烟草异源过表达胡杨PeGRF6/8a对不同逆境的响应

论文摘要

14-3-3蛋白是一种广泛存在于动植物体内的高度保守的蛋白家族,通过与各种靶蛋白之间的互作,参与生物体内各种生理生化过程和代谢反应,且在生物与非生物胁迫响应中发挥着重要作用.为明确胡杨PeGRF6/8a在非生物胁迫中的功能,克隆了胡杨14-3-3蛋白家族中PeGRF6/8a的cDNA序列,构建该基因的植物过表达载体pBI121-35S::PeGRF6/8a,并采用农杆菌介导法将其转化野生型烟草.对获得的异源过表达烟草进行以下处理:（1）浓度为1μmol/L和2.5μmol/L脱落酸（Abscisic acid,ABA）处理条件下的种子萌发实验;（2）低氮（2.5 mmol/L KNO3）和高氮（150 mmol/L KNO3）胁迫下的根长对比实验;（3）1/2霍格兰（Hongland）营养液水培实验,分别设置对照（CK）、低氮（0.2 mmol/L KNO3）、高氮（150 mmol/L KNO3）和盐胁迫（150 mmol/L NaCl）4个处理.结果显示:（1）在ABA处理下,转基因烟草种子的萌发率较野生型低,且在2.5μmol/L处理下更加显著;（2）低氮处理下,转基因烟草的根长显著短于野生型烟草的根长,而高氮处理下的结果相反;（3）水培实验中,低氮和盐胁迫处理下,转基因烟草与野生型相比,其下部的叶片明显变黄或萎焉,所含叶绿素和类胡萝卜素含量明显降低,抗氧化酶SOD以及渗透调节物质脯氨酸和可溶性蛋白的含量也显著降低,而叶片中丙二醛（MDA）的积累量却显著升高;高氮胁迫下,野生型烟草的萎蔫速度要显著快于转基因烟草,其转基因植株的生理指标除MDA积累量外均显著高于野生型.上述结果表明在烟草中异源过表达胡杨PeGRF6/8a能够降低植物对低氮和盐的耐受性,但可以增强植物对高氮的耐受性.（图9参31）

论文目录

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 胡杨总RNA提取和cDNA合成

1.2.2 胡杨Pe GR F6/8a的克隆与植物过表达载体的构建

1.2.3 烟草的遗传转化和鉴定

1.2.4转基因烟草在ABA胁迫处理下种子萌发实验

1.2.5 低氮和高氮胁迫处理下的根长实验

1.2.6 转基因烟草抗性实验

1.2.7 生理指标测定方法

1.2.8 H2O2活体原位检测实验

2 结果与分析

2.1 PeGRF6/8a过表达植株的鉴定

2.2 转基因烟草对ABA的响应

2.3 转基因烟草在低氮和高氮胁迫处理下的根长比较

2.4 转基因烟草在低氮、高氮和盐胁迫下叶绿素和类胡萝卜素的含量

2.5 转基因烟草在低氮、高氮和氯化钠胁迫下超氧化物歧化酶（SOD）活性

2.6 转基因烟草在低氮、高氮和盐胁迫下渗透物质含量

2.7 转基因烟草在低氮、高氮和盐胁迫下丙二醛MDA含量

2.8 转基因烟草与野生型烟草在低氮、高氮和盐胁迫下叶片H2O2活体原位染色

3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 冯倩,陈永富,姚银安,吴英青,张国燕,韩颖,高永峰

关键词: 蛋白,脱落酸,烟草,低氮,高氮,盐胁迫

来源: 应用与环境生物学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学

单位: 西南科技大学生命科学与工程学院

基金: 国家自然科学基金面上项目(31770644),四川省国际合作项目(2017HH0050),四川省教育厅资助科研项目(17ZB0456),四川省青年科技基金项目(2014JQ0016),西南科技大学博士基金项目(14zx7157)资助~~

分类号: Q943.2;Q945.78

DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.10006

页码: 665-671

总页数: 7

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烟草异源过表达胡杨PeGRF6/8a对不同逆境的响应

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