导读:本文包含了体外长期培养论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,体外,细胞,纹状体,细粒,平滑肌,腺癌。
体外长期培养论文文献综述
郭炜,张宏伟,林芷伊,张永国,雷振[1]（2019）在《体外长期培养细粒棘球蚴原头蚴生长发育规律的研究》一文中研究指出目的探讨总结体外连续培养细粒棘球蚴原头蚴生长发育的规律。方法在5%CO2培养箱中37℃条件下,以RPMI-1640为基础培养基含20%胎牛血清的单相培养体系中体外培养原头蚴,在倒置显微镜下定期动态观察原头蚴的体积及形态学变化,计算其成囊率、蒂端发泡形成率等指标随时间变化情况,总结其体外培养生长发育规律。结果体外培养原头蚴在第1周开始形成蒂端发泡,在体外培养的前6周,原头蚴的形态学以蒂端发泡为主要变化特征,其数量逐渐增加,体积逐渐增大。第5周可观察到原头蚴外周形成一层角质层,开始向成囊方向发育;原头蚴的体积随培养时间的延长逐渐增大,观察到最大囊的直径约为:1.2mm,在体外培养的第17周部分原头蚴囊外周的角质层开始变得毛糙,囊的体积缩小,其内部结构变得模糊不清,浓缩聚集成团,与外周的角质层有明显的界限,培养至7个月时,90%以上的囊泡出现上述形态学改变;原头蚴的最大成囊率约为11%。结论 1、体外培养原头蚴的体积随培养时间的延长存在从小到大再逐渐缩小的规律;2、体外培养原头蚴在成囊发育过程中可出现多种不同的形态学变化,是否存在多种成囊方式还需要进一步验证。(本文来源于《石河子大学学报(自然科学版)》期刊2019年01期）
章淑艳,倪德胜,王维戚[2]（2019）在《二甲双胍改善长期体外培养骨髓间充干细胞的增殖和分化功能》一文中研究指出目的:观察二甲双胍(metfomin, Met)能否改善体外长期培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖和成骨分化功能。方法:分离小鼠BMMSCs进行体外培养,选取P1代和P6代细胞,P6代细胞用Met处理,检测细胞增殖,克隆形成,ALP活性、矿化结节和成骨基因mRNA表达水平。使用试剂盒检测细胞ROS水平,并检测抗氧化、干细胞属性(干性)及衰老相关基因的mRNA表达情况。结果:小鼠P6代BMMSCs的增殖和成骨分化功能明显低于P1代细胞,Met可以显着提高P6代细胞的增殖和成骨分化能力,并提高细胞的抗氧化功能和干性,降低衰老相关基因表达。结论:Met能够增强体外长期培养的小鼠BMMSCs的增殖和分化功能,这种作用可能是通过改善氧化应激和提高干性实现的。(本文来源于《实用口腔医学杂志》期刊2019年03期）
何颖,邹立津,高蔓蔓,梁堂钊,邹学农[3]（2018）在《体外长期培养的猪BMSCs发生转化过程中基因表达谱和DNA甲基化谱关联分析》一文中研究指出目的探讨体外长期培养的长白猪BMSCs全基因组DNA甲基化状态,阐明甲基化在调节基因表达上与BMSCs发生转化的关系。方法抽取3月龄长白猪胫骨近端骨髓,采用密度梯度离心法并根据细胞贴壁特性对BMSCs进行分离、纯化、体外传代培养。细胞恶性转化通过细胞形态、核型分析、双层软琼脂克隆形成实验、血清依赖性实验以及裸鼠成瘤实验进行验证。使用定制的家猪甲基化芯片和Agilent全基因组表达谱芯片,通过生物信息学分析获得第2代和第25代BMSCs全基因组甲基化表达水平和m RNA表达谱,并进行m RNA-甲基化的关联分析,筛选DNA异常甲基化谱,同时对这些基因进行KEGG富集分析。结果长期培养的BMSCs逐渐表现出转化细胞的特性:由较大的纺锤形逐渐变为小的梭形,血清依赖程度显着降低,在双层软琼脂培养基中锚着独立生长并形成细胞集落,在裸鼠体内形成肿瘤组织。