导读:本文包含了依赖的聚合酶论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,体外,大豆,基因,蛋白,烟草,腺苷。
依赖的聚合酶论文文献综述
赵春艳[1]（2019）在《贾第虫病毒RNA依赖RNA聚合酶互作蛋白的筛选与鉴定》一文中研究指出十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis),曾被称为蓝氏贾第虫(Giardia lamblia),简称贾第虫(Giardia),作为一种寄生性原虫,主要造成人和动物腹泻等临床症状,在世界范围内分布流行,严重威胁着动物和人类健康,但目前仍缺乏有效的药物或疫苗进行防控,究其原因主要是对贾第虫的致病机制不完全清楚。贾第虫作为一种“模式生物”,因此对贾第虫相关机制的研究显得尤为重要。寄生虫病毒专性寄生于虫体内,研究显示,原虫病毒能够影响原虫本身的致病性和毒力。相关报道表明贾第虫病毒感染后能抑制贾第虫的生长,降低贾第虫的致病性,从而减轻贾第虫病的临床症状,虽然贾第虫病毒的侵入可以改变贾第虫的生长发育特征,但贾第虫和贾第虫病毒之间的作用机制还需要进一步的深入研究。RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)作为dsRNA病毒编码的主要蛋白,研究表明RdRp蛋白在发挥其重要作用时,可与病毒其他成分或者宿主因子发生相互作用,但是关于十二指肠贾第虫病毒RdRp蛋白的相关研究还相对较少。因此,本研究通过构建贾第虫酵母双杂交cDNA文库,筛选RdRp蛋白的相互作用蛋白,并利用GST pull-down、免疫共沉淀、双分子荧光互补和Duolink?PLA技术分别验证RdRp蛋白与互作蛋白间的相互作用。贾第虫酵母双杂交cDNA文库的构建:通过Trizol法提取贾第虫滋养体(WBc2株)RNA,反转录为cDNA,利用SMART技术构建贾第虫酵母双杂交c DNA质粒文库,结果表明构建的文库库容为3.7×10~6 cfu,随机挑取的60个单克隆菌落中插入片段在400bp~2kbp范围内,文库的重组率约为100%。贾第虫病毒RdRp互作蛋白的筛选:利用基因工程技术,将PCR扩增得到的贾第虫病毒RdRp片段与诱饵载体pGBKT7重组构建诱饵质粒pGBKT7-RdRp,并将诱饵载体转化Y2HGold酵母感受态细胞。结果表明该诱饵蛋白在酵母细胞中成功表达,对酵母细胞无明显毒害作用,且无自激活现象。将pGBKT7-RdRp与cDNA文库质粒共转化感受态筛选互作蛋白,初步筛选出与RdRp相互作用的蛋白是伴侣蛋白J,α-半乳糖苷酶试验初步验证了RdRp与伴侣蛋白J存在相互作用。RdRp与伴侣蛋白J相互作用的体外验证:构建原核表达载体pET-32a-RdRp和pGEX-4T-1-伴侣蛋白J,诱导表达并纯化获得重组蛋白,结果显示二者均能可溶性表达蛋白,将表达纯化的重组蛋白RdRp与伴侣蛋白J共孵育,通过GST pull-down技术验证两种蛋白在体外存在相互作用。RdRp与伴侣蛋白J在细胞内相互作用的验证:构建真核表达载体pcDNA-His-RdRp和pcDNA-HA-伴侣蛋白J,共转染HEK-293T细胞,Western blot检测蛋白表达情况。结果显示RdRp与伴侣蛋白J均能在HEK-293T细胞中表达,免疫共沉淀结果表明两种蛋白存在相互作用。将构建的双分子荧光载体pbFos-RdRp和pbJun-伴侣蛋白J共转染到HEK-293T细胞,双分子荧光技术验证RdRp和伴侣蛋白J在HEK-293T细胞中存在相互作用。RdRp与伴侣蛋白J在十二指肠贾第虫内相互作用的验证:制备兔源RdRp蛋白和鼠源伴侣蛋白J蛋白多抗血清,利用Duolink?PLA技术验证RdRp和伴侣蛋白J在贾第虫体内的相互作用,发现红色荧光主要分布在贾第虫的细胞质中,结果表明RdRp和伴侣蛋白J在贾第虫内存在相互作用。