以包膜糖蛋白gB/D为抗原的2型单纯疱疹病毒新型疫苗的研究

以包膜糖蛋白gB/D为抗原的2型单纯疱疹病毒新型疫苗的研究

论文摘要

2型单纯疱疹病毒(HSV-2)是一种世界范围内传播的最常见的性传播病毒之一,具有嗜神经性,通过潜伏在神经元细胞中而在体内持续存在。生殖器疱疹是2型单纯疱疹病毒引起的一种疾病,通常是通过直接接触被感染者皮肤表面或分泌物进行传播的,但由于HSV-2病毒通常与艾滋病病毒(HIV)协同感染,因此常能增加HIV感染风险3-4倍。单纯疱疹病毒具有一次感染,终身潜伏,反复复发的特点,光照、免疫功能下降,压力等都会造成病毒的复发。目前针对HSV-2病毒没有有效的疫苗来预防或治疗,感染HSV-2病毒后只能通过服用抗病毒药物,如阿昔洛韦等来进行治疗,但由于病毒感染时常伴随无症状脱落或轻微瘙痒,患者并不知道自己已经患病,使HSV-2病毒的预防变得极为困难,且长期服用抗病毒药物也容易造成耐药突变病毒株的产生,因此对于HSV-2病毒疫苗的研究变得非常重要。由于HSV-2病毒具有感染后潜伏并复发的现象,因此HSV-2病毒的疫苗分为预防性疫苗和治疗性疫苗两大类。预防性疫苗的目的是诱导机体产生中和抗体,预防HSV-2病毒的感染,防止病毒的潜伏,常用小鼠作为动物模型,而治疗性疫苗的目的是诱导机体细胞免疫应答,主要用于已经感染了HSV-2病毒的患者,通过细胞免疫清除机体内复发的病毒,以及通过缓解病毒复发时的症状产生来降低患者的痛苦,常用豚鼠作为动物模型。本实验分别研究了HSV-2病毒的预防性及治疗性疫苗在小鼠和豚鼠模型中的免疫原性及保护作用。(1)构建了两种质粒分别为Ucoe-mgB和Ucoe-gBFerritin,并验证了两种质粒在真核细胞293T中的表达。(2)使用293 6E细胞大量表达两种蛋白,并与DNA疫苗联合免疫小鼠,评价免疫原性及针对致死剂量攻毒的小鼠的保护力。(3)使用本实验室构建的重组腺病毒疫苗rAd-gD,rAd-△UL25,rAd-gD-△UL25免疫半数致死剂量攻毒的豚鼠,评价重组腺病毒疫苗对于豚鼠的保护力。结果表明:(1)在DNA疫苗的水平上,Ferritin的引入没有提升gB的免疫原性。(2)DNA疫苗与DNA-蛋白联合疫苗对于诱导细胞免疫和体液免疫水平上各有优势,细胞免疫对于清除体内初次感染后二次复制出的病毒具有很好的清除作用,而体液免疫对于初次感染的病毒具有杀伤作用,且几种疫苗均诱导Th1偏向的Th细胞免疫。(3)重组腺病毒疫苗可以诱导豚鼠产生特异性抗体和中和抗体,引入UL25作为免疫原后可以更好的保护豚鼠,可以降低病毒复发的频率,在病毒复发时抑制病理状况的产生。

论文目录

  • 中文摘要
  • Abstract
  • 第一章 :前言
  •   1.1 2型单纯疱疹病毒及生殖道疱疹
  •     1.1.1 生殖器疱疹
  •     1.1.2 HSV-2 病毒的结构
  •     1.1.3 HSV-2 病毒的感染,复制与逃逸
  •   1.2 2型单纯疱疹病毒的治疗
  •     1.2.1 单纯疱疹病毒的药物治疗
  •     1.2.2 单纯疱疹病毒疫苗的研究
  •   1.3 铁蛋白载体在疫苗中的应用
  •   1.4 动物模型的应用及意义
  •   1.5 论文的立题依据及论文设计
  •     1.5.1 论文的立题依据
  •     1.5.2 实验思路与实验设计
  • 第二章 :实验材料
  •   2.1 相关引物设计
  •   2.2 质粒、菌种、蛋白、细胞和病毒
  •   2.3 相关试剂盒
  •   2.4 主要试剂及缓冲溶液配制方法
  •     2.4.1 主要试剂
  •     2.4.2 主要缓冲液配方
  •   2.5 仪器
  •   2.6 实验动物
  • 第三章 :预防性DNA疫苗研究实验方法及结果分析
  •   3.1 预防性DNA疫苗研究实验方法
  •     3.1.1 DNA疫苗质粒构建、表达、纯化、扩增及鉴定
  •     3.1.2 预防性DNA疫苗Balb/C小鼠动物免疫
  •     3.1.3 预防性DNA疫苗免疫原性评价
  •     3.1.4 预防性疫苗保护力评价
  •   3.2 预防性DNA疫苗研究实验结果
  •     3.2.1 DNA疫苗质粒构建、表达、纯化、扩增及鉴定
  •     3.2.2 预防性疫苗免疫原性评价
  •     3.2.3 预防性疫苗保护力评价
  •   3.3 预防性疫苗研究讨论
  • 第四章 :治疗性疫苗研究实验方法及结果分析
  •   4.1 治疗性疫苗研究实验方法
  •     4.1.1 重组腺病毒载体疫苗动物免疫
  •     4.1.2 重组腺病毒载体疫苗免疫原性评价
  •     4.1.3 重组腺病毒载体疫苗保护力评价
  •   4.2 治疗性疫苗研究实验结果
  •     4.2.1 重组腺病毒载体疫苗免疫原性评价实验结果
  •     4.2.2 重组腺病毒载体疫苗保护力评价
  •   4.3 治疗性疫苗研究讨论
  • 全文结论
  • 参考文献
  • 作者简介
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 万明明

    导师: 姜春来

    关键词: 型单纯疱疹病毒,疫苗,预防性疫苗,重组腺病毒疫苗,治疗性疫苗

    来源: 吉林大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 吉林大学

    分类号: R392-33

    总页数: 68

    文件大小: 3238K

    下载量: 139

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