论文摘要
目的寻找新的牛支原体（Mycoplasma bovis）抗原蛋白并进行原核表达,为牛支原体疫苗的制备奠定基础。方法采用生物信息学方法分析牛支原体PG45株基因组,发现一种新的膜蛋白p59,并对其理化性质、蛋白定位、是否存在信号肽及其互作蛋白进行分析预测。通过PCR扩增p59蛋白编码基因,经酶切连接表达载体pET-30a（+）后转化入大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达并进行优化,利用不同浓度咪唑洗脱液来洗脱蛋白。通过Western blot进行鉴定。制备p59重组蛋白兔多抗,通过粘附试验和支原体生长抑制试验验证该重组蛋白的功能。结果生物信息学分析该蛋白可能为ABC转运系统的组成蛋白,其互作蛋白为糖、微量元素摄取的ABC转运系统相关蛋白,可能参与牛支原体摄入营养物质的过程。PCR扩增p59基因,双酶切及测序鉴定pET-30a（+）-p59原核表达载体构建正确,SDS-PAGE分析重组载体转化BL21表达p59重组蛋白,相对分子质量为66×103。Western blot鉴定该蛋白为膜蛋白,免疫新西兰兔可刺激产生特异性抗体,即具有抗原性。p59蛋白粘附MDBK细胞试验显示,用p59兔多抗作为一抗时的MDBK（Madin-Darby bovinekidney,牛肾细胞）细胞表面能够粘附更多的P59蛋白,表明p59重组蛋白具有一定的粘附能力。生长抑制试验表明,p59兔多抗能抑制牛支原体在固体培养基中的生长,生长抑制率为45.53%。结论新鉴定的牛支原体膜蛋白p59可能是一种粘附相关蛋白,且具有抗原性,该蛋白多抗血清能抑制支原体的生长,为研究支原体膜蛋白的功能奠定了基础,为牛支原体亚单位疫苗的研制提供了新的靶蛋白。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 蒋仁新,王基隆,朱曼玲,程凯慧,解晓莉,杨宏军,丁家波,刘磊,张亮
关键词: 牛支原体,重组蛋白,生物信息学分析
来源: 中国病原生物学杂志 2019年11期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技,基础科学,农业科技
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 甘肃农业大学动物医学院,山东省农业科学院奶牛研究中心,中国兽医药品监察所
基金: 十三五国家重点研发计划项目(No.2017YFD0500904,2016YFD0500902,2016YFD0500904),现代农业(奶牛)产业技术体系科学家岗位项目(No.CARS-36),山东省农业科学院农业科技创新工程项目(No.CXGC2016A10)
分类号: S852.62
DOI: 10.13350/j.cjpb.191105
页码: 1261-1267+1272
总页数: 8
文件大小: 1677K
下载量: 127