导读:本文包含了四环素调控系统论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:四环,基因,系统,转染,诱导,霉素,干扰。
四环素调控系统论文文献综述
张晟,黎海燕,廉梅,刘宇,肖东[1]（2019）在《基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体》一文中研究指出基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3'端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显着升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2019年08期）
李鸿茹,涂洵崴,翁丽红,陈愉生[2]（2018）在《四环素调控livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响》一文中研究指出目的:探讨四环素调控(Tet-on)livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观察其抑制肺癌细胞增殖情况。结果:经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-onNC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[(5.31±0.86)vs(8.22±0.63)、(7.17±0.54)g,P<0.05];提示该调控系统可显着下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡。结论:Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提供重要的研究工具。(本文来源于《中国肿瘤生物治疗杂志》期刊2018年03期）
于晓俊,曹绍玉,董玉梅,毕保良,张应华[3]（2017）在《基于四环素调控系统的叶绿体启动子在大肠杆菌中活性检测》一文中研究指出旨在研究四环素调控系统在叶绿体基因工程中调控启动子活性。以四环素基因及四环素特异性识别序列的核心操控区为基础,首先合成带有四环素核心操控区的prrn O1O2启动子,通过酶切连接的方法连接到表达载体Bio3-GFP,并在大肠杆菌中验证该启动子的活性。结果表明,在该启动子的驱动下GFP基因表达使菌落呈明亮绿色;构建四环素诱导下GFP基因的表达载体Bio3-Tet R-prrn O1O2-GFP,筛选出适应大肠杆菌生长的最高四环素使用浓度为5μg/m L;然后构建四环素调控系统下的GFP表达载体,在未加入四环素时,prrn O1O2启动子的功能被抑制,加入四环素后,GFP基因表达出绿色荧光蛋白。说明利用四环素调控系统可以在大肠杆菌中控制叶绿体启动子prrn O1O2的活性,从而避免了核基因组对质体基因组的调控干扰,为进一步利用质体基因工程育种提供有效的方法和途径。(本文来源于《生物技术通报》期刊2017年02期）
牟丽莎,朱书,蔡志明[4]（2016）在《靶向长链非编码RNA TUC338的人工合成四环素调控系统在膀胱癌细胞中的作用》一文中研究指出目的:探讨应用四环素调控长链非编码RNA TUC338在膀胱癌细胞内的表达及抗肿瘤作用。方法:将针对TUC338的sh RNA序列插入到四环素诱导系统的下端,构建四环素诱导的TUC338 sh RNA并转染细胞。应用实时荧光定量PCR检测细胞内TUC338的表达水平,采用CCK8和半胱天冬酶3酶联免疫吸附测定法的方法分别检测细胞的增殖和凋亡。结果:四环素诱导的TUC338 sh RNA可以降低TUC338的表达,抑制膀胱癌细胞增殖和促进膀胱癌细胞的凋亡。结论:通过构建四环素基因表达调控系统,可精确控制TUC338在膀胱癌细胞内表达,并发挥杀伤肿瘤细胞功能,为进一步构建特异、高效的膀胱癌合成生物治疗器件提供理论基础。(本文来源于《深圳中西医结合杂志》期刊2016年19期）
