尼罗罗非鱼肝脏N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质分析

论文摘要

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAGase）是生物体内主要的溶酶体水解酶之一,广泛存在于动植物和微生物体内.以尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）肝脏作为材料,采用硫酸铵（饱和度30%～70%）分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析、Sephadex G-200分子筛凝胶过滤柱层析的方法分离纯化NAGase,得到比活力为2 988U/mg的酶制剂.经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测呈现单一条带,说明所得酶为PAGE单一纯.通过Sephadex G-200柱层析法测得NAGase的总分子质量为61.8ku,结合SDS-PAGE结果,说明该酶仅有一个亚基.进一步测定了NAGase的酶学性质:NAGase水解底物对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷（pNP-NAG）的最适温度为55℃,温度稳定范围为0～55℃,超过75℃时则完全丧失活性;NAGase水解底物的最适pH为5.8,pH稳定范围为4.0～9.0,pH大于9.0时几乎完全失活;该酶水解底物的动力学参数Km和vm分别为0.229mmol/L和9.346μmol/（L·min）;运用化学修饰法分析发现二硫键、氨基、组氨酸咪唑基和色氨酸吲哚基均是NAGase的活性必需基团,而精氨酸胍基则不是其活性必需基团.

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈晓佳,孙林浩,袁阳,黄小红,张伟妮

关键词: 尼罗罗非鱼,乙酰氨基葡萄糖苷酶,纯化,酶学性质,活性必需基团

来源: 厦门大学学报(自然科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室,福建农林大学海洋研究院

基金: 国家自然科学基金(31572484),福建省自然科学基金(2015J01605)

分类号: Q814

页码: 685-691

总页数: 7

文件大小: 1173K

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