导读:本文包含了串联表达论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:阿留申病毒,VP2蛋白,表位基因,原核表达
串联表达论文文献综述
秦飞燕,孙杰,马凡舒,王洋,柏玲[1]（2019）在《水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价》一文中研究指出为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2019年11期）
余婷婷[2]（2019）在《生活生成素材 思维引领表达——何捷老师习作教学“素材的串联组合”赏析》一文中研究指出在"素材的串联组合"习作教学中,何捷老师构思巧妙:基于写作原理,注重写作心理学的准确运用;基于教学重点,注重以生活经验达成认知支架;铺垫足够认知,启动思维和表达的滑翔。(本文来源于《四川教育》期刊2019年20期）
蔺艳君,董彬[3]（2019）在《β-防御素130在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析》一文中研究指出为了研究抗菌肽β-防御素130的生物学活性和实现大规模制备,通过改良其分子结构,构建表达载体pET28a-3×β-defensin130,利用大肠杆菌BL21 (DE3)作为宿主细胞诱导表达后为水溶性蛋白。对纯化后抗菌肽进行抑菌实验、稳定性实验、MTT实验和溶血性实验确定其生物活性。最终成功制备出25 kDa的重组蛋白,对金黄色葡萄球菌(ATCC25923)(45μg/mL)和单增李斯特菌(ATCC221633)(80μg/mL)等革兰氏阴性和阳性菌都表现出极强的抗菌活性,且其抗菌活性不受温度、pH值和蛋白酶消化等影响,MTT细胞毒性实验显示其对HEK293细胞无毒性且对兔源红细胞具有极低的溶血性。这将为新型抗菌肽的开发提供理论基础并推动抗生素替代产业快速发展。(本文来源于《生物工程学报》期刊2019年06期）
布日额,陈金龙,叶俊,吴金花,锡林高娃[4]（2019）在《牛结核分枝杆菌早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83基因的串联表达及其抗原性鉴定》一文中研究指出为获得一种具有抗原性的牛结核分枝杆菌(MB)感染早期标识物MPB70、MPB83分泌性蛋白的串联抗原蛋白,本研究利用DNAStar生物信息软件对MB感染早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83抗原结构区域进行预测后设计合成相应引物,并在两个片段之间引入16位柔性多肽,通过重迭延伸PCR技术获得MBP70与MBP83基因的抗原优势区核苷酸串联片段,将其连接至原核表达载体pGEX-6p-1中经诱导、表达,结果显示构建的重组表达载体获得高效表达,目的抗原蛋白的分子质量约58 ku,纯化后重组蛋白的纯度>90%,经免疫BALB/c小鼠4次后,抗体效价达到1∶51 200。本实验获得了具有明显抗原活性的MB感染早期分泌性蛋白串联抗原MPB70+MPB83,为后续进一步研发MB早期感染标识物快速检测试剂盒奠定了基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年06期）
王琪[5]（2019）在《河南华溪蟹金属硫蛋白串联表达和工程菌富集与耐受重金属的研究》一文中研究指出金属硫蛋白(Metallothionein,MTs)是一类低分子量且富含半胱氨酸的金属结合蛋白,在保持体内必需金属元素平衡以及解除重金属毒性方面起重要作用。本课题组前期从河南华溪蟹(Sinopotamon henanense)中成功克隆出镉诱导的MT cDNA全长。为提高MTs的金属结合效率以及深入研究MTs的金属结合特性,实验采用基因串联方法,利用重迭延伸PCR(SOE-PCR)技术将两个和叁个拷贝的蟹MT基因串联整合,生物合成2MT、3MT基因片段;利用SUMO融合表达系统构建pET28a-SUMO-2MT、pET28a-SUMO-3MT重组表达质粒,以增加重组蛋白的稳定性和溶解度;亲和层析纯化得到的融合蛋白SUMO-MT、SUMO-2MT、SUMO-3MT经Tris-HCl缓冲液脱盐、超滤管浓缩,与体外金属再生,紫外光谱扫描检测金属簇吸收峰;最后,采用火焰原子分光光度法检测转MT、2MT、3MT工程菌富集Cu~(2+)、Cd~(2+)、Zn~(2+)重金属离子的能力;通过药敏实验和菌体生长曲线测定,检测转MT、2MT、3MT工程菌对Cu~(2+)、Cd~(2+)、Zn~(2+)重金属离子的耐受能力。研究结果如下:1.河南华溪蟹金属硫蛋白串联表达载体的构建DNA测序证实,经SOE-PCR技术扩增得到的2MT、3MT基因片段不存在核苷酸替换、无突变。