吴亮,薛兰兰,王晓,吴腊梅,姜旭淦[5]（2014）在《用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株》一文中研究指出目的构建基于四环素诱导调控表达系统的刚地弓形虫β-酮脂酰ACP合成酶(FABZ)缺陷株。方法从弓形虫基因组中扩增fabz基因并构建四环素调控诱导表达载体pTetO7-Sag1-FABZ-Ty-DHFR,电穿孔法导入弓形虫TATi株,通过乙胺嘧啶抗性和极限稀释法筛选FABZ缺陷株,蛋白质印迹(Western blotting)检测虫体内附加表位标签Ty的表达。在5×105个FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素(终浓度为1μg/ml),Western blotting检测带有Ty标签的FABZ表达情况。结果筛选获得的缺陷株可表达带有Ty标签的转运肽型FABZ和成熟型FABZ。FABZ缺陷株弓形虫速殖子培养液中加入脱水四环素24 h和48 h后,转运肽型FABZ表达量均较对照组显着降低(P<0.05)。结论构建了由脱水四环素调控表达的弓形虫FABZ缺陷株。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2014年04期）
李方圆,韩树堂,刘星[6]（2013）在《四环素诱导调控的腺病毒载体系统的构建及其应用》一文中研究指出目的构建四环素诱导调控基因表达的腺病毒载体系统,评估该载体系统的高效性。方法利用PCR、限制性内切酶酶切、连接等分子生物学手段构建四环素诱导调控体系中调节因子序列、应答元件序列的穿梭载体。通过同源重组的方法将载体上的四环素调控因子以及应答元件序列整合于腺病毒基因组。利用RT-PCR检测病毒载体上四环素调节因子(rtTA和tTA)在Hela细胞中的转录水平;荧光素酶活性测定分析腺病毒载体系统的效率。在不同浓度强力霉素的诱导下,检测荧光素酶报告基因活性变化,分析可诱导调控腺病毒系统的有效性和敏感性。结果调控性腺病毒AdrtTA~(Tet-on)与Ad-tTA~(Tet-off)分别感染Hela细胞,逆转录PCR检测鉴定腺病毒载体Ad-rtTA~(Tet-on)与Ad-tTA~(Tet-off)的表达克隆用于调控应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC。在强力霉素的诱导下调控性腺病毒Ad-rtTA~(Tet-on)与Ad-tTA~(Tet-on)能够开启或关闭应答性腺病毒Ad-TREmod/minCMinCMV△-LUC、Ad-TREmod/U6-shLUC的表达,从而达到调控荧光素酶的表达或RNA干扰荧光素酶基因的目的。结论构建可诱导调控的腺病毒载体系统,该系统能够在强力霉素的调控下开/关目的基因、特异性干扰目的基因shRNA片段的表达。(本文来源于《兰州大学学报(医学版)》期刊2013年03期）
杜晓媛[7]（2013）在《四环素调控表达系统调节LEF1基因在成纤维细胞中的表达》一文中研究指出四环素(tetracycline, Tet)调控诱导表达系统是近年来发展起来的具有高效、严密开关功能的基因表达调控系统,诱导物是四环素或四环素衍生物,通过诱导物可以从时空角度上特异性地控制外源基因在转基因细胞和转基因动物中的表达。本实验应用Tet-on系统,构建四环素调控淋巴样生长因子基因(LEF-1)表达的表达载体,并与Tet-on系统中的诱导表达载体pcDNA6共转染绒山羊胎儿皮肤成纤维细胞。通过四环素诱导来检测LEF1基因在mRNA水平的表达量。下图是对四环素诱导系统的简单介绍：四环素诱导调控表达系统主要包括调控表达载体pcDNA4和反应表达载体pcDNA6两种质粒。调控表达载体pcDNA4主要由启动子,操纵序列和目的基因组成；反应表达载体pcDNA6通过启动子表达阻遏蛋白TetR。将pcDNA4和pcDNA6两质粒通过共转染的方法转染体外培养的细胞后,pcDNA6载体表达的阻遏蛋白TetR与表达载体pcDNA4上的操纵序列结合,阻遏了目的基因的表达。当细胞培养液中四环素Tet或四环素衍生物强力霉素(DOX)存在时,可与pcDNA4的操纵序列结合,从而引起阻遏蛋白TetR构想发生变化,从操纵序列上脱落下来,最终诱导目的基因的转录。1LEF1基因毛囊特异性表达载体pcDNA4-KL的构建本研究应用四环素调控诱导表达系统,以系统中的调控表达载体pcDNA4为基本骨架,选用角蛋白关联蛋白KAP6.1基因启动子为构建最终表达载体的启动子,启动目的基因淋巴样生长因子LEF1基因。KAP6.1基因启动子片段及LEF1基因片段的获得是通过PCR扩增法,分别以现有的表达载体pcDsRed2-KV和载体pCDsRed2-KL为模板,使用LA TAq DNA聚合酶合成相应片段。将四环素调控表达系统中的表达载体pcDNA4/TO通过相应限制性内切酶酶切,以及T4连接酶将目的片段连接后,得到的新的载体为修改后的载体,与原pcDNA4/TO载体相比,删除了部分序列。