全基因表达谱芯片筛选出转化过程中上调表达的257条基因和下调表达的315条基因,信号通路分析发现部分细胞周期相关基因表达上调,部分细胞外基质受体相互作用(ECM-receptor interaction)、黏着斑通路(focal adhesion)、肌动蛋白细胞骨架调节(regulation of actin cytoskeleton)、癌症通路(pathways in cancer)、P53等通路相关基因表达下调。DNA甲基化芯片分析得到受甲基化调控的962条差异基因和1 219条受去甲基化的基因,并发现这些基因主要参与细胞代谢、增殖分化、细胞结构、炎性免疫、肿瘤发生等生物过程。联合分析BMSCs转化过程受甲基化调控的基因,发现35个基因的甲基化改变与表达变化方向相反(相关系数r=–0.686,P=0.000),其中21个基因启动子区甲基化程度升高而基因表达下降,14个基因启动子区甲基化程度下降而基因表达升高;同时KEGG富集分析发现多个受甲基化调控、参与干细胞分化的基因及参与的多个细胞信号通路,其中在14条甲基化下调而表达上调的基因中,很多具有调节肿瘤发生与免疫炎性相互平衡的作用,其中CDKN3启动子区甲基化状态改变可能与细胞肿瘤化密切相关。结论研究结果表明甲基化参与猪BMSCs自发转化,这为BMSCs临床应用预警和防止转化提供了新线索。(本文来源于《中国修复重建外科杂志》期刊2018年08期）
陈世明,董文心,章瑾,宣丹英,顾丰华[4]（2018）在《体外长期培养的人神经干细胞对大鼠帕金森病模型的药效初探》一文中研究指出目的初步探讨体外长期连续培养的人神经干细胞(hNSCs)对大鼠帕金森病(PD)模型的药效。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射大鼠脑内黑质体部位,毁损黑质多巴胺能神经元建立PD大鼠模型。成模大鼠随机分为对照组、NSC混合、NSC高剂量、NSC低剂量四组,行脑内同侧纹状体部位移植h NSCs。行为学实验观察治疗效果,免疫荧光染色鉴定植入纹状体的hNSCs存活和分化情况。结果细胞移植后观测和检查:(1)NSC高剂量组在移植3个月后,大鼠的单侧旋转症状与移植前比较有显着的改善(P<0.05);NSC低剂量组大鼠旋转症状也有改善,但与移植前比较无显着性差异(P>0.05);NSC混合组大鼠旋转症状明显改善,与对照组比较有显着性差异(P<0.05)。(2)6-OHDA能明显损伤大鼠脑内黑质部位,使其神经元数量减少;神经干细胞纹状体部位移植后可见移植的干细胞分化为神经元。结论 PD模型大鼠纹状体部位移植的hNSCs可分化为神经元,且对PD模型大鼠旋转症状有明显的改善。(本文来源于《中国医药生物技术》期刊2018年04期）
邱林子,王桂容,潘艳,王溢文,李新庆[5]（2017）在《用于人类脂肪干细胞的纯化和体外长期培养的聚合物涂层》一文中研究指出采用紫外固化法制备了基于丙烯酸酯类水凝胶的聚合物涂层(PC),并用X射线光电子能谱(XPS)、水接触角(WCA)和原子力显微镜(AFM)分别对PC进行了化学组成和表面性能的表征.在PC表面进行了人类脂肪干细胞(h ASC)的体外长期培养扩增,得到的第3代细胞的生物学表征结果表明,干细胞在PC表面能正常黏附生长,流式细胞仪检测发现干细胞对特征标记物CD49d,CD73,CD105的阳性显性比例较高,对HLA-DR和CD31几乎不显性,说明扩增的干细胞具有h ASC特征.对PC上扩增的干细胞进行诱导分化,并用油红O、茜素红和阿利新蓝分别进行染色分析,结果表明,该干细胞保留了h ASC的多能特性:能分化为成脂、成骨和成软骨细胞.含有单体甲基丙烯酰氧乙基叁甲基氯化铵(DMC)、甲基丙烯酸环己酯(CHMA)和甲基丙烯酸-2-(二乙氨基)乙酯(DEAEMA)的PC2(质量比为3∶1∶2)在用于h ASC体外长期培养时,比其它PC和TCP更有利于细胞的黏附和增殖,纯化细胞,保持其多能性.实时荧光定量PCR(RT-q PCR)的分析表明PC2上得到的细胞更容易向成骨和成软骨细胞分化.(本文来源于《高等学校化学学报》期刊2017年10期）