实验表明,重组质粒pET28a-SUMO-2MT和pET28a-SUMO-3MT构建成功。2.河南华溪蟹金属硫蛋白串联体的优化表达与纯化实验通过对诱导条件的筛选,优化了SUMO原核表达系统,最终确定融合蛋白SUMO-MT、SUMO-2MT和SUMO-3MT的最适诱导条件分别为37℃,1mM IPTG、30℃,0.7 mM IPTG、30℃,0.7 mM IPTG。诱导8 h后,融合蛋白获得可溶性表达,其分子质量分别约为28 kDa、36 kDa和42 kDa。SDS-PAGE检测结果证明蛋白纯化效果良好,已去除大部分杂蛋白;紫外分光光度计分别在220 nm、245 nm、270 nm波长处检测到了特殊的金属簇吸收峰,证明apo-MT、apo-2MT、apo-3MT具有与Zn、Cd和Cu结合的能力。3.转金属硫蛋白及其串联体工程菌对重金属的富集与耐受火焰原子分光光度计检测结果显示:转MT、2MT、3MT工程菌对Cu、Cd、Zn的富集作用均极显着高于野生菌(P<0.01),且对重金属的富集强度依次为转3MT工程菌?转2MT工程菌?转MT工程菌?野生菌。转3MT工程菌对Cu、Cd和Zn的生物富集能力分别是野生菌的5.8倍、3.1倍和6.7倍。药敏实验结果显示:与野生菌相比,转MT工程菌、转2MT工程菌和转3MT工程菌对不同浓度的Cu、Cd、Zn均具耐受性,且转3MT工程菌对重金属的耐受能力最强。转工程菌生长曲线测定结果显示:转MT工程菌、转2MT工程菌和转3MT工程菌在不同时间段测定得到OD_(600)数值均明显高于野生菌,在重金属Cu、Cd、Zn的胁迫下,各工程菌的生长繁殖能力依次为:转3MT工程菌?转2MT工程菌?转MT工程菌?野生菌。以上研究结果证明:MTs串联重组体的可溶性表达可显着增强工程菌对Cu、Cd和Zn的富集和耐受。研究结论如下:本研究通过重迭延伸PCR(SOE-PCR)成功串联了两个和叁个拷贝的蟹MTs基因,并在大肠杆菌中表达。通过SUMO融合表达系统,增加了重组串联SUMO-MTs的可溶性表达。MTs基因的串联表达显着增强了工程菌对重金属的生物富集能力,同时也显着增强了重组工程菌的金属耐受性。结果表明,转蟹多拷贝金属硫蛋白工程菌可以作为重金属污染生物修复的候选材料。(本文来源于《山西大学》期刊2019-06-01）
苏丹丹,张勇,毕方方,肖波[6]（2019）在《肌萎缩侧索硬化患者的脑脊液存在差异表达蛋白:基于串联质谱标签方法》一文中研究指出目的基于串联质谱标签(TMT)技术,从蛋白质组学层面研究肌萎缩侧索硬化(ALS)患者脑脊液(CSF)中的差异性表达蛋白,探讨ALS发病的机制和相关作用途径。方法选取2017年11月～2018年4月于中国人民解放军联勤保障部队第928医院和中南大学湘雅医院神经内科就诊5例延髓起病ALS患者和5例肢体起病ALS患者,以5例偏头痛及低颅压头痛的患者为健康对照,分别获取CSF,利用串联质谱标签(TMT)技术鉴定CSF中差异性蛋白质,并进行生物信息学分析。结果共鉴定并定量1530种蛋白。延髓起病ALS患者中48种蛋白表达上调,6种蛋白表达下调;肢体起病ALS患者中16种蛋白表达上调,19种蛋白表达下调。GO分析显示这些蛋白均参与细胞生理过程、单器官过程和生物调节等过程,在细胞内和细胞外均有分布,且具有结合功能、催化活性和受体活性等。KEGG通路分析显示,延髓起病ALS患者CSF中上调蛋白参与溶酶体和代谢等3条通路。肢体起病ALS患者CSF中下调蛋白参与补体和凝血级联途径、金黄色葡萄球菌感染和单纯疱疹感染等7条通路,各通路均包含补体成分。结论延髓起病和肢体起病的ALS患者CSF中均存在差异性表达蛋白。溶酶体通路参与延髓起病ALS的发生和发展,免疫反应参与肢体起病ALS的发生和发展。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2019年04期）
庞洪泽,吴同垒,李蕴玉,李佩国,闫艳娟[7]（2019）在《血清4型禽腺病毒Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为了获得血清4型禽腺病毒(FAdV-4)六邻体蛋白(Hexon)和五邻体蛋白(Penton)的串联蛋白及其多克隆抗体血清,采用PCR方法从因FAdV-4致死的鸡肝脏中扩增出Hexon基因和Penton基因,使用重迭PCR将Hexon基因和Penton基因串联,得到Hexon-Penton(HP)串联基因,将HP基因导入表达载体pET32a(+),获得重组质粒pET32a-HP,将其转化表达菌株BL21经IPTG诱导表达,得到HP原核蛋白,经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,HP原核蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体血清。SDS-PAGE分析显示,HP原核蛋白分子质量约为108 ku,Western Blot结果显示,HP原核蛋白可与His标签抗体和多克隆抗体血清特异性识别,说明HP原核蛋白具有良好的免疫原性,为进一步建立FAdV-4的血清学检测方法奠定了基础。(本文来源于《中国家禽》期刊2019年07期）
