同时检测两种瓜类种传细菌的微滴数字PCR检测技术

同时检测两种瓜类种传细菌的微滴数字PCR检测技术

论文摘要

西瓜嗜酸菌(Acidovorax citrulli,简称Ac)和瓜类角斑病菌(Pseudomornas syringae pv.lachrymans,简称Psl)是引起瓜类细菌性果斑病和细菌性角斑病的重要种传细菌。带菌种子、种苗是病害长距离传播的主要途径,种子检测是预防和控制该病害的首要环节。本实验基于微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerize chain reaction,简称ddPCR)技术,建立了同时检测种子携带Ac和Psl两种病原细菌的方法。实验中平行测试比较了ddPCR和实时荧光定量PCR (real-time PCR)两种检测技术对两种细菌的检测灵敏度与稳定性。对于等比例混合的两种细菌菌悬液和DNA样品,ddPCR的最低检测限分别为103 CFU/mL和2.28 fg/μL,其检测灵敏度均为real-time PCR的10倍。非等比混合菌悬液和DNA样品检测结果表明,ddPCR可以同时检出两种病原菌的混合比例分别为1:100 (104:106 CFU/mL)和1:10 000 (2.28 fg/μL:22.8 ng/μL),检测灵敏度同样是real-time PCR检测的10倍。此外,ddPCR方法在人工接菌种子测试中可检测到带菌种子比例均为0.2%(n=500)的西瓜种子样品,同时在两种细菌带菌种子比例为1:10 (带菌率分别为0.2%和2%)时可以准确检出两个目标菌;而对于real-time PCR检测方法则只能在带菌率为1%(n=100)的接种样品中检出阳性。综上所述,本实验基于ddPCR技术建立了一种同时检测Ac和Psl两种重要葫芦科种传细菌的种子检测方法,为提高种传病原菌的检测灵敏度提供了新思路。

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文章来源

类型: 国内会议

作者: 赵子婧,芦钰,李健强,罗来鑫,徐秀兰

关键词: 种子带菌检测,西瓜嗜酸菌,瓜类角斑病菌

来源: 中国植物病理学会2019年学术年会 2019-07-20

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,农业基础科学,植物保护

单位: 中国农业大学植物保护学院种子病害检验与防控北京市重点实验室北京市农林科学院蔬菜研究中心农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室农业部都市农业(北方)重点实验室

分类号: S432.42

DOI: 10.26914/c.cnkihy.2019.020385

页码: 370

总页数: 1

文件大小: 53k

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