导读:本文包含了培养脊髓神经元论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:神经元,脊髓,细胞,干细胞,胆碱能,神经,胶质。
培养脊髓神经元论文文献综述
张潇,张金枝,刘真真,林艳[1]（2019）在《胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养向胆碱能神经元的分化》一文中研究指出目的在一定条件下对胚胎大鼠脊髓神经干细胞进行体外培养与诱导,观察其向胆碱能神经元的分化情况,并进行鉴定。方法选取孕龄17 d的Wistar大鼠5只,利用胚胎大鼠进行脊髓源神经干细胞分离与培养,并进行神经上皮干细胞蛋白(Nestin)的细胞免疫荧光鉴定。对神经干细胞进行胆碱能神经元定向诱导分化,对照组为单纯诱导培养基,其余各组以诱导培养基为基础,添加生长因子,分为维甲酸(RA)组、音猬因子(SHH)组、SHH+神经营养因子-3(NT-3)组、SHH+RA组,每组1只。细胞诱导分化14 d后,进行细胞免疫荧光染色,观察各组胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性细胞比率与细胞分化情况。结果经诱导分化后,神经干细胞向胆碱能神经元进行分化。培养14 d,大部分神经细胞从神经干细胞球中央迁出,神经细胞间突起发生交错,呈现出网状结构。经免疫荧光检测,可观察到细胞胞质呈现出红色荧光。对照组未发现Ch AT阳性细胞,SHH、RA诱导组可观察到少量的Ch AT阳性细胞,SHH+NT-3组和SHH+RA组则可以观察到较多的Ch AT阳性细胞。经统计学比较,SHH+NT-3组和SHH+RA组Ch AT阳性细胞比率均显着高于对照组、RA组、SHH组,差异均具有统计学意义(P <0.05),且SHH+NT-3组和SHH+RA组组间比较,对照组、RA组、SHH组两两比较,差异均无统计学意义(P> 0.05)。结论在添加一定生长因子的条件下对胚胎大鼠脊髓神经干细胞进行体外培养,可以诱导其向胆碱能神经元分化。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年07期）
吕辉,刘路路,付婷婷,孔庆霞,乔保俊[2]（2016）在《小鼠脊髓前角运动神经元的分离、培养和鉴定》一文中研究指出目的:探讨一种分离小鼠脊髓前角运动神经元的方法,为运动神经元相关的研究提供依据。方法:分离13 d的C57BL/6胎鼠脊髓,利用Optiprep分离液经密度梯度离心获得脊髓前角运动神经元,培养后观察神经元细胞形态的变化,免疫荧光双标法对分离运动神经元的纯度进行判定。结果:将分离到的运动神经元进行培养,能够观察到典型的神经元细胞形态及轴突生长。免疫荧光双标证明培养的细胞为运动神经元细胞,纯度约95%。结论:Optiprep分离液用于小鼠运动神经元的分离,可获得良好的分选效果。Optiprep分离液可用于运动神经元相关的研究。(本文来源于《解剖学杂志》期刊2016年03期）
杨林,刘阳,吕德成[3]（2015）在《新生大鼠脊髓运动神经元的纯化培养与鉴定》一文中研究指出背景:神经元是有丝分裂后的细胞,体外培养很难存活。脊髓运动神经元的分离、纯化和培养同时也是细胞培养的技术难点。目的:建立新生大鼠脊髓运动神经元培养体系,并予以分类鉴定和测定其纯度。方法:取新生大鼠脊髓腹侧组织分离成细胞悬液,经密度梯度离心及差速贴壁后纯化培养,采用免疫细胞化学双标染色法对培养盖片上的细胞予以鉴定、分类,结合Hoechst荧光染核,计数各细胞成分的含量。结果与结论:细胞贴壁生长良好,神经元占85.8%,其中运动神经元达71.6%,星形胶质细胞占7.8%,NF200和胶质纤维酸性蛋白染色皆为阴性的细胞占6.4%。结果说明,取新生大鼠腹侧脊髓组织结合密度梯度离心及差速贴壁接种法可以培养出高纯度的脊髓运动神经元。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年42期）