然后用PCR扩增出的角蛋白关联蛋白KAP6.1基因启动子片段替换载体中的原始启动子CMV片段,淋巴样生长因子I(LEF1)片段插入修改后的表达载体pcDNA的多克隆位点(MCS)。实验在构建载体pcDNA4-KL的过程中,角蛋白关联蛋白KAP6.1基因启动子与pMD19T连接,重组质粒经过限制性内切酶酶切电泳,发现片段大小及连接都正确。从而可以进一步检测片段序列,更好行驶基因功能,发挥在载体上的作用。挑选重组质粒并编号委托上海生工生物有限公司测序,应用生物专用软件genebank,查找LEF1基因序列,与测序结果相比对,结果证明正确。淋巴样生长因子I(LEF1)片段的检测与KAP6.1启动子片段一样,结果证明也正确。将测序正确的pMD19-TK与修改后的pcDNA4两质粒用NdeI和MluI两限制性内切酶双酶切后,用T4连接酶连接相应的目的片段,经过酶切鉴定KAP6.1基因启动子片段正确连入载体pcDNA4启动子区域,得到载体pcDNA4-K。BamHI和EcoRI两限制性内切酶双酶切pMD19T-L和pcDNA4-K, T4连接酶连接相应的目的片段,经酶切鉴定LEF1基因片段正确插入载体pcDNA4-K的MCS位点上。为下一步与四环素调控表达系统中的表达载体pcDNA6共同转染细胞奠定了基础。2胎儿皮肤成纤维细胞培养及共转染在体外分离培养胎儿皮肤成纤维细胞,并且进行双载体共转染细胞实验。配置含有10%FBS的DMEM/F12的细胞培养液,培养原代胎儿皮肤成纤维细胞,于37℃、5%CO2饱和湿度条件下培养；当细胞生长铺满整个培养皿后,冷冻保存细胞。配置细胞冷冻保存液,即10%DMSO+90%FBS。利用脂质体Lipoftaecmine TM介导法,将表达载体pcDNA4-KL和诱导表达载体pcDNA6共转染绒山羊第二代胎儿成纤维细胞,用合适的抗生素Blasticidin和博莱霉素Zeocin两种抗生素浓度共同筛选细胞,筛选12后得到单克隆细胞。0.25%胰酶消化单克隆细胞扩大培养,待细胞长满整个皿后,提取其基因组DNA,进行PCR鉴定。Blasticidin浓度为13μg/ml及Zeocin浓度为1500μg/ml的两种抗生素共同筛选12天,获得单克隆细胞。利用克隆杯胰酶消化法,将单克隆细胞扩大培养,用普通基因DNA提取试剂盒提取细胞基因组DNA,经PCR扩增电泳鉴定表达载体pcDNA4-KL已与细胞基因组稳定整合,同时表达载体pcDNA6与细胞基因组也稳定整合。可以进行下一步的四环素诱导及检测。3四环素诱导目的基因LEF1在皮肤成纤维细胞中的表达设置诱导物四环素(Tet)在不同浓度(0ug/ml,1ug/ml,10ug/ml,20ug/ml)下,对转有毛囊特异性表达载体pcDNA-KL和诱导表达载体pcDNA6的转基因细胞,于10%FBS+DMEM/F12培养液、37℃、5%CO：、饱和湿度条件下进行培养诱导。24h后,提取不同四环素诱导下的细胞RNA,经过反转录成cDNA,通过实时方法来检测淋巴样增强因子(LEF1)在mRNA水平上的表达,确定四环素的最佳浓度。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2013-04-01）
常德,由磊,李开龙,潘春晓,刘长庭[8]（2012）在《四环素调控系统在肿瘤细胞株中的建立和鉴定》一文中研究指出目的建立受四环素及其衍生物强力霉素(doxycycline,DOX)诱导调控的高表达外源目的基因的人胰腺癌细胞株。方法构建高效表达转录激活因子(tTA)的真核表达载体,利用脂质体转染法导入人胰腺癌细胞株PANC-1,经嘌呤霉素筛选后挑取单克隆扩大培养,利用荧光素酶报告基因系统筛选受强力霉素诱导调控的高表达外源目的基因的PANC-1细胞株(Tet-off细胞株),并利用RT-PCR和免疫荧光细胞化学法检测tTA在Tet-off细胞株中的表达。结果荧光素酶报告基因技术、RT-PCR和免疫荧光化学染色法检测均表明成功构建了叁株受强力霉素高度调控的高表达低背景的PANC-1细胞株。结论成功获得含四环素调控系统的Tet-off人胰腺癌细胞株,其调控活性好、背景低,为研究外源基因功能提供了一条有效途径。(本文来源于《军医进修学院学报》期刊2012年09期）