伴侣蛋白J功能的初步研究:将浓度为100μM和200μM的抑制剂KNK437分别处理贾第虫滋养体,以降低伴侣蛋白J的基因表达,检测对贾第虫增殖和贾第虫病毒复制的影响。表明伴侣蛋白J表达量下降后可降低贾第虫滋养体的增殖以及贾第虫病毒的拷贝数,初步表明伴侣蛋白J对贾第虫病毒RdRp具有正调节作用。综上所述,通过构建贾第虫酵母双杂交cDNA质粒文库初步筛选出与RdRp存在相互作用的蛋白是伴侣蛋白J,利用GST pull-down、免疫共沉淀和双分子荧光互补技术验证了RdRp和伴侣蛋白J的相互作用,并利用Duolink?PLA技术进一步验证了RdRp和伴侣蛋白J在贾第虫的细胞质中存在相互作用,并初步研究发现其对贾第虫病毒呈正调控作用,这为深入研究贾第虫伴侣蛋白J对贾第虫病毒的作用提供了理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
付嘉玉[2]（2018）在《聚腺苷二磷酸核糖聚合酶-1（PARP-1）依赖的细胞损伤在体外循环后脑损伤机制中的实验研究》一文中研究指出目的本实验是以中国雄性小型猪为实验对象,建立深低温停循环后动物大脑损伤实验模型,通过神经系统损伤评分表评判中枢神经系统损伤水平,利用DWI检测技术明确脑损伤部位及取材,制作冰冻切片和石蜡切片,采用显微镜观察HE染色,电镜染色,Tunel染色及PARP-1免疫组化染色结果,从而明确PARP介导的细胞受损情况在深低温停循环后出现神经系统并发症中所发挥的作用,为术后脑损伤的预防和治疗提出一个新的线索。方法本实验所使用的动物符合实验动物的管理条例。1.选取中国雄性微小型猪15头,分成对照组(n=5)、实验组(n=5),实验组又分成单纯体外循环(CPB)组(n=5)和深低温停循环(DHCA)组(n=5)。对照组给予全身麻醉,不给予体外循环操作;CPB组除不给予深低温操作外,其余手术步骤与DHCA组一样。行深低温停循环操作,术后给予心电监测、多巴胺等血管活性药物给予循环支持,确保实验动物存活;2.动物模型DWI影像:在手术开始前1天,给所有动物的头部行DWI检查作为实验对比结果,以排除实验动物原有的脑组织损伤病灶;手术结束后2天,再次行活体动物脑的DWI检查,并行手术前、手术后1天及2天神经行为系统评分。3.实验组动物脑组织行病理学检测:HE染色、电镜检测、TUREL检测及PARP-1免疫组化。结果1.HE染色可见:深环组细胞形状不规整,排列疏散且杂乱,细胞层次减少,不能辨析胞核与胞浆的相对界限,细胞核固缩呈显为多角形状,染色质为红染。细胞脱失。DHCA组可见染为红色的神经元以及高度固缩的细胞核的数目明显大于对照组和CPB组。2.电镜染色可见:深低温停循环小组可见核膜内凹、染色质边集,线粒体发生了显着变化,表现为肿胀、空泡样变性,脊不规整等改变比对照组和体外循环组明显。3.Tunel染色可见:深低温停循环小组阳性为棕褐色的细胞明显多于对照小组,肿胀样改变的神经元,高度固缩的细胞核的数目及明显大于对照组和体外循环组。4.PARP-1免疫组化可见:深低温停循环组的细胞核表现为固缩的多角形,染色质染为红色,PAR的表达程度明显高于对照组和体外循环组。结论1.PARP-1的活性增高及细胞坏死和(或)凋亡这些级联的分子事件在体外循环后脑损伤的分子机制中有着不可忽视的作用。2.该实验结论为最新的脑损伤研究成果及时的应用于该领域提供依据,有助于为体外循环术后脑损伤的防治提供新的思路。(本文来源于《沈阳医学院》期刊2018-03-01）