高颖娜,李晓雨,宋先敏,陈世彩,陈东辉[4]（2013）在《胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立》一文中研究指出目的获得胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管共培养的条件,在体外建立稳定的神经-肌肉共培养体系,并形成功能性的神经肌肉接头。方法 C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60%~70%融合时,用分化培养液诱导分化;取孕15~16d的SD大鼠,提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞,种植到分化5d的C2C12肌管细胞中,在神经元基础无血清培养液Neurobasal+2%B27中共培养。倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成,应用免疫荧光染色技术检测突触后膜乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)特异性结合物α-银环蛇毒素(α-bungarotoxin,α-BTX),并采用屏幕录像技术记录共培养体系中肌肉收缩现象。结果在共培养体系中,原代脊髓运动神经元与C2C12肌管细胞均能存活并进一步分化成熟。3d时,可见运动神经元伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管;1周时,肌管按同一方向排列,出现广泛的节律性收缩,同时免疫荧光染色结果显示α-BTX特异性结合突触后膜AChR;共培养10d后,运动神经元开始凋亡,肌管细胞逐渐出现萎缩现象。结论在体外培养条件下,无需特殊培养基和各种营养因子,运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育,建立突触连接,触发一系列神经肌肉接头信号转导,引发肌管节律性收缩。(本文来源于《第二军医大学学报》期刊2013年12期）
刘晓云,卜晖,李哲,孙萌萌,李春岩[5]（2013）在《胰岛素样生长因子(IGF-1)对体外培养的脊髓和皮层运动神经元的保护作用》一文中研究指出目的研究胰岛素样生长因子(IGF-1)对THA诱导的运动神经元损伤的保护作用。方法选用生后7d和1d的SD乳鼠,7d龄乳鼠用于脊髓片培养,1d龄乳鼠用于脑片培养。在无菌条件下断头取脊髓腰膨大部分或脑组织,将脊髓腰膨大部分和包含运动皮层的脑组织切成薄片进行体外培养,对照组加入正常培养基,模型组给予谷氨酸转运体抑制剂-THA进行干预,IGF-1组于培养液中同时加入THA和不同浓度的IGF-1。药物干预3w后,应用免疫组织化学方法显示运动神经元并计数。结果 THA能够选择性诱导脊髓前角运动神经元和皮层运动神经元死亡,IGF-1能阻止THA诱导的运动神经元的死亡。结论 IGF-1对THA诱导的慢性运动神经元损伤具有保护作用,IGF-1可能有益于ALS的治疗。(本文来源于《脑与神经疾病杂志》期刊2013年03期）
高颖娜[6]（2013）在《脊髓前角运动神经元—骨骼肌细胞共培养体系的建立》一文中研究指出失神经喉肌等骨骼肌的再生和功能重建是临床关注的热点，而神经肌肉接头重建和成肌干细胞分化融合修复受损肌纤维是失神经骨骼肌再生和功能恢复的关键。因此，为了更好的研究失神经喉肌等骨骼肌的再生机制，从而为干预神经肌肉再生关键分子事件提供新的治疗策略和理论依据，建立一个适当的体外模型显得至关重要。而脊髓前角运动神经元-骨骼肌细胞共培养就是其中的关键技术之一。目前，大部分已知的神经肌肉体外共培养模型均采用含血清培养基，这为体外神经肌肉接头的形成提供了一个功能性的模型系统，但血清的使用也增加了不必要的变异性，由于使用血清使重复体外神经肌肉共培养体系时描述和量化所需的最低因素变得不可能，因此，也有人设计了新型的无血清培养技术用于神经肌肉共培养，以促进功能性的神经肌肉接头的形成。运动神经元及骨骼肌细胞的取材也不尽相同，而其中培养体外分离的胚胎神经元和骨骼肌细胞便利了对脊椎动物神经肌肉接头发展过程的分析，复制组织型的细胞与细胞之间的相互作用往往很难达到分离胚胎干细胞所能达到的效果。从脊髓外植体获得的胚胎运动神经元或者轴突与骨骼肌细胞的培养，容易形成功能性的突触，可以达到很高程度的结构和功能的分化。目前，对体外神经肌肉突触形成中分离细胞培养的研究已经取得了一些关键性的成果。在过去的研究中，Chen等采用NG108-15/C2C12共培养模型用来测定肌管上形成的作为神经肌肉接头形成最早的标记物乙酰胆碱受体（AchR）簇集。