彭晓慧,毛宣,汤顺清[9]（2012）在《受四环素调控的真核表达系统SK-Hep1细胞株的建立》一文中研究指出建立稳定、高效表达外源基因的SK-Hep1细胞株,以便进一步研究基因的作用。首先将调控质粒pCDNA6/TR转染SK-Hep1细胞,经潮霉素筛选得到多个稳定单克隆。各个单克隆分别扩大培养后,转染pCDNA4/TO/lacZ质粒,再经过DOX(强力霉素)诱导表达,检测β-半乳糖苷酶(β-D galaetosidase,β-gal)活性,从而筛选出高诱导水平低背景表达的SK-Hep1 tet-on细胞株。最后,再将pCDNA4/TO/c-myc质粒转染进SK-Hep1 tet-on细胞株,进一步通过Western blotting检测该系统对下游基因的表达调控。成功建立了一株受DOX调控的高诱导水平低背景表达的细胞株SK-Hep1 tet-on 10#。(本文来源于《生物技术通报》期刊2012年02期）
宫秀群,马敏敏,徐格林[10]（2012）在《四环素基因调控系统的研究进展》一文中研究指出四环素基因调控系统(Tet系统)是迄今为止基因治疗研究中使用最广泛的系统,该系统通过改变培养基、体内四环素或其衍生物(如强力霉素)的浓度,诱导或抑制目标基因的表达。(本文来源于《基础医学与临床》期刊2012年02期）
四环素调控系统论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨四环素调控(Tet-on)livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响,以期寻找更优的肺癌干预调控系统。方法:构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体,在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型,以Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达,并以四环素腹腔注射诱导处理,了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观察其抑制肺癌细胞增殖情况。结果:经四环素诱导,Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-onNC组,且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[(5.31±0.86)vs(8.22±0.63)、(7.17±0.54)g,P<0.05];提示该调控系统可显着下调livin的表达,并抑制肺癌皮下移植瘤的生长,且该调控系统毒副作用小,未发现裸鼠死亡。结论:Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长,具有靶向性、可调控的特点,为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提供重要的研究工具。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
四环素调控系统论文参考文献
[1].张晟,黎海燕,廉梅,刘宇,肖东.基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体[J].动物医学进展.2019
[2].李鸿茹,涂洵崴,翁丽红,陈愉生.四环素调控livinRNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响[J].中国肿瘤生物治疗杂志.2018
[3].于晓俊,曹绍玉,董玉梅,毕保良,张应华.基于四环素调控系统的叶绿体启动子在大肠杆菌中活性检测[J].生物技术通报.2017
[4].牟丽莎,朱书,蔡志明.靶向长链非编码RNATUC338的人工合成四环素调控系统在膀胱癌细胞中的作用[J].深圳中西医结合杂志.2016
[5].吴亮,薛兰兰,王晓,吴腊梅,姜旭淦.用四环素诱导调控表达系统构建弓形虫脂肪酸合成酶FABZ缺陷株[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2014
[6].李方圆,韩树堂,刘星.四环素诱导调控的腺病毒载体系统的构建及其应用[J].兰州大学学报(医学版).2013
[7].杜晓媛.四环素调控表达系统调节LEF1基因在成纤维细胞中的表达[D].内蒙古大学.2013
[8].常德,由磊,李开龙,潘春晓,刘长庭.四环素调控系统在肿瘤细胞株中的建立和鉴定[J].军医进修学院学报.2012
[9].彭晓慧,毛宣,汤顺清.受四环素调控的真核表达系统SK-Hep1细胞株的建立[J].生物技术通报.2012
[10].宫秀群,马敏敏,徐格林.四环素基因调控系统的研究进展[J].基础医学与临床.2012
论文知识图
