论文摘要
研究背景与目的:耐辐射奇球菌（Deinococcus radiodurans,DR）是一种耐受极端电离辐射的微生物。PprI在耐辐射奇球菌中起辐射响应总开关作用,PprM可能是一种PprI依赖的辐射响应的新型调控蛋白。本实验旨在构建稳定遗传表达抗辐射基因pprM/pprI的果蝇模型。研究抗辐射基因pprM/pprI转入果蝇后辐射抗性的影响,为辐射损伤治疗提供新思路。为监测核事故泄漏生物计量以及进一步研究耐辐射奇球菌的辐射防御机制及人类的辐射医学防护提供一定的实验依据。研究方法:1、用pGEX-6p-1-pprM、pDsRed1-N1-flag-pprI为PCR底物模板,扩增pprM、pprI基因,构建pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI载体。2、果蝇显微注射技术将pattb-UAST-HA-pprM和pattb-UAST-HA-pprI载体注射入果蝇胚胎中,构建转基因果蝇模型。3、提取辐照前后果蝇的总蛋白,并分别检测转基因果蝇和对照果蝇的总超氧化物歧化酶（SOD）活力、还原型谷胱甘肽（GSH）含量、过氧化氢酶（CAT）活力以及丙二醛（MDA）含量。设置维生素E处理组作为阳性对照对辐照前后果蝇的氧化损伤进行评价。研究结果:1、构建pattb-UAST-HA-pprI,pattb-UAST-HA-pprM载体成功。2、显微注射和筛选得到稳定遗传的pprI/pprM转基因果蝇,通过表型鉴定出pprM/pprI分别插入在果蝇的二号和三号染色体上。3、与对照组果蝇相比pprI转基因果蝇的氧化抗性及辐射抗性有所增强。结论:成功构建了PprM/PprI表达载体,通过显微注射和筛选得到了稳定遗传的pprI/pprM转基因果蝇品系,验证了pprI/pprM转基因果蝇的抗辐射能力。
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摘要Abstract主要英文缩略词第1章 绪论第2章 pprM和 pprI转基因果蝇模型建立 2.1 材料及仪器设备 2.1.1 实验所用菌株、质粒及培养条件 2.1.2 主要试剂 2.1.3 主要仪器设备 2.1.4 培养基、生化试剂的配制 2.1.5 实验果蝇品系及其培养条件 2.2 实验方法 2.2.1 细菌DNA质粒提取 2.2.2 凝胶DNA回收 2.2.3 DNA产物纯化 2.2.4 感受态大肠杆菌细胞的制备 2.2.5 大肠杆菌细胞的转化 2.2.6 PprM表达载体的构建 2.2.7 pattb-UAST-HA-pprI的构建 2.2.8 果蝇胚胎显微注射 2.2.9 pprM/pprI转基因品系果蝇的PCR检测 2.3 结果和分析 2.3.1 pprM基因的PCR扩增 2.3.2 pattb-UAST-pprM载体的鉴定 2.3.3 pattb-UAST-HA-pprM载体的鉴定 2.3.4 pprI基因的PCR扩增 2.3.5 pattb-UAST-HA-pprI载体的鉴定 2.3.6 pattb-UAST、pprI/ppr M转基因载体质粒图谱 2.3.7 pprM和 pprI转基因和对照果蝇品系表现型 2.3.8 pprM/pprI转基因品系果蝇基因组PCR结果 2.4 本章小结第3章 pprM/pprI转基因果蝇的辐射抗性研究 3.1 实验材料及仪器 3.1.1 实验动物及其培养条件 3.1.2 主要试剂 3.1.3 主要仪器设备 3.2 实验方法 3.2.1 实验分组 3.2.2 果蝇品系的杂交 3.2.3 果蝇总蛋白的提取与蛋白浓度测定 3.2.4 果蝇超氧化物歧化酶（SOD）活力检测 3.2.5 果蝇过氧化氢酶（CAT）活力检测 3.2.6 果蝇还原型谷胱甘肽（GSH）活力检测 3.2.7 果蝇丙二醛（MDA）含量检测 3.3 实验结果 3.3.1 SOD活力的影响 3.3.2 CAT活力的影响 3.3.3 GSH含量的影响 3.3.4 MDA含量的影响 3.3.5 vitE对果蝇幼虫辐照后蛹化率的影响 3.3.6 vitE对果蝇辐照后羽化率的影响 3.3.7 vitE对果蝇辐照后48 小时死亡率的影响 3.3.8 vitE对果蝇辐照后攀爬能力的影响 3.3.9 vitE对果蝇辐照后GSH含量的影响 3.3.10 vitE对果蝇辐照后CAT活力的影响 3.4 本章小结第4章 讨论第5章 结论参考文献文献综述 参考文献作者攻读学位期间的科研成果致谢
文章来源
类型: 硕士论文
作者: 贺特
导师: 何淑雅,唐旻
关键词: 显微注射,转基因果蝇,辐射抗性
来源: 南华大学
年度: 2019
分类: 基础科学
专业: 生物学
单位: 南华大学
基金: 国家自然科学基金项目《耐辐射奇球菌pprM基因靶RNAs,靶蛋白筛选及其抗辐射调控网络研究》,《特殊辐射环境生物DR-pprM基因辐射应激防御机制研究》湖南省教育厅科研重点项目(17A186)
分类号: Q78
DOI: 10.27234/d.cnki.gnhuu.2019.000637
总页数: 75
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标签：显微注射论文; 转基因果蝇论文; 辐射抗性论文;
pprM/pprI转基因果蝇模型构建及其辐射抗性研究
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