论文摘要
BBSome蛋白复合物是纤毛蛋白组分之一,BBSome组装或纤毛运输缺陷可导致巴-比二氏综合征。其中,BBSome组分BBS2缺失已被临床证明是导致BBS的病因之一。莱茵衣藻是研究BBSome组装和纤毛运输的一种很好的模式生物。为深入研究BBS2的致病机制,需要特异性识别其BBS2蛋白的抗体。本文将莱茵衣藻BBS2基因5’端399 bp的cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a-bbs2,转入大肠杆菌BL21（DE3）细胞进行诱导表达。在8 mol/L尿素存在的情况下对该融合蛋白进行镍柱亲和纯化,并将纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔。SDS-PAGE电泳结果表明:分子量为15 kDa的重组6×His-BBS2融合蛋白为水不溶性蛋白。5次免疫后的抗莱茵衣藻BBS2抗血清效价高达1∶256 000。经Protein A琼脂糖CL-4B亲和纯化后的抗血清不仅在Western blotting分析中能特异性识别莱茵衣藻BBS2,而且在免疫荧光染色分析中能精确定位BBS2于基体和纤毛内。这一多克隆抗体的成功制备为深入开展BBS2在BBSome组装和纤毛运输中的分子作用机制提供了基础。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 董彬,吴松,程荣强,孟德梅,樊振川
关键词: 莱茵衣藻,纤毛,原核表达,蛋白纯化,多克隆抗体
来源: 食品与生物技术学报 2019年02期
年度: 2019
分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学
专业: 生物学
单位: 天津科技大学食品工程与生物技术学院教育部食品营养与安全重点实验室,天津科技大学新农村发展研究院
基金: 天津市应用基础与前沿技术研究计划(13JCYBJC41900),天津科技大学引进人才科研启动费(20130420)
分类号: Q78
页码: 145-152
总页数: 8
文件大小: 1546K
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