大孔树脂吸附–交联法固定脂肪酶

论文摘要

【目的】为基于大孔树脂吸附结合环氧交联剂交联法固定脂肪酶等工业用酶奠定基础。【方法】使用大孔树脂吸附,而后环氧交联剂交联的方法进行脂肪酶的固定化,研究各因素对吸附–交联固定化的影响,并采用响应面法对固定化条件进行优化,制备固定化酶并考察其稳定性。【结果】筛选出大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂。最佳固定化条件为:吸附温度45℃,给酶量60 mg·g–1,交联温度30℃,交联时间12.5 h,pH6.36,交联剂体积分数为0.7%。由上述条件制备所得的固定化酶活力为565.31 U·g–1,酶活力回收率为32.16%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性和酸碱稳定性均有明显提升;连续操作10次,固定化酶活力仍保留34.86%,操作稳定性较好;4℃条件下储存30 d,固定化酶活力仍保留64.81%。【结论】大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂制备的固定化脂肪酶热稳定性、酸碱稳定性均得到显著提升,且具有良好的操作及储存稳定性。

论文目录

1 材料与方法

1.1 酶与主要试剂

1.2 仪器与设备

1.3 大孔树脂的预处理

1.4 脂肪酶的预处理

1.5 脂肪酶的吸附固定化

1.5.1 吸附过程

1.5.2 大孔树脂载体筛选

1.5.3 温度对吸附固定化的影响

1.5.4 缓冲液pH对吸附固定化的影响

1.5.5 给酶量对吸附固定化的影响

1.6 脂肪酶的交联固定化

1.6.1 交联过程

1.6.2 交联剂筛选

1.6.3温度对交联固定化的影响

1.6.4时间对交联固定化的影响

1.6.5交联剂用量对交联固定化的影响

1.7 响应面法优化固定化条件

1.7.1 Plackett-Burman（PB）法筛选主要影响因子

1.7.2 响应面试验优化固定化条件

1.8 分析方法

1.8.1 脂肪酶活力测定

1.8.2 固定化脂肪酶回收率的计算

1.8.3 相对酶活力

2 结果与分析

2.1 吸附试验的条件优化

2.1.1 固定化载体

2.1.2 吸附温度

2.1.3 pH

2.1.4 给酶量

2.2 交联试验的条件优化

2.2.1 交联剂

2.2.2 交联剂用量

2.2.3 交联时间

2.2.4 交联温度

2.3 响应面法优化固定化条件

2.3.1 PB试验结果

2.3.2 Box-Behnken试验结果

2.3.3 响应面验证试验

2.4 固定化脂肪酶的稳定性

2.4.1 热稳定性

2.4.2 酸碱稳定性

2.4.3 操作稳定性

2.4.4 储存稳定性

3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 钱明华,张继福,张云,孙爱君,于荣敏,朱建华,胡云峰

关键词: 脂肪酶,大孔树脂,环氧交联剂,聚乙二醇二缩水甘油醚,固定,响应面法

来源: 华南农业大学学报 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 暨南大学中药生物技术研究所,广东省中医院,中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室/广东省海洋药物重点实验室

基金: 中国科学院战略性先导科技专项(XDA11030404),广东省海洋渔业科技攻关与研发方向项目(A201701C12),广州市科技计划项目(201510010012)

分类号: Q814.2

页码: 103-110

总页数: 8

文件大小: 7212K

下载量: 449

大孔树脂吸附–交联法固定脂肪酶

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