虽然NG108-15细胞可以长出轴突并延伸到附近的肌管，但由于NG108-15细胞为小鼠神经母细胞瘤细胞与大鼠胶质瘤细胞之融合细胞，其特性和功能状态都远不能完全代替神经元原代细胞，故在共培养3天后，NG108-15细胞逐渐凋亡，AchR的聚集也明显降低。亦有研究证明，大鼠神经元-肌肉共培养可以形成大量的早期NMJ，并可以检测到神经元轴突诱导的突触后膜AchR的聚集，但由于原代骨骼肌卫星肌细胞取材难度较大，纯化过程较为繁杂，培养条件较高且传至9代后细胞即出现衰老特征，不能无限代地进行传代培养。因此，本实验拟在此基础上进行适当地改进，首次采用SD大鼠胎鼠脊髓前角运动神经元原代细胞和C2C12细胞进行共培养，在体外建立一个稳定的神经肌肉接头(NMJ)模型，该共培养操作过程更为简单，重复性好，细胞状态佳，存活时间更久，且更易于分析，从而为进一步研究体内外神经肌肉接头功能状态及再生奠定基础。第一部分胚胎大鼠脊髓前角运动神经元原代分离和培养研究目的：能够熟练的进行原代神经细胞的提取与培养，并进行提纯和鉴定，以获取体外形成神经肌肉接头所需的胚胎大鼠脊髓前角运动神经元。材料和方法：取孕15d~16d SD大鼠，取出胚胎大鼠腹侧半脊髓组织，经胰酶消化和机械破碎的方法处理分散成单个细胞，经差速贴壁法纯化运动神经元，置于无血清限定性培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，倒置显微下观察神经元形态、结构的变化，并采用免疫荧光法检测脊髓运动神经元特异性标记物胆碱乙酰基转移酶多克隆抗体（ChAT）以鉴定运动神经元。结果：孕15d~16d胎鼠易于取材且所得运动神经元细胞数量多、状态好、细胞活力旺盛，联合Neurobasal+2%B27培养基培养的脊髓前角运动神经元细胞纯度高，约为85%，能够在体外培养条件下存活7~10d左右, ChAT反应结果呈现阳性。结论：通过采用胎龄15d~16d胎鼠脊髓腹侧半联合无血清特定性培养基培养细胞的方法成功分离培养并获得纯度较高的脊髓前角运动神经元，ChAT能够特异性标记脊髓运动神经元，且培养前5~7天，MNs数量稳定，未见明显减少，为课题实施提供可靠的运动神经元来源，同时也为后续共培养体系的建立在时间上创造了条件。第二部分成肌细胞C2C12体外成肌分化模型的建立研究目的：完善肌母细胞C2C12体外培养方法，观察细胞增殖、分化、融合成肌的生物学特性。材料与方法：体外培养成肌细胞C2C12，在含10%胎牛血清的增殖培养液(GM)中扩增培养，待细胞生长至密度为60%~70%时，换为含2%马血清的分化培养液(DM)诱导分化。倒置显微镜下观察各个阶段骨骼肌细胞的形态特征变化并拍照。采用免疫荧光法抗肌球蛋白重链抗体MHC特异性标记肌管。结果：体外培养时，C2C12细胞汇合至60%~70%时，换DM诱导分化，即开始逐步相互融合形成肌管细胞并表达MHC蛋白，约5d左右形成成熟的肌管，MHC特异性反应呈阳性。结论：成肌细胞C2C12体外培养时能够稳定传代，无需特殊诱导方法，用含2%马血清的分化培养液(DM)即可诱导分化形成成熟的肌管细胞，为共培养体系的建立提供稳定的骨骼肌肌管来源。第叁部分运动神经元-骨骼肌细胞共培养体系的建立研究目的：获得运动神经元-骨骼肌细胞共培养条件，建立运动神经元-骨骼肌细胞共培养体系，在体外形成神经肌肉接头。材料与方法： C2C12成肌细胞株体外扩增培养至60%~70%汇合时，分化培养基（DM）诱导分化，培养约3d，开始分化融合形成肌管。取孕15d~16dSD大鼠，提取胚胎大鼠脊髓前角运动神经元细胞，种植到分化5d的肌管细胞中，含2%马血清的分化培养液(DM)共培养。倒置显微镜下观察各个阶段神经元形态及突起长度的变化、肌管形态特征变化及收缩特性、神经肌肉接头的形成。通过活体细胞孵育alpha--BTX)观察突触后膜AchR的位置及分布，并采用屏幕录像技术记录共培养中肌肉收缩现象，这从另一个方面证明共培养后NMJ的形成。结果：更换为共培养培养基后，SKMs和MNs均能存活并进一步地分化成熟。在共培养细胞中，MNs在形态学上易于鉴别，共培养约4h后，倒置显微镜下可观察到部分脊髓运动神经元开始贴壁，呈单个圆形或椭圆形，12h后，大部分细胞均已贴壁，24h后, MNs胞体逐渐形成突起，肌管细胞进一步融合增粗并相互形成网络状，第3d~5d,神经元生长旺盛、胞体饱满、光晕明显、突起增多并延长，部分MNs开始与肌管细胞形成连接；约1周左右可见MNs伸出的轴突延伸至肌管膜表面或包绕肌管，肌管按同一方向排列，出现广泛地节律性收缩；共培养约10d后，运动神经元开始凋亡，肌管细胞逐渐出现萎缩现象。结论：在体外培养条件下，无需特殊培养基和各种营养因子，运动神经元和骨骼肌细胞即可共同生存、生长并进一步发育，建立突触连接，触发一系列神经肌肉接头信号转导，引发肌管节律性收缩。(本文来源于《第二军医大学》期刊2013-05-01）
