论文摘要
为建立一种针对Cry1类毒素的经济高效的检测方法,本研究以杂交瘤细胞株2D10 cDNA为模板,通过重叠延伸PCR（gene splicing by overlap extension PCR, SOE-PCR）技术构建单链抗体（single-chain variable fragment, scFv）基因,转入大肠杆菌（Escherichia coli） BL21 （DE3）表达并建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定（double antibody sandwich ELISA, DAS-ELISA）检测方法,通过分子对接模拟分析影响scFv与Cry1A类毒素结合的关键因素。结果成功构建了scFv基因,表达纯化出具有较高识别活性的scFv抗体（约28 kD）,所建立的DAS-ELISA方法对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的最低检测限（limits of determination, LOD）为20 ng/mL,分子对接结果显示,毒素的三维结构决定了其结合活性,氢键和疏水作用力在scFv与毒素结合过程中起重要作用。本研究利用基因工程抗体技术构建并表达获得了scFv抗体,建立了针对Cry1Ab/Cry1Ac毒素的双抗夹心ELISA检测方法,初步分析研究了scFv与Cry1Ac/Cry1Ab和Cry1Aa的识别差异机制,为进一步改造、研究开发新型广谱scFv提供了理论依据。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 曲婷婷,张霄,董飒,刘贝贝,李盼,王耘,张存政,刘贤金
关键词: 分子对接
来源: 农业生物技术学报 2019年03期
年度: 2019
分类: 农业科技,基础科学
专业: 生物学
单位: 南京农业大学植物保护学院,江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所/江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地/农业部农产品量安全控制技术与标准重点实验室
基金: 国家自然科学基金项目(No.31371778和No.31301703),江苏省自主创新项目(No.CX(14)5068),江苏省自然科学基金(No.BK20150114)
分类号: Q78
页码: 516-525
总页数: 10
文件大小: 1212K
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标签：分子对接论文;