王加圆[8]（2019）在《猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗原位点的串联表达及免疫效果评价》一文中研究指出猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒引起的一种急性、高度的肠道传染性疾病,其特征为哺乳仔猪严重水样腹泻、呕吐、脱水和高死亡率。本研究测定PEDV-HN13株S基因全序列,并对S1基因中具有多个抗原表位的区域进行串联,分别进行原核表达和真核表达,最后对两种蛋白作体液免疫效果的评价。具体研究内容如下:1.PEDV-HN13株S基因全序列分析根据PEDVCV777 S基因设计了 3对相互重迭的引物,以扩增PEDV-HN13株S基因全序列。利用RT-PCR扩增技术,获得目的基因,然后将其连接到pGEM-TEasy载体中;转化DH5α感受态细胞中。对阳性克隆进行测序,确定各片段的序列后拼接出S基因全序列。将PEDV-HN13株S基因全序列与其他国内外的24株PEDVS基因序列进行比较,并使用MEGA5.0软件绘制系统进化树。结果表明,25株PEDV可分为两个基因群即G I群和GⅡ群:GⅠ群主要由经典毒株组成,GⅡ群主要是由近年来的变异毒株组成,而PEDV-HN13 属于 G Ⅰ 群。2.PEDV部分S1抗原位点基因串联的原核表达通过生物信息学分析PEDV-HN13株S1蛋白,选取抗原性较强表位集中的两个区域,针对这两个区域设计2对引物,利用重迭延伸PCR技术扩增出串联基因,命名为PEDV-S1-F;将F基因克隆进pGEM-TEasy载体,通过测序分析显示与原始序列相一致。将酶切后的目的片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1上,获得重组表达质粒pGST-PEDV-S1-F,并在BL21感受态细胞中诱导表达。经1PTG诱导后,成功表达重组蛋白,蛋白的大小为36KD。经过SDS-PAGE和Western-blot鉴定后,目的蛋白存在于上清中。使用GST纯化试剂盒进行纯化获得条带单一、纯度高的重组蛋白。3.PEDV部分S1抗原位点基因串联的真核表达含有正确串联基因序列的阳性质粒与真核表达载体pFast-Bac-HTA分别进行双酶切,经胶回收后连接。连接产物转化DH5α感受态细胞,获得重组质粒pFast-PEDV-S1-F;并将其在DH10Bac感受态细胞中转座,经蓝白斑筛选和纯化,获得重组穿梭载体质粒Bacmid-PEDV-S1-F。将PCR鉴定正确的阳性质粒转染到Sf9昆虫细胞中,27℃培养7天左右收获病毒,经过叁次的病毒增殖,获得高滴度的重组杆状病毒。经过IFA、SDS-PAGE和Western-blot分析重组rBac-PEDV-S1-F杆状病毒,结果证明,重组rBac-PEDV-S1-F杆状病毒在Sf9昆虫细胞中得到了表达。4.两种不同系统表达的蛋白的免疫效果评价制备S1-F重组蛋白免疫原及表面展示S1-F重组杆状病毒的细胞性免疫原免疫Balb/c小鼠,首免后间隔14d免疫小鼠,共免疫叁次。分别在首免后14、28和42d采集小鼠血清。通过间接免疫荧光、微量细胞培养中和实验对免疫原刺激小鼠产生的体液免疫进行检测。结果表明,pGST-PEDV-S1-F蛋白免疫血清中存在特异性抗体,抗体效价达到1:200,并具有一定的中和能力,中和效价达到1:8。而rBac-PEDV-S1-F重组杆状病毒,抗体效价达到1:800,并具有一定的中和能力,中和效价也达到1:8。本研究将PEV-HN13 S1蛋白的抗原位点串联表达于原核和真核表达系统中,以用于PEDV疫苗的研发,并取得了一定初步成果,为PEDV基因工程疫苗的研发奠定了基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2019-04-01）