于成明[3]（2017）在《烟草丛顶病毒RNA依赖RNA聚合酶的-1型移码翻译机制研究》一文中研究指出烟草丛顶病是由番茄丛矮病毒科(Tombusviridae)幽影病毒属(Umbravirus)成员烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)和黄症病毒科(Luteoviridae)成员烟草扭脉病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)复合侵染引起的一种系统性侵染病害。TBTV基因组为一条正义单链RNA,全长4,152个核苷酸,5’端没有帽子,3’端没有poly(A)尾,共有4个开放阅读框(ORF)。ORF1编码35 KDa蛋白,ORF1的C末端与ORF2的N端有8个密码子的重迭区,ORF2编码63 KDa蛋白。ORF1通过-1位的移码翻译机制表达产生TBTV RNA依赖的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp),其分子量约等于ORF1和ORF2的分子量之和。本研究在已经完成TBTV RdRp-1位移码翻译表达的定性分析基础上,主要对TBTV RdRp的-1位移码翻译机制的多层次调控元件进行定位和结构特征分析。首先通过序列分析,初步定位了-1型移码必需的七核苷酸滑动序列(特征为:XXx YYY Z,X为任何碱基、Y通常为A或U、Z是除G外的任何碱基,X和x可以是形同碱基也可以是不同碱基)是~(946)GGAUUUU。G946A、U950C、U952G的突变可导致移码效率降低到野生型的20%~40%,说明~(946)GGAUUUU为TBTV RdRp的-1位移码所需的七核苷酸滑动序列。在定位了七核苷酸滑动序列的前提下,在其下游构建3个不同类型的突变体:缺失叁个碱基(~(952)UGC-De)、插入3个碱基(~(955)CAU-In)、插入6个碱基(~(955)CAUCAC-In),分析七核苷酸滑动序列与其下游潜在的局部RNA结构的距离对移码效率的影响。突变试验表明,七核苷酸滑动序列与下游潜在RNA结构元件之间的距离为6~9个碱基时,可保证正常的移码效率。在Mfold分析预测TBTV RNA结构的基础上,通过RNA结构体外分析技术---SHAPE分析七核苷酸滑动序列下游的RNA结构,分析表明七核苷酸滑动序列下游存在3个大小不等的茎环结构,并且存在一个假结点。突变分析表明,这3个茎环均参与TBTV RdRp的-1位移码,并且假结点的存在对于-1位移码至关重要。通过构建覆盖TBTV全基因组的18个亚克隆RNA片段,结合凝胶阻滞实验(EMSA)定位了远距离RNA-RNA互作的区域,位于亚克隆S5和亚克隆S18。其中S5(880-1120)包含-1位移码所需的七核苷酸滑动序列和下游RNA结构;而S18是TBTV的3’末端区域。利用线性化切割结构分析(In-lineprobing)技术分析了S5区域的结构以及与S18发生远距离互作后的结构,初步定位了远距离互作的2个潜在位点,分别位于七核苷酸滑动序列的第一个茎环和第叁个茎环;利用线性化切割结构分析(In-lineprobing)技术分析了TBTV 3’末端区域的结构以及与S5发生远距离互作后的结构,发现远距离互作位点位于茎环结构Pr的Loop区域。通过突变分析确认了茎环Pr中参与远距离互作的位点是~(4137)ACU,其突变降低移码效率至野生型的20%左右。本研究定位了TBTV RdRp-1位移码机制的多层次调控元件:七核苷酸滑动序列~(946)GGAUUUU,以及位于下游6~9 nt处的3个茎环结构和1个假结点,同时TBTV 3’末端茎环结构Pr的Loop区域与移码位点下游的茎环结构形成2处远距离RNA-RNA互作。该研究对于正单链RNA病毒-1位移码翻译调控机制提出了新的调控模型,提供了新的研究数据,同时为烟草病毒病的防治提供了新的靶标和数据支持。(本文来源于《山东农业大学》期刊2017-05-01）