方相春,张春奎,唐君,李志红,张婷[7]（2012）在《大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体转染原代培养脊髓神经元对VGLUT2表达的影响》一文中研究指出目的:探讨新构建的可以表达针对2型囊泡膜谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporter 2,VGLUT2)短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒载体能否有效地感染大鼠脊髓原代培养神经元,并鉴定其对培养神经元内VGLUT2基因的特异性干扰效果,从而为进一步在整体动物脊髓水平研究VGLUT2的功能提供有力的工具。方法:首先分别将已筛选到的两对互补并靶向作用于编码大鼠VGLUT2序列两个位点的特异性shRNA序列和一个阴性对照的寡核苷酸,克隆到pGCSIL-GFP质粒(经Age I和EcoRI双酶切)载体内,经酶切、测序鉴定及转染293T细胞,包装得到病毒颗粒。然后将筛选出的慢病毒感染体外分离、培养的胚胎大鼠脊髓神经元,将培养的原代神经元分为正常组、阴性对照组、VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组,在荧光显微镜下分别观察GFP的表达情况;同时运用Westernt blot检测各组VGLUT2蛋白的表达水平。结果:免疫荧光检测显示,阴性对照组、VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组脊髓原代培养神经元均能观察到明显的GFP荧光,表明这些神经元已被慢病毒载体高效转染;但VGLUT2 shRNA-1组和VGLUT2 shRNA-2组神经元VGLUT2的表达量明显低于正常组和阴性对照组。Western blot结果显示,VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组的VGLUT2蛋白的表达量与正常组和阴性对照组相比明显有所下降,分别占正常组的62.42±1.12%和66.07±1.33%(P<0.05),但VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组之间无显着性差异(P>0.05);阴性对照组与正常组相比亦无明显差异(P>0.05)。结论:VGLUT2-shRNA-1组和VGLUT2-shRNA-2组重组慢病毒载体均能有效地感染原代培养脊髓神经元,并高效下调其神经元内目的基因VGLUT2的表达。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2012年06期）
王斌,郭伟韬,黄云[8]（2012）在《大鼠脊髓神经元的分离、培养与鉴定》一文中研究指出目的通过对新生大鼠脊髓神经元分离、培养过程中细节的探讨,建立一种高效、稳定的大鼠脊髓神经元培养方法,为研究脊髓损伤相关的病理生理及其治疗提供种子细胞。方法取新生SD大鼠的脊髓组织,通过木瓜酶消化制成单细胞悬液,经差速贴壁后种于12孔细胞培养板内,用无血清培养基培养,倒置显微镜观察细胞生长状态,免疫细胞化学对神经元β-ⅢTubulin行特异性荧光素染色,结合DAPI核染色鉴定神经细胞及其含量。结果该方法培养的脊髓神经元生长状态良好、密度适中,纯度较高,约83%。结论采用木瓜酶消化、差速贴壁及无血清培养的新生大鼠脊髓神经元符合体外实验的要求,为进一步进行相关实验提供目的细胞。(本文来源于《海南医学》期刊2012年06期）