张忠宝,孙礼进,曾波,陈咏梅,张智[9]（2019）在《变形链球菌gtf S、gbp B基因的串联表达及其卵黄抗体的制备》一文中研究指出目的:串联表达变形链球菌毒力基因gtfS、gbpB的重组融合蛋白,将其作为免疫抗原制备特异性卵黄抗体,并研究该卵黄抗体的免疫活性。方法:以变形链球菌标准菌株UA159的基因组为模板,通过PCR方法扩增gtfS的CAT区和gbpB的SYI区,以SOE-PCR方法将其串联成基因片段CAT-SYI。在限制性内切酶EcoRⅠ-HF和XhoⅠ及T4 DNA连接酶的作用下构建重组质粒pET32a-CAT-SYI,转化表达菌株E. coli BL21,用1 mmol/L IPTG诱导表达后超声破碎重组菌,将提取纯化的重组融合蛋白免疫产蛋鸡并从鸡蛋中提取卵黄抗体,利用ELISA、Western blot和斑点杂交分析该抗体的特异性和免疫活性。结果:经PCR、SOE-PCR成功扩增出约750 bp的串联基因CAT-SYI,SDS-PAGE检测结果表明其表达产物约50 kD,与目的蛋白大小符合。ELISA间接法测得卵黄抗体的效价可达1∶100 000以上,Western blot鉴定结果显示IgY的特异性,在相对分子量约为35 kD和70 kD处出现相应的条带,斑点杂交检测结果显示特异性卵黄抗体具有识别变形链球菌的能力。结论:制备的特异性卵黄抗体具有良好的抗变形链球菌免疫活性,为免疫防龋奠定了基础。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊2019年06期）
黄勤勤,王慧梅,梁玲,黄钦耿,吴松刚[10]（2019）在《lysC定点突变及lysC、asdA串联表达对谷氨酸棒杆菌L-苏氨酸积累的影响》一文中研究指出lysC、asdA基因分别编码的天冬氨酸激酶(Aspartate kinase,AK)和天冬氨酸半醛脱氢酶(Aspartate semi-aldehyde dehydrogenase,ASD)是L-苏氨酸合成途径中两个关键限速酶基因,其中AK受到代谢产物赖氨酸与苏氨酸的协同抑制。以选育获得的一株谷氨酸棒状杆菌T11(Corynebacterium glutamicum T11)为出发菌株,通过构建lysC-asdA串联表达盒,并对其关键限速酶基因lysC进行定点突变,突变位点为Ala279Thr,获得抗反馈抑制突变型编码基因lysCr-asdA,将其插入含强启动子tac的穿梭表达载体pZ8-1中成功构建串联表达质粒pZ8-1-lysCr-asdA转化出发菌株,筛选获得工程菌株T11/pZ8-1-lysCr-asdA。摇瓶发酵其L-苏氨酸产量达到7.18 g/L,较出发菌株提高27.8%。进一步的30 L发酵罐补料分批发酵结果显示,发酵60 h L-苏氨酸产量达65.5 g/L,糖酸转化率达到39.5%,较出发菌株分别提高29.5%和33.9%,为后续的进一步构建高产L-苏氨酸的谷氨酸棒杆菌工程菌株提供强有力的基础。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年02期）
串联表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在"素材的串联组合"习作教学中,何捷老师构思巧妙:基于写作原理,注重写作心理学的准确运用;基于教学重点,注重以生活经验达成认知支架;铺垫足够认知,启动思维和表达的滑翔。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
串联表达论文参考文献
[1].秦飞燕,孙杰,马凡舒,王洋,柏玲.水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价[J].中国兽医学报.2019
[2].余婷婷.生活生成素材思维引领表达——何捷老师习作教学“素材的串联组合”赏析[J].四川教育.2019
[3].蔺艳君,董彬.β-防御素130在大肠杆菌中的串联表达、纯化及生物活性分析[J].生物工程学报.2019
[4].布日额,陈金龙,叶俊,吴金花,锡林高娃.牛结核分枝杆菌早期标识性分泌性蛋白MPB70、MPB83基因的串联表达及其抗原性鉴定[J].中国预防兽医学报.2019
[5].王琪.河南华溪蟹金属硫蛋白串联表达和工程菌富集与耐受重金属的研究[D].山西大学.2019
[6].苏丹丹,张勇,毕方方,肖波.肌萎缩侧索硬化患者的脑脊液存在差异表达蛋白:基于串联质谱标签方法[J].南方医科大学学报.2019
[7].庞洪泽,吴同垒,李蕴玉,李佩国,闫艳娟.血清4型禽腺病毒Hexon-Penton串联蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].中国家禽.2019
[8].王加圆.猪流行性腹泻病毒S1蛋白抗原位点的串联表达及免疫效果评价[D].扬州大学.2019
[9].张忠宝,孙礼进,曾波,陈咏梅,张智.变形链球菌gtfS、gbpB基因的串联表达及其卵黄抗体的制备[J].中国免疫学杂志.2019
[10].黄勤勤,王慧梅,梁玲,黄钦耿,吴松刚.lysC定点突变及lysC、asdA串联表达对谷氨酸棒杆菌L-苏氨酸积累的影响[J].生物技术通报.2019