逯晓明,于成明,王国鲁,王德亚,耿国伟[4]（2017）在《烟草丛顶病毒RNA依赖RNA聚合酶(RdRp)介导的体外复制体系》一文中研究指出通过重迭PCR扩增得到烟草丛顶病毒(Tobacco bushy top virus,TBTV)中国分离物RdRp的编码序列,构建以pMALC2X为基础载体的原核表达载体pMAL-TB-RdRp。0.5 mM IPTG诱导可特异性表达分子量约为120 kDa的MBP-RdRp融合蛋白。温度梯度实验显示,18℃下诱导表达的MBP-RdRp融合蛋白的可溶性比例较高,约17%;经亲和层析纯化的MBPRdRp可特异性识别TBTV正链和负链的3'末端序列,催化体外复制;对正负链的3'末端的体外复制效率存在差别,识别负链3'末端的体外复制效率明显高于正链3'末端。本研究创建的TBTV RdRp介导的体外复制体系为进一步研究TBTV基因组复制调控奠定了基础。(本文来源于《植物病理学报》期刊2017年06期）
张茜[5]（2016）在《依赖于环指蛋白8的人DNA聚合酶δ体外泛素化反应探讨》一文中研究指出在真核生物B-家族叁种主要DNA聚合酶(Polα、Polδ和Polε)中,Polδ是最重要的一种复制性聚合酶,除了在染色体DNA复制过程中起重要作用外,它还参与多种形式的DNA损伤修复过程,在维持细胞周期的正常调节以保证基因组结构的完整性和遗传稳定性方面具有特殊的重要意义。人源DNA聚合酶δ是由四个亚基组成的异源四聚体:催化大亚基p125、小亚基p50、以及另外两个辅助亚基p68和p12。前期的研究发现,在损伤试剂处理或射线诱导而引起DNA损伤的情况下,最小亚基p12在ATR/Chk1通路调控下以泛素化依赖(ubiquitinylation-dependent)的形式经蛋白酶体降解,从而导致细胞内Polδ由原来的四聚体形式Polδ4转换为叁聚体Polδ3以应对DNA损伤,并可能在随后的修复过程中起着重要作用。研究表明,p12的降解可能受到多种E3介导的多泛素化途径的调控,但截止到目前,仅鉴定出两种E3连接酶,环指蛋白8(Ring Finger Protein 8,RNF8)和CRL4Cdt2,它们均介导了以p12为靶标的多泛素化修饰。有报道指出,p68亚基在体内也能够被泛素化和类泛素化修饰,但在应对DNA损伤的过程中,Polδ究竟有多少亚基、具体哪个亚基、被何种E2/E3系统所介导、是发生多泛素还是单泛素修饰等的详细机制均不是很清楚。几乎所有主要的DNA修复途径、损伤避免机制和细胞周期检查点响应等过程都或多或少的受到泛素化和(或)类泛素化SUMO修饰途径的调控。泛素化和SUMO参与多种DNA的修复过程,如跨损伤合成(Translesion Synthesis)、核苷酸切除(Nucleotide Excision)、同源重组(Homologous Recombination)等。基于泛素化修饰在各种DNA损伤修复途径中的重要作用,本论文研究拟对Polδ的四个亚基分别进行体外泛素化分析,为揭示Polδ的泛素化修饰在DNA损伤应答过程中的未知功能提供参考。本研究应用昆虫-杆状病毒表达系统,通过制备具E3连接酶活性的RNF8,结合外购的多种E2缀合酶,对Polδ的四个亚基分别进行泛素化修饰的体外分析;同时通过外购的E2/E3系统-RAD6/RAD18,对Polδ各亚基也进行了初步的泛素化体外分析。结果表明,RNF8既可介导p50单泛素化修饰,又可介导p12亚基的多泛素化修饰,但不能介导p125亚基的泛素化。RAD6/RAD18作为E2/E3酶,在DNA基质的存在下,能够介导p50的泛素化修饰,类似条件下,RAD6/RAD18也可介导p12的单泛素化修饰。人类疾病,特别是癌症疾病对人类的健康和生存构成重大威胁,是世界各国面临的最重要社会问题之一。通过本论文的研究,将进一步加深对Polδ泛素化修饰调控的理解,探索涉及维持基因组稳定性和控制细胞有序分裂的新机制,为今后以Polδ作为某些小分子抑制剂的潜在靶标,设计新的肿瘤诊断和治疗手段来抗击癌症疾病提供理论参考。(本文来源于《江苏大学》期刊2016-06-01）