刘然,范东艳,金鹏,范洪学,王苹[9]（2011）在《细胞共培养体系在观察骨髓间充质干细胞对损伤脊髓神经元生长存活影响中的应用》一文中研究指出目的:建立细胞共培养体系,观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对正常及损伤的脊髓神经元的影响。方法:选取新生7d的大鼠,无菌条件下分离骨髓间充质干细胞。选取新生24h的大鼠,无菌条件下分离脊髓背根神经节神经元,并制备机械损伤的模型细胞。用Transwell可渗透培养皿构建共培养体系,通过细胞形态学,免疫细胞化学方法进行细胞纯度鉴定,观察不同条件作用下神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞的存活。结果:共培养组神经元细胞NSE阳性率较相应对照组高。在BMSCs与神经元共培养到第6天,计数神经元的存活率,单纯神经元细胞培养组仅有40%的神经元存活,而共培养组神经元的存活率达到65%。单纯损伤神经元细胞培养组仅有26%的神经元存活,共培养组神经元的存活达到51%,细胞凋亡的数量较对照组明显低。结论:BMSCs可促进正常的脊髓神经元存活,对损伤的脊髓神经元有保护作用,并能诱导神经前体细胞分化为脊髓神经元。(本文来源于《中国康复医学杂志》期刊2011年02期）
刘然,王苹,范东艳,范洪学,郭丽[10]（2011）在《重组腺病毒介导神经营养因子基因转染对体外培养脊髓神经元存活和分化的影响》一文中研究指出目的观察神经营养因子对体外培养脊髓神经元存活和分化的影响。方法选取新生1 d的大鼠,无菌条件下分离脊髓背根神经节神经元,在培养过程中分别用Ad-BDNF和Ad-NT3转染细胞,细胞纯度鉴定采用细胞形态学和免疫荧光染色方法进行,在转染后的不同时间观察培养细胞中NSE阳性细胞率。结果 Ad-BDNF和Ad-NT3转染后脊髓神经元持续培养15 d,脊髓神经元的存活率明显高于单纯脊髓神经元培养对照组。BDNF和NT3能够增加神经元的数目,联合应用效果更好。结论 BDNF和NT3基因转染对原代培养的脊髓神经元存活有较强的促进作用。(本文来源于《中国实验诊断学》期刊2011年01期）
培养脊髓神经元论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨一种分离小鼠脊髓前角运动神经元的方法,为运动神经元相关的研究提供依据。方法:分离13 d的C57BL/6胎鼠脊髓,利用Optiprep分离液经密度梯度离心获得脊髓前角运动神经元,培养后观察神经元细胞形态的变化,免疫荧光双标法对分离运动神经元的纯度进行判定。结果:将分离到的运动神经元进行培养,能够观察到典型的神经元细胞形态及轴突生长。免疫荧光双标证明培养的细胞为运动神经元细胞,纯度约95%。结论:Optiprep分离液用于小鼠运动神经元的分离,可获得良好的分选效果。Optiprep分离液可用于运动神经元相关的研究。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
培养脊髓神经元论文参考文献
[1].张潇,张金枝,刘真真,林艳.胚胎大鼠脊髓神经干细胞体外培养向胆碱能神经元的分化[J].临床和实验医学杂志.2019
[2].吕辉,刘路路,付婷婷,孔庆霞,乔保俊.小鼠脊髓前角运动神经元的分离、培养和鉴定[J].解剖学杂志.2016
[3].杨林,刘阳,吕德成.新生大鼠脊髓运动神经元的纯化培养与鉴定[J].中国组织工程研究.2015
[4].高颖娜,李晓雨,宋先敏,陈世彩,陈东辉.胚胎大鼠脊髓运动神经元与C2C12肌管体外共培养体系的建立[J].第二军医大学学报.2013
[5].刘晓云,卜晖,李哲,孙萌萌,李春岩.胰岛素样生长因子(IGF-1)对体外培养的脊髓和皮层运动神经元的保护作用[J].脑与神经疾病杂志.2013
[6].高颖娜.脊髓前角运动神经元—骨骼肌细胞共培养体系的建立[D].第二军医大学.2013
[7].方相春,张春奎,唐君,李志红,张婷.大鼠VGLUT2基因shRNA慢病毒载体转染原代培养脊髓神经元对VGLUT2表达的影响[J].神经解剖学杂志.2012
[8].王斌,郭伟韬,黄云.大鼠脊髓神经元的分离、培养与鉴定[J].海南医学.2012
[9].刘然,范东艳,金鹏,范洪学,王苹.细胞共培养体系在观察骨髓间充质干细胞对损伤脊髓神经元生长存活影响中的应用[J].中国康复医学杂志.2011
[10].刘然,王苹,范东艳,范洪学,郭丽.重组腺病毒介导神经营养因子基因转染对体外培养脊髓神经元存活和分化的影响[J].中国实验诊断学.2011
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