论文摘要
构建高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。将来源于pET28a的T7-lac操纵子与来源于pSY6的Ⅱ型内含子组装构建大肠杆菌IPTG诱导型Targetron质粒系统。以lacZ基因为例,选择lacZ-635s和lacZ-1063a两个位点为靶位点,利用构建的IPTG诱导型Targetron系统进行基因打靶,通过分析诱导前和诱导后Ⅱ型内含子在靶位点的插入效率,验证大肠杆菌IPTG诱导型Targetron系统严谨性和打靶效率。最后,通过优化诱导剂浓度及诱导时间,建立高效严谨的诱导型大肠杆菌Targetron基因打靶系统。在没有IPTG诱导时,Ⅱ型内含子在两个位点均不能插入,打靶效率均为0;当加入0.5 mmol/L IPTG诱导45 min时,其在lacZ-635s位点的打靶效率提高到90.8±5.5%,在lacZ-1063a位点的打靶效率提高到92.6±2.4%。成功建立高效严谨型大肠杆菌Targetron基因打靶系统,旨为Ⅱ型内含子的机理研究及应用奠定基础。
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文章来源
类型: 期刊论文
作者: 陈相好,刘芳,王彩霞,陈峥宏,洪伟,蔡梦迪,张峥嵘,綦廷娜,廖永慧,谷俊莹,崔古贞
关键词: 型内含子,诱导系统,大肠杆菌
来源: 生物技术通报 2019年06期
年度: 2019
分类: 基础科学,农业科技
专业: 生物学
单位: 贵州医科大学医学检验学院,贵州医科大学基础医学院,贵州省普通高等学校病原生物学特色重点实验室,贵州医科大学分子生物学重点实验室,贵州医科大学附属医院
基金: 国家自然科学基金项目(31500078,31560318,31601012,31760318),贵州省科技计划项目(黔科合基础[2018]1132),贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教合KY字[2014]216),贵州省研究生科研基金立项项目(11348),贵州省大学生创新创业训练计划项目(201710660022)
分类号: Q78
DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2018-0883
页码: 213-220
总页数: 8
文件大小: 1664K
下载量: 144
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