王明君,张青松,曹立赢,温英武,费乐学[6]（2016）在《甲基硫代腺苷对结肠癌RKO细胞增殖及RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录影响实验研究》一文中研究指出目的:探讨甲基硫代腺苷(MTA)对结肠癌RKO细胞增殖的影响及其转录水平相关机制。方法:采用MTT比色技术及细胞计数作生存曲线的方法分析MTA对结肠癌RKO细胞增殖的影响,并采用Realtime PCR的方法分析RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5SrRNA)。结果:0.5、1、2、3mmol/L MTA作用16h后,RKO细胞的增殖能力分别为对照组的(84.1±4.5)%、(69.4±5.2)%、(55.3±3.8)%、(40.9±3.5)%(P均<0.01);MTA 0.5mmol/L作用4、8h后,RKO细胞tRNAs、5SrRNA的转录水平分别为对照组的0.584±0.033、0.624±0.035,0.453±0.025、0.372±0.027(P均﹤0.01)。结论:MTA对RKO细胞具有明显的抗肿瘤活性,且对RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录的下调可能起到重要作用。(本文来源于《陕西医学杂志》期刊2016年03期）
张青松,曹立赢,钟烁,温英武,高建超[7]（2016）在《酒精诱发乳腺癌过程中RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录与雌激素受体α表达的关系》一文中研究指出目的探讨酒精诱发乳腺癌的分子机制。方法采用Realtime PCR方法分析酒精对雌激素受体α(ERα)不同表达状况的乳腺细胞系、酒精联合雌激素MCF-7细胞系以及酒精对转染ERαsiRNA的MCF-7细胞系的RNA聚合酶Ⅲ依赖基因(tRNAs、5S rRNA)的转录水平。结果酒精对ER+乳腺细胞系tRNAs、5S rRNA上调水平(7~8倍)明显高于ER-乳腺细胞系(2~3倍)(P<0.01);酒精和雌激素联合处理对MCF-7细胞系tRNAs、5S rRNA的转录水平的上调作用(12~14倍)明显高于酒精(7~8倍)或雌激素(2~3倍)单独作用组(P<0.01);酒精对转染ERαsiRNA组MCF-7细胞系(2~3倍)tRNAs、5S rRNA的转录水平的上调作用明显低于未转染组(6~8倍)(P<0.01)。结论酒精诱发乳腺癌过程中RNA聚合酶Ⅲ依赖基因转录水平的上调依赖于ERα的表达。(本文来源于《广东医学》期刊2016年01期）
丁超,张兰,曹洁,于文强[8]（2015）在《RNA依赖的RNA聚合酶(RdRP)与非编码RNA(ncRNA)调控的研究进展》一文中研究指出RNA依赖的RNA聚合酶(RNA dependent RNA polymerase,RdRP)是一类以单链RNA为模板合成互补RNA链的聚合酶。根据其来源可分为病毒RdRP和细胞RdRP,病毒RdRP对病毒基因组复制及病毒引起的宿主免疫反应有重要作用,宿主细胞RdRP主要参与RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象。越来越多研究证明RdRP的功能与非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)密不可分,本文对病毒RdRP、细胞RdRP与ncRNA调控之间的关系作了较详细的阐述,同时对丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)诱发的肝癌机制提出新的观点。(本文来源于《复旦学报(医学版)》期刊2015年02期）
