国血吸虫病防治杂志》期刊2019年04期）
苗丽,张秀平,王建昌,王永亮,程奇[7]（2019）在《肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用》一文中研究指出为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确性和适用性进行分析。结果表明,该方法可以快速实现对高山鸡肉、乌鸡肉、芦花鸡肉、白羽鸡肉和野鸡肉基因组DNA的特异性扩增,而对猪肉、牛肉、羊肉等的DNA均没有扩增,可稳定检出的鸡源性成分最低质量分数为0.1%。在9份标识有鸡肉成分的市售样品中,7份检出鸡源性成分,有2份样品的鸡源性成分检测结果为阴性。本研究建立的实时荧光RAA方法操作简单,反应迅速,特异性强,灵敏度高,为肉制品中鸡源性成分的检测提供了技术保障。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2019年04期）
徐超,董新吉,王超群,张巨洲,张子宏[8]（2019）在《基于重组酶介导扩增技术诊断鸭瘟方法的建立》一文中研究指出以具有种属特异性的鸭瘟病毒gC基因为靶基因,设计引物和荧光标记探针,使用重组酶介导扩增方法(Recombinase aid amplification assay,RAA),39℃恒温扩增,建立了检测鸭瘟病毒的普通和荧光RAA方法。该方法具有良好特异性,仅对鸭瘟病毒检测结果为阳性,而与番鸭细小病毒、小鹅瘟病毒、禽传染性喉气管炎病毒、马立克氏病毒、鸭源沙门菌、鸭源大肠杆菌O157无交叉反应。普通和荧光RAA方法的灵敏度分别为100 copies/μL和10 copies/μL,对28份留存的鸭瘟阳性组织样本和84份疑似鸭瘟临床样品检测结果表明建立的方法与商业化PCR试剂盒的符合率为100%。结果表明,RAA方法实现常温扩增、操作简单、费用低廉、无需热循环过程,是一项具有广泛前景的方法。(本文来源于《中国家禽》期刊2019年17期）
许笑,王艳华,MUmar,Zafar,Khan,王恒,蔡建平[9]（2019）在《鸡源产气荚膜梭菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立》一文中研究指出为建立鸡源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)的快速诊断方法,本研究以产气荚膜梭菌α-毒素的编码基因plc为基础设计、合成引物和探针,并以real-time PCR的方法进行验证,建立了鸡源产气荚膜梭菌的重组酶聚合酶扩增(RPA)检测方法。该方法可在38℃、25 min内对产气荚膜梭菌的α-毒素编码序列进行快速特异性扩增,最低检测限量可达1×10~1copies/μL,灵敏度良好。以此方法检测实验室保存的临床样本,其检测结果与real-time PCR的检测结果一致。上述结果表明,本研究建立的real-time RPA方法在检测鸡源产气荚膜梭菌时具有操作简单、快速灵敏的特点,适用于鸡源产气荚膜梭菌的临床检测。(本文来源于《中国兽医科学》期刊2019年12期）
李天芝,于新友[10]（2019）在《重组酶聚合酶扩增技术及其在兔病原检测中的应用》一文中研究指出重组酶聚合酶扩增技术是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强、操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、反应条件优化、产物检测方式及在兔病原检测中应用,旨在为兔病原检测新技术、新方法的研制提供参考。(本文来源于《中国养兔》期刊2019年04期）
重组酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文根据霍乱弧菌的ompW基因的保守序列,设计重组酶聚合酶扩增(RPA)特异性引物,构建添加β-action基因为扩增内标的霍乱弧菌RPA-IAC检测方法。从扩增中可得到280 bp的目标基因片段和337 bp的扩增内标片段,该方法特异性良好,检测限与普通PCR一致,灵敏度均可达到0.1 ng/μL。该方法应用测试效果与传统培养方法相当,恒温37℃,40 min即可完成反应,检测效率高,适用于基层及现场检测。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组酶论文参考文献
[1].葛以跃,苏璇,张倩,陈银,赵康辰.CRISPR-Cas13a结合重组酶介导的扩增快速检测副溶血性弧菌方法的建立[J].现代预防医学.2019
[2].庄濠宇,李伟,李窕妍,张峥嵘,温尔英.利用添加扩增内标的重组酶聚合酶法检测霍乱弧菌[J].检验检疫学刊.2019
[3].张强,丁昕,吴小珉,刘燕红,刘剑峰.重组酶介导的华支睾吸虫特异性核酸等温扩增方法的建立及初步评价[J].中国血吸虫病防治杂志.2019
[4].梁君妮,尹伟力,谢爽,刘宁,段效辉.重组酶聚合酶扩增技术快速检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)方法的建立[J].中国预防兽医学报.2019
[5].熊科,崔晓亭,王小艺,赵峙尧,柳佳芸.基于宏基因策略的新颖木聚糖酶基因cbxynA克隆及其重组酶酶学性质[J].中国食品学报.2019
[6].倪碧娴,吴小珉,刘燕红,徐祥珍,应清界.重组酶介导的隐孢子虫属特异性等温核酸扩增方法的建立及评价[J].中国血吸虫病防治杂志.2019
[7].苗丽,张秀平,王建昌,王永亮,程奇.肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用[J].江苏农业学报.2019
[8].徐超,董新吉,王超群,张巨洲,张子宏.基于重组酶介导扩增技术诊断鸭瘟方法的建立[J].中国家禽.2019
[9].许笑,王艳华,MUmar,Zafar,Khan,王恒,蔡建平.鸡源产气荚膜梭菌重组酶聚合酶扩增检测方法的建立[J].中国兽医科学.2019
[10].李天芝,于新友.重组酶聚合酶扩增技术及其在兔病原检测中的应用[J].中国养兔.2019
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