黎张燕,唐欲博,罗红鹤,程超,柯尊富[6]（2017）在《人原代肺癌细胞体外长期培养及个体化药敏研究》一文中研究指出目的应用条件性重编程细胞(Conditionally Reprogrammed Cells,CRCs)技术建立高效、稳定的人肺癌细胞体外长期培养体系,并利用该体系进行体外药敏检测,预测患者对常用化疗药物的敏感性,为肺腺癌精准化疗敏感药物的选择提供参考。方法采用胶原酶消化法将肺肿瘤组织分散成单个细胞后,用条件性培养基及3T3饲养细胞诱导培养,观察其生长情况,采用HE染色、免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞,MTS药敏试验检测顺铂、奈达铂、卡铂、长春瑞滨4种临床常用化疗药物的敏感性。结果利用CRC技术成功分离培养了14例肺癌细胞,鉴定发现细胞形态、核分裂相以及细胞标记蛋白符合肺癌细胞特征,细胞体外连续培养时间可达5个月以上,并可稳定传代至23代以上。对6例肺腺癌的药敏结果显示,6例原代肺腺癌细胞对顺铂、奈达铂敏感,但对卡铂、长春瑞滨的敏感率较低,这与临床上铂类药物作为肺腺癌一线治疗药、而长春瑞滨作为二线治疗药物相符合。结论 CRCs技术可作为一种体外长期高效培养原代肺癌细胞的方法,应用此方法培养出的原代肿瘤细胞可作为体外药敏检测模型,对肺癌的个体化治疗具有重要意义。(本文来源于《今日药学》期刊2017年02期）
[7]（2016）在《Cell Stem Cell:研究开发出在体外长期培养成体干细胞的方法》一文中研究指出在一项新的研究中,来自美国麻省总医院(MGH)等机构的研究人员开发出的一种新方法可能引发成体干细胞培养领域变革。研究人员描述了获得来自在日常治疗肺部疾病期间收集的各种组织样品中的气道干细胞(airway stem cell),并对它们进行增殖。这种方法似乎也可用于几种其他的组织,如皮肤、胃肠道内壁和生殖道。相关研究结果在线发表在Cell Stem Cell期刊上。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2016年23期）
张鹏飞[8]（2016）在《猪雄性生殖干细胞体外长期培养体系的建立》一文中研究指出雄性生殖干细胞是位于曲精细管内的特殊的成体干细胞类群,具有自我更新维持群体数量动态平衡以及分化进入精子发生的能力,在干细胞生物学、再生医学、转基因动物制作及男性不育治疗等领域具有重要的科学意义和应用价值。雄性生殖干细胞数量极为稀少,且占睾丸总细胞比率极低,严重限制了相关研究进展。因而纯化及体外扩增雄性生殖干细胞,将有望为后续研究提供源源不断的研究材料。本研究旨在利用细胞培养和分子生物学方法优化猪雄性生殖干细胞富集方案,并探究血清替代物、生长因子组合等在其体外培养的影响,优化猪雄性生殖干细胞体外培养条件,成功建立体外长期培养体系,为猪雄性生殖干细胞后续研究奠定基础。本研究主要研究结果如下:1、优化差异贴壁方案对猪雄性生殖干细胞进行富集。分别对富集前后细胞进行PLZF、GFRA1和UCHL1免疫细胞荧光染色,结果显示富集后生殖干细胞纯度由富集前的10.50±0.13%提高至72.66±2.96%,显着优于传统差异贴壁方案28.71±1.00%。2、探究血清替代物(Konckout serum replacement,KSR)对猪雄性生殖干细胞体外增殖的作用。结果表明,在血清浓度1%条件下添加血清替代物KSR(10%),与对照组相比可以显着提高pMGSCs体外增殖能力。3、探究不同生长因子组合对猪雄性生殖干细胞体外扩增的影响,结果显示GDNF、bFGF、IgF1均能不同程度促进生殖干细胞克隆形成与扩张。其中GDNF(10ng/mL)、GFRA1(20ng/mL)和bFGF(10ng/mL)联合添加效果最佳。4、在本试验筛选的条件下,完成猪雄性生殖干细胞体外培养2月,传代10次;细胞免疫荧光、RT-PCR和western-blot证实培养后细胞仍表达雄性生殖干细胞分子标记UCHL1、PLZF、GFRA1等;核型分析显示染色体条数正常;将培养近2月猪雄性生殖干细胞移植到白消安处理的小鼠曲精细管,四周后仍可观察到红色荧光标记的猪雄性生殖干细胞定植于小鼠曲精细管基底膜并形成克隆。以上表明本试验成功建立了猪雄性生殖干细胞体外长期培养体系。该培养体系的建立将为猪雄性生殖干细胞增殖与分化机理的研究奠定基础,并为其他大家畜雄性生殖干细胞的研究提供参考依据。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2016-05-01）