吴冰月,沈良,宋普文,陈华涛,崔瑾[9]（2015）在《大豆RNA依赖的RNA聚合酶基因GmRDR1的克隆与表达特性分析》一文中研究指出为了寻找大豆抗病新基因,培育大豆新型抗性品种,利用同源克隆的方法从大豆品种科丰1号中分离出1个新的GmRDR1基因,并对其进行序列分析,组织表达、抗逆境胁迫表达分析及该基因的亚细胞定位研究。结果表明:GmRDR1基因位于大豆基因组的第2号染色体,基因全长为3 956 bp,其中ORF为3 378 bp,编码1 125个氨基酸,相对分子量和等电点分别为279.72×103和4.63;GmRDR1含有RDRs家族的保守序列"DLDGD";该基因在所有被检测组织中均表达,并且在叶中的表达量最高;荧光定量结果发现:在大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)处理下,GmRDR1在抗病材料科丰1号中的表达量显着高于感病材料南农1138-2。盐及干旱胁迫下,48 h之内,该基因的表达量明显升高,SA诱导条件下该基因在6 h出现了早期响应,冷害处理下24 h表达量出现了突然的升高。GmRDR1基因的亚细胞定位结果表明:该基因所编码的蛋白定位在细胞核里。根据以上结果判定GmRDR1基因参与了大豆对SMV的抗性反应,并且能够强烈响应盐和干旱的胁迫,因此该基因在大豆抗逆分子育种中具有较好的应用价值。(本文来源于《大豆科学》期刊2015年01期）
吴冰月,陈华涛,陈新[10]（2014）在《大豆依赖RNA的RNA聚合酶基因GmRDR6a、GmRDR6b以及GmRDR1的克隆及表达特性分析》一文中研究指出植物中依赖RNA的RNA聚合酶(RDRs)主要通过基因沉默途径参与植物的生长发育调节、逆境表达等多种生物学过程,目前已经鉴定出3种功能独特的基因RDR1、RDR2和RDR6,但在大豆中没有相关报道。本研究利用同源克隆的方法从大豆品种‘科丰一号,中分离出2个RDR6基因和1个RDR1基因,分别将其命名为GmRDR6a、GmRDR6b和GmRDR1,对其进行序列分析,植物组织表达,抗逆境胁迫表达分析、亚细胞定位分析及构建植物过量表达载体。结果表明GmRDR6a基因位于大豆基因组的6号染色体上,基因全长为4 389 bp,包含一个长度为744 bp的内含子,其ORF长度为3 615 bp,编码1 204个氨基酸,相对分子量和等电点分别为297.5×10~3和4.86;GmRDR6b基因位于大豆基因组的4号染色体上,基因全长为4 002 bp,包含一个长度为387 bp的内含子,其ORF长度为3 615 bp,编码1 204个氨基酸,相对分子量和等电点分别为296.89×10~3和4.86;GmRDR1基因位于大豆基因组的第2号染色体,该基因全长为3 956bp,其中ORF为3 378bp,编码1125个氨基酸,相对分子量和等电点分别为279.72×10~3和4.63;GmRDR6a、GmRDR6b以及GmRDR1都含有RDRs家族的保守序列DLDGD;这3个基因在所有被检测组织中均表达,GmRDR6a和GmRDR6b基因在花中的表达量最高,GmRDR1基因在叶中的表达量最高;荧光定量结果发现:在大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)处理下,3个基因在抗病材料‘科丰一号'中的表达量均显着高于感病材料‘南农1138-2',在非生物胁迫下,GmRDR6a基因在盐、干旱处理下根、茎、叶组织中的表达量均提高,其中盐处理下根中的表达量最高,ABA诱导条件下出现早期响应,但是在冷害处理下该基因的表达量没有明显变化;GmRDR6b基因在盐、ABA处理下,表达量很高,冷害处理下出现早期响应,干旱条件下该基因表达趋势不明显;GmRDR1基因在盐及干旱胁迫下,48 h之内,该基因的表达量明显升高,SA诱导条件下6 h出现了早期响应,冷害处理下24 h表达量出现了突然的升高。因此,判断这3个基因参与大豆对SMV的抗性反应,并且能够强烈响应盐和干旱的胁迫。亚细胞定位结果显不这3个基因均定位在细胞核上,可见其主要在细胞核内发挥功能;分别构建这两个基因的过量表达载体pMDC83-GmRDR6a、pMDC83-GmRDR6b和pMDC83-GmRDR1,为进一步米用转基因方法验证该基因的功能奠定了基础。(本文来源于《第24届全国大豆科研生产研讨会论文摘要集》期刊2014-08-20）
依赖的聚合酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的本实验是以中国雄性小型猪为实验对象,建立深低温停循环后动物大脑损伤实验模型,通过神经系统损伤评分表评判中枢神经系统损伤水平,利用DWI检测技术明确脑损伤部位及取材,制作冰冻切片和石蜡切片,采用显微镜观察HE染色,电镜染色,Tunel染色及PARP-1免疫组化染色结果,从而明确PARP介导的细胞受损情况在深低温停循环后出现神经系统并发症中所发挥的作用,为术后脑损伤的预防和治疗提出一个新的线索。方法本实验所使用的动物符合实验动物的管理条例。1.选取中国雄性微小型猪15头,分成对照组(n=5)、实验组(n=5),实验组又分成单纯体外循环(CPB)组(n=5)和深低温停循环(DHCA)组(n=5)。对照组给予全身麻醉,不给予体外循环操作;CPB组除不给予深低温操作外,其余手术步骤与DHCA组一样。行深低温停循环操作,术后给予心电监测、多巴胺等血管活性药物给予循环支持,确保实验动物存活;2.动物模型DWI影像:在手术开始前1天,给所有动物的头部行DWI检查作为实验对比结果,以排除实验动物原有的脑组织损伤病灶;手术结束后2天,再次行活体动物脑的DWI检查,并行手术前、手术后1天及2天神经行为系统评分。3.实验组动物脑组织行病理学检测:HE染色、电镜检测、TUREL检测及PARP-1免疫组化。结果1.HE染色可见:深环组细胞形状不规整,排列疏散且杂乱,细胞层次减少,不能辨析胞核与胞浆的相对界限,细胞核固缩呈显为多角形状,染色质为红染。细胞脱失。DHCA组可见染为红色的神经元以及高度固缩的细胞核的数目明显大于对照组和CPB组。2.电镜染色可见:深低温停循环小组可见核膜内凹、染色质边集,线粒体发生了显着变化,表现为肿胀、空泡样变性,脊不规整等改变比对照组和体外循环组明显。3.Tunel染色可见:深低温停循环小组阳性为棕褐色的细胞明显多于对照小组,肿胀样改变的神经元,高度固缩的细胞核的数目及明显大于对照组和体外循环组。4.PARP-1免疫组化可见:深低温停循环组的细胞核表现为固缩的多角形,染色质染为红色,PAR的表达程度明显高于对照组和体外循环组。结论1.PARP-1的活性增高及细胞坏死和(或)凋亡这些级联的分子事件在体外循环后脑损伤的分子机制中有着不可忽视的作用。2.该实验结论为最新的脑损伤研究成果及时的应用于该领域提供依据,有助于为体外循环术后脑损伤的防治提供新的思路。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
依赖的聚合酶论文参考文献
[1].赵春艳.贾第虫病毒RNA依赖RNA聚合酶互作蛋白的筛选与鉴定[D].吉林大学.2019
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