陈鑫苹[9]（2015）在《食蟹猴精原干细胞体外长期培养及其鉴定》一文中研究指出目的建立食蟹猴精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)分离纯化、体外长期培养及标记分子鉴定、冷冻储存、体外诱导分化的方法体系,为体外研究非人灵长类精子发生机制和食蟹猴SSCs的研究及应用构建转化医学研究平台。方法手术法获取2岁14天的食蟹猴睾丸,采用叁步酶消化法分离获得单细胞悬液和差异贴壁法富集SSCs。将细胞培养于经丝裂酶素处理的STO细胞为滋养层,使用添加GDNF, bFGF, GFRα1叁个重要生长因子的无血清培养液在体外培养超过20天后,应用CDH1标记分子免疫荧光染色初步鉴定培养的细胞是否为SSCs。长期培养食蟹猴SSCs,将传代至22代的SSCs置于液氮中保存。取冷冻2年后的第22代食蟹猴SSCs进行复苏培养后,以GFRal为主标记分子分别和CDH、Thy-1Oct4、PLZF四个标记分子组合进行细胞免疫荧光双标染色鉴定及RT-PCR验证分析,并利用冰冻切片进行GFRα1免疫荧光染色观察食蟹猴睾丸组织内SSCs的位置分布及形态。将鉴定为SSCs的细胞集落在含有SCF因子的培养基中进行体外诱导分化,并应用精母细胞特异标记分子SCP3进行免疫荧光染色鉴定SSCs是否分化为精母细胞。结果(1)分离纯化的细胞在培养2天后细胞开始形成小集落,5天后细胞集落明显。培养20天后,SSCs呈葡萄串状细胞簇,符合SSCs的形态特征,这些细胞经SSCs标记分子CDH1免疫荧光染色呈阳性表达。(2)体外长期培养并传代至22代的食蟹猴SSCs的免疫荧光双标染色鉴定结果表明GFRα1、CDH1, GFRα1、Thy-1, GFRα1、Oct4, GFRα1、PLZF四组特异标记分子均呈阳性表达。(3) RT-PCR验证分析结果表明GFRα1、CDH1、Thy-1、Oct4在体外长期培养的食蟹猴SSCs中也均呈阳性表达。(4)冰冻切片免疫荧光染色结果显示GFRα1在食蟹猴睾丸中靠近基底膜的单个型、成对型的精原细胞中分布。(5) SSCs体外诱导分化第8天,显微镜下观察到与精母细胞形态特征相似的细胞,食蟹猴SSCs经过体外诱导分化的细胞表达精母细胞特异标记分子SCP3。结论(1)本研究已经成功建立了食蟹猴SSCs的分离纯化、体外长期培养及鉴定、长期冷冻储存、体外诱导分化功能等一整套方法体系。(2) GFRα1、CDH1、 Thy-1、Oct4可用于食蟹猴SSCs的鉴定。(3)食蟹猴睾丸冰冻切片免疫荧光染色显不GFRα1是食蟹猴SSCs的可靠标记分子。(4)本研究体外长期培养的食蟹猴SSCs可成功分化为精母细胞。(本文来源于《海南大学》期刊2015-05-01）
申复进,洛若愚,梁华,蒋艳萍,曹来英[10]（2015）在《犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养》一文中研究指出背景:体外分离培养获得足够活性良好的种子细胞是构建阴道组织工程的关键。文献报道阴道上皮细胞体外纯化培养和传代较为困难,尤其是体外长期培养犬等大动物的阴道种子细胞尚未见报道。目的:建立体外稳定培养犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞方法。方法:获取犬小块阴道组织,机械分离阴道黏膜上皮,Dispase酶和胰蛋白酶分步消化收集上皮细胞,接种于无血清角化细胞培养液中培养和传代;机械分离阴道平滑肌组织后采用Ⅱ型胶原酶消化获得平滑肌细胞,在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中连续培养传代。动态观察上皮细胞和平滑肌细胞生长增殖情况,分别采用特异性抗体行细胞免疫化学染色鉴定。结果与结论:原代培养的上皮细胞24-36 h后开始贴壁铺展,四五天后呈对数生长,七八天可达70%融合,为单一的上皮细胞,呈典型铺路石样,未见成纤维细胞混杂。每四五天可传代1次,连续传代六七次,细胞免疫化学染色角蛋白AEl/AE3抗体阳性。平滑肌细胞原代培养24 h后贴壁呈梭形,此后呈对数生长,4 d后融合呈典型的"峰和谷"样,每叁四天可传代1次,连续传代七八次,细胞免疫化学染色示α-肌动蛋白染色阳性。结果证实,犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养,可为体外构建组织工程化阴道提供足够的种子细胞。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年01期）
体外长期培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:观察二甲双胍(metfomin, Met)能否改善体外长期培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)的增殖和成骨分化功能。方法:分离小鼠BMMSCs进行体外培养,选取P1代和P6代细胞,P6代细胞用Met处理,检测细胞增殖,克隆形成,ALP活性、矿化结节和成骨基因mRNA表达水平。使用试剂盒检测细胞ROS水平,并检测抗氧化、干细胞属性(干性)及衰老相关基因的mRNA表达情况。结果:小鼠P6代BMMSCs的增殖和成骨分化功能明显低于P1代细胞,Met可以显着提高P6代细胞的增殖和成骨分化能力,并提高细胞的抗氧化功能和干性,降低衰老相关基因表达。结论:Met能够增强体外长期培养的小鼠BMMSCs的增殖和分化功能,这种作用可能是通过改善氧化应激和提高干性实现的。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外长期培养论文参考文献
[1].郭炜,张宏伟,林芷伊,张永国,雷振.体外长期培养细粒棘球蚴原头蚴生长发育规律的研究[J].石河子大学学报(自然科学版).2019
[2].章淑艳,倪德胜,王维戚.二甲双胍改善长期体外培养骨髓间充干细胞的增殖和分化功能[J].实用口腔医学杂志.2019
[3].何颖,邹立津,高蔓蔓,梁堂钊,邹学农.体外长期培养的猪BMSCs发生转化过程中基因表达谱和DNA甲基化谱关联分析[J].中国修复重建外科杂志.2018
[4].陈世明,董文心,章瑾,宣丹英,顾丰华.体外长期培养的人神经干细胞对大鼠帕金森病模型的药效初探[J].中国医药生物技术.2018
[5].邱林子,王桂容,潘艳,王溢文,李新庆.用于人类脂肪干细胞的纯化和体外长期培养的聚合物涂层[J].高等学校化学学报.2017
[6].黎张燕,唐欲博,罗红鹤,程超,柯尊富.人原代肺癌细胞体外长期培养及个体化药敏研究[J].今日药学.2017
[7]..CellStemCell:研究开发出在体外长期培养成体干细胞的方法[J].现代生物医学进展.2016
[8].张鹏飞.猪雄性生殖干细胞体外长期培养体系的建立[D].西北农林科技大学.2016
[9].陈鑫苹.食蟹猴精原干细胞体外长期培养及其鉴定[D].海南大学.2015
[10].申复进,洛若愚,梁华,蒋艳萍,曹来英.犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养[J].中国组织工